熊慧玲
- 作品数：15 被引量：28H指数：3
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 检测C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖含量的脱氧胆酸钠沉淀法的建立被引量：2
- 2014年
- 目的 建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group C meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,CPS-TT）中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法.方法 在不同pH条件下用脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证.结果 DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3％.DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5％.结论 DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制.
- 王公孝王学林许蓉华熊慧玲
- 关键词：化学沉淀
- 化学法测定发酵液中的C群流脑多糖被引量：1
- 2014年
- 目的 根据《中国药典》（2010年版）收入的C群流脑多糖测定的唾液酸法,结合发酵工艺过程监测的需要,建立C群脑膜炎球菌发酵液中C群流脑多糖定量测定的方法.方法 发酵液经离心（12000r/min,10min）除去菌体,上清液用1.5μL10％十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）沉淀多糖.多糖用1mol/L CaC12溶液溶解后进行显色、有机相萃取.有机相于波长580nm测定光吸收值,从标准曲线得到唾液酸的浓度并计算出发酵液中C群流脑多糖的浓度.结果 试验表明此法用于发酵液中C群流脑多糖含量的测定稳定性好,回收率在85％～115％,能够很好反映C群脑膜炎球菌发酵过程中C群流脑多糖的产量变化.结论 本法准确性高,重复性好,结果可靠,可用于发酵液中C群流脑多糖的定量分析.
- 王公孝王斌王学林夏永熊慧玲
- 关键词：C群脑膜炎球菌唾液酸发酵液
- C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性
- 2013年
- 用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化C群脑膜炎球菌多糖(GCMP),以己二酰肼(ADH)作为连接子,与重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白64 KD(rP64K)在碳二亚胺的(EDAC)作用下结合,制备GCMP-P64K结合物。纯化后免疫NIH小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GCMPIgG抗体水平,并GCMP-TT结合物比较载体诱导的免疫抑制。所制备多糖-蛋白结合物(GCMP-P64K)保持了GCMP抗原特异活性,结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GCMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。
- 王公孝刘璐王斌秦敏熊慧玲
- 关键词：C群脑膜炎球菌结合疫苗载体蛋白免疫原性
- 磷酸铝佐剂吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响
- :探讨磷酸铝佐剂及其吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响.方法:磷酸铝佐剂在不同条件下,与9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合物进行吸附,吸附率分别为17％,61％和80％,三种制剂经腹腔免疫NIH小鼠,E...
- 杨溢尧刘威廖红梅杜游王凯葛永红熊慧玲江山崔长法
- 关键词：吸附率免疫原性
- 顶空气相色谱法测定A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺的残留量被引量：5
- 2016年
- 目的建立A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的顶空气相色谱测定法,并进行验证。方法采用标准溶液加入法,以10%无水碳酸钠溶液为溶剂制备混合对照品及供试品溶液,采用顶空气相色谱法进行检测,色谱条件为：采用Agilent DB-1毛细管柱（30 m×0.53 mm×5.0μm）;柱流速：4 ml/min;载气：氮气,分流比：10：1;程序升温：柱温起始温度为40℃,保持5 min,以10℃/min的升温速率升至200℃,保持2 min;进样口温度：200℃;FID检测器温度：250℃;顶空瓶平衡温度：80℃,平衡时间30 min。对方法的系统适应性、线性范围、重复性、检测限和定量限、准确性进行验证。采用建立的方法检测4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液的乙腈及三乙胺残留量。结果各待测组分理论塔板数不低于5 000,分离度不低于1.5;乙腈和三乙胺的线性方程分别为y=3 730.2 x＋1.210 6和y=64 699 x＋11.772,r均为0.999 9,线性范围分别为2.002~100.1μg/ml和1.508~75.40μg/ml;同一混合对照品溶液重复检测5次乙腈和三乙胺残留量的RSD值分别为1.34%和3.10%;乙腈和三乙胺检测限分别为0.020 02和0.007 54μg/ml,定量限分别为0.066 72和0.030 16μg/ml;样品高、中、低3个浓度的乙腈和三乙胺平均加样回收率分别为102.60%和101.92%,RSD分别为1.76%和4.12%。4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中均未检出乙腈及三乙胺。结论该方法具有良好的重复性、准确性,可用于A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的检测。
- 赵荣丽刘峰薛千成潘海龙吕雪艳熊慧玲
- 关键词：乙腈三乙胺残留量
- C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗制备工艺的优化被引量：5
- 2012年
- 目的优化C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗的制备工艺。方法分别采用衍化的降解多糖与TT结合、衍化TT与降解多糖结合和1-氰基-4-二甲基氨基吡啶.四氟化硼(CDAP)活化降解多糖后衍化再与TT结合的方法制备C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物PSAH-TT、PS-AHTT和PSCDAPAH-TT,并进行生化指标和抗原性检测,与溴化氰(CNBr)活化多糖衍化与TT的结合物PSCNBrAH-TT进行免疫原性比较,确定最适制备工艺,并制备2批结合疫苗,与市售疫苗进行免疫原性比较。结果 3种方法制备的多糖蛋白结合物生化指标存在差异,以PSCDAPAH-TT收率最高,且均保持了多糖的抗原性及免疫原性,并有免疫加强效应;PSCDAPAH-TT免疫2针后抗体GMT水平高于PSAH-TT和PS-AHTT,差异有统计学意义(P<0.05),3针后抗体GMT水平仍高于PSAH-TT和PS-AHTT,但差异无统计学意义(P>0.05),PSCDAPAH-TT免疫2针和3针后抗体GMT水平均高于PSCNBrAH-TT,且2针后差异有统计学意义(P<0.05),3针后差异也无统计学意义(P>0.05),但制备的2批PSCDAPAH-TT疫苗免疫2针和3针后的抗体GMT水平均明显高于市售疫苗,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经CDAP活化降解多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的疫苗具有较好的免疫原性。
- 熊慧玲王公孝许蓉华谭柯邹澄川王学林刘璐吴先礼何琴林建平
- 关键词：脑膜炎球菌多糖疫苗结合疫苗免疫原性
- 氢氧化铝佐剂对铜绿假单胞菌11型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性和免疫保护性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的评价氢氧化铝[Al(OH)3]佐剂对铜绿假单胞菌11型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性和免疫保护性的影响。方法用热酚水法提取铜绿假单胞菌11型(IATS 11)菌株的脂多糖(LPS),去除类脂A并纯化O-特异性多糖(O-SP),用1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化O-SP,己二酸二肼(ADH)作连接臂,在乙基二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)作用下,与破伤风类毒素(TT)结合制备出O-SP-TT结合物,并对该结合物进行添加Al(OH)3佐剂和不添加该佐剂的小鼠免疫原性试验和免疫保护性试验。结果加有Al(OH)3佐剂的结合物在小鼠免疫原性试验中,产生了高效价的IgG抗体,与不添加该佐剂试验组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫保护性试验表明,添加Al(OH)3佐剂结合物免疫小鼠对5～10 LD50活菌的腹腔攻击具有良好的保护作用。结论 Al(OH)3佐剂对本结合物有优良的免疫增强作用,添加该佐剂的结合物可望有效防止IATS 11型铜绿假单胞菌感染。
- 谢茂超陈明拓姜晓杨硕吴泓舟王学林熊慧玲葛永红
- 关键词：铜绿假单胞菌O-特异性多糖结合物免疫原性免疫保护性
- 1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼活化A群脑膜炎球菌多糖制备的结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性被引量：7
- 2014年
- 目的分析1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化A群脑膜炎球菌多糖(group A meningococcal polysaccharide,Men APS)制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性。方法用CDAP活化多糖后,己二酰肼(adipic dihydrazide,ADH)衍化,制备多糖-酰肼基衍生物,在碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopmpyl)carbodiimide,EDAC]作用下,与TT偶联,制备A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液(Men APSCDAP-TT),考察其免疫特性;将Men A PSCDAP-TT与C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液混合,制备A、C群脑膜炎球菌结合疫苗(Men ACPSCDAP-TT),再与市售的采用溴化氰(CNBr)活化多糖制备的A、C群脑膜炎球菌结合疫苗(Men ACPSCNBr-TT)进行抗A群多糖Ig G抗体水平的比较。连续制备12批结合疫苗原液及9批结合疫苗,原液参考《中国药典》三部(2010版)进行各项检定,疫苗进行抗A群多糖Ig G抗体水平的检测。结果 Men APSCDAP-TT具有T细胞依赖性抗原特性;Men ACPSCDAP-TT免疫2次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT明显高于市售疫苗免疫2次后水平,差异有统计学意义(P均<0.01),也高于或相似于市售疫苗免疫3次后水平,但差异无统计学意义(P均>0.05);免疫3次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT仍高于或相似于市售疫苗,但差异无统计学意义(P>0.05)。连续制备的12批结合疫苗原液,内毒素含量均低于10 EU/μg多糖,未检出游离蛋白,多糖/蛋白值、结合多糖含量、结合物分子大小分布、EDAC和ADH残留均符合A群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程(试行)YBS01112006的要求,主要检测指标及多糖回收率趋势分析基本在均数±2标准差内;9批Men ACPSCDAP-TT免疫后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT均在A群脑膜炎球菌多糖的60倍以上。结论经CDAP活化多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的免疫原性,制备工艺稳定、可靠,为规
- 熊慧玲王公孝谭柯许蓉华王学林刘璐
- 关键词：结合疫苗免疫原性稳定性
- C群流行性脑膜炎球菌多糖分批发酵动力学模型的建立被引量：3
- 2014年
- 目的建立C群流行性脑膜炎球菌多糖50 L罐分批发酵动力学模型,为实现对C群流行性脑膜炎球菌多糖发酵过程的工艺控制、优化及其放大提供理论依据。方法利用分批发酵的数据,以Logistic方程建立菌体生长动力学模型,以Leudedeking-Piret微分方程建立产物合成动力学模型,以底物消耗的物料平衡方程建立底物消耗的动力学模型,并应用Origin软件进行模型拟合,获得3个模型的参数。结果菌体的最大比生长速率(μmax)为0.731 2 h-1,最大菌体浓度(Xmax)为3.949 5 g/L,与菌体生长速率关联的产物合成常数(a)为0.004 97 g/(L·h),与菌体浓度关联的产物合成浓度(β)为0.015 44 g/(L·h),菌体对底物的得率(Yx)为1.905 2 g/g,产物对底物的得率(Yp)为0.130 1 g/g,菌体的维持因子(m)为1.070 1。结论建立的动力学模型能较好地反映C群流行性脑膜炎球菌多糖分批发酵过程中菌体生长、C群多糖合成和基质消耗的的变化规律。
- 夏永王斌王公孝李应伟王智杰王学林许蓉华邓雪莲熊慧玲
- 关键词：多糖发酵动力学模型
- 化学法测定发酵液中的C群流脑多糖
- 目的：根据《中国药典》(2010年版)收入的C群流脑多糖测定的唾液酸法,结合发酵工艺过 程监测的需要,建立C群脑膜炎球菌发酵液中C群流脑多糖定量测定的方法.方法：发酵液经离心 (12000r/min,10min )除去菌...
- 王公孝王斌王学林夏永熊慧玲
- 关键词：C群脑膜炎球菌唾液酸发酵液
