汪良
- 作品数：78 被引量：351H指数：10
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省科技攻关计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- shRNA沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨DNMT1在膀胱肿瘤形成过程中的作用机制。方法实验分为空白对照组(给予脂质体)、HK组(含无效干扰序列的质粒)及pshRNA-DNMT1组;常规培养膀胱癌T24细胞株,用脂质体Lipofectamine 2000将构建成功的重组质粒pshRNA-DNMT1转染进入T24细胞,然后进行RT-PCR、Western blot检测各组DNMT1 mRNA及蛋白质水平变化;进行MTT、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组T24细胞增殖和凋亡情况。结果重组质粒pshR-NA-DNMT1成功转染进入膀胱癌T24细胞;经RT-PCR检测pshRNA-DNMT1组DNMT1 mRNA表达减少,24、48、72h的抑制率分别是28.44%、52.48%、70.91%;转染pshRNA-DNMT1后,T24细胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分别为24.27%、57.79%、69.74%;在MTT检测中,pshRNA-DNMT1组的细胞增殖抑制率在24、48、72 h分别为(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,与空白对照组比较各时间点差异均有极显著性意义(均P<0.01);转染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1组细胞凋亡率分别为(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,与空白对照组比较差异均有极显著性意义(均P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌细胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表达,并在一定程度上抑制T24细胞的增殖和促进凋亡。
- 张士龙曾甫清彭世波董继华廖贵益汪良
- 关键词：细胞增殖膀胱肿瘤
- 输尿管镜手术中输尿管完全撕脱伤的处理被引量：4
- 2017年
- 目的:本文旨在分析输尿管镜手术中发生输尿管两端完全撕脱伤的原因及治疗方式,并探讨可能的预防措施。方法:回顾性分析急诊接诊的输尿管镜手术中发生输尿管两端完全性撕脱伤的3例病例,并对其发生原因、处理方式及预防措施进行探讨。结果:3例均为男性患者,术中观察到输尿管壁内段存在相对狭窄,进镜过程中受阻,用力推进输尿管镜时阻力消失;随后在退镜操作时均发现存在阻力,输尿管镜无法撤出,用力退镜时发生输尿管撕脱伤。1例术中探查见输尿管两端完全性撕脱,近端位于肾盂输尿管交界处(UPJ)下方约1.0cm处,远端位于输尿管膀胱交界处(UVJ)处,行左侧肾脏切除术;1例术中探查见输尿管两端完全性撕脱,近段位于UPJ下方约4.0cm处,远端位于UVJ处,行Boari膀胱瓣术;1例术中行输尿管镜探查见输尿管远端于UVJ处离断,改行左侧经皮肾镜手术探查见近段输尿管于UPJ下方约2.0cm处离断,遂行左肾造瘘术,术后1周行回肠代输尿管手术。3例患者均完成术后随访3~6个月。结论:输尿管壁内段相对狭窄是发生输尿管两端完全性撕脱伤的高危因素,操作不当是发生输尿管两端完全性撕脱伤的直接原因。损伤发生后,应根据患者病情和生理解剖等因素制定适当手术方式。输尿管壁内段相对狭窄存在时,应高度警惕发生输尿管撕脱伤的可能。
- 李文成陈朝晖汪良谌科侯腾李兵章小平
- 关键词：输尿管镜手术术中并发症膀胱瓣回肠代输尿管术
- 成人膀胱横纹肌肉瘤2例报告并文献复习被引量：1
- 2008年
- 目的探讨成人膀胱横纹肌肉瘤的病变特点及临床诊治方法。方法回顾性分析2例成人膀胱横纹肌肉瘤患者的临床资料。结果本组2例均经手术治疗,术后经免疫组化及病理检查证实为膀胱横纹肌肉瘤。术后2例患者均给予VAC方案规则化疗及放疗,恢复良好。其中例1随诊2年,未见复发;例2八个月后死于脑血管意外。结论成人膀胱横纹肌肉瘤属少见病,恶性程度高且症状不典型,确诊需要靠免疫组化及病理证实,以手术为主的综合治疗方式效果较好。
- 王竞曾甫清汪良廖贵益杜岳峰
- 关键词：膀胱肿瘤横纹肌肉瘤成人
- 尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性被引量：2
- 2005年
- 目的：研究尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性。方法：采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测膀胱癌细胞株BIU-87和其他多种非膀胱癌细胞株在转染含尿路斑块蛋白Ib启动子和Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac前后Smac mRNA和蛋白质的表达变化。结果：BIU-87在转染后Smac mRNA的表达比转染前增强约2．1倍,Smac蛋白表达阳性细胞率也由转染前的约25．6％增加为转染后的约70．5％；非膀胱癌细胞株转染前后SmacmRNA及蛋白的表达没有显著性变化。结论：尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达具有膀胱癌靶向性及相当启动活性,为膀胱癌的靶向基因治疗研究奠定了基础。
- 廖贵益曾甫清岳相辉杜岳锋汪良
- 关键词：线粒体促凋亡蛋白膀胱癌膀胱肿瘤
- 下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用被引量：2
- 2007年
- 目的:观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法:构建XIAP基因反义真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株MKN-45,RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达.选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞,采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性:透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率;Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.结果:RT-PCR和Western blot证实,稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01),各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后,转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01),12.3%-16.3%(P<0.01).透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率分别为34.12%和32.5%,显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%,P<0.05).与MKN-45细胞比较,稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01),活性水平提高3.68倍(P<0.0 1).结论:通过反义RNA技术下调XIAP基因表达,能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性,增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.
- 郑丽端童强松汪良董继华侯晓华
- 关键词：胃癌XIAP基因反义RNA细胞凋亡
- Smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究被引量：5
- 2005年
- 目的 探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素 (MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法 脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T2 4细胞 3d后 ,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动 ,噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性 ,吖啶橙 溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡 ;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达。结果 T2 4细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡 ,两种方法检测细胞凋亡率 ,用 0 .0 5 g/L丝裂霉素处理的T2 4细胞凋亡率分别为 2 0 .5 0 %和 18.84% ,而经过转染Smac后用 0 .0 5g/L丝裂霉素处理的T2 4细胞凋亡率分别为 3 6.40 %和 3 3 .5 2 % ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡。
- 汪良曾甫清郑丽端陈方敏刘迎
- 关键词：丝裂霉素T24细胞膀胱癌细胞凋亡率溴化乙锭
- 膀胱良性上皮性肿瘤27例报告及文献复习被引量：5
- 2004年
- 目的 :探讨膀胱良性上皮性肿瘤的诊断与治疗方法。方法 :回顾性分析 2 7例膀胱良性上皮性肿瘤的诊断与治疗方法。术前经尿脱落细胞学检查、B超、CT、尿路造影、膀胱镜检查加活检诊断为乳头状瘤 10例 ,内翻性乳头状瘤 9例 ,分化I级乳头状癌 8例。 2 7例均行单纯经尿道膀胱肿瘤切除术 (TURBT)。结果 :术后经病理检查明确诊断为乳头状瘤 13例 (4例伴非典型性增生 ) ,内翻性乳头状瘤 14例 (4例伴非典型性增生 )。随访9个月～ 2年 ,乳头状瘤、内翻性乳头状瘤患者各 2例复发 ,复发率分别为 15 .4 %和 14 .3%。复发病例均伴有非典型性增生 ,无恶性进展。复发者经二次TURBT后随访至今未见再次复发。结论 :膀胱良性上皮性肿瘤的术前诊断主要依靠膀胱镜检查加活检 ,而确诊有赖于术后病理检查。TURBT是其首选治疗方法。对于不伴非典型性增生的乳头状瘤和内翻性乳头状瘤患者 ,术后可不作腔内灌药 ;而对于伴非典型性增生的患者 ,术后要常规腔内灌注抗癌药 ,以降低复发和防止恶变的可能。
- 廖贵益曾甫清汪良陈方敏
- 关键词：膀胱肿瘤乳头状瘤
- miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P<0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P<0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P>0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P<0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P<0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。
- 吕磊袁敬东操作亮黄韬章传华汪良曾甫清
- 关键词：前列腺癌PC3细胞细胞增殖
- 输尿管囊肿伴发结石的腔内微创治疗被引量：8
- 2009年
- 目的:评价腔内微创治疗输尿管囊肿伴结石的疗效。方法:回顾性分析2004年3月～2008年12月收治的12例输尿管囊肿伴发结石病例资料。囊肿位于左侧8例,右侧4例,均为单侧发病。9例伴输尿管囊内结石,3例并输尿管结石。输尿管囊肿采用经尿道输尿管囊肿切除术,术时保留上方囊壁作为抗反流的活瓣。结石采用输尿管镜钬激光碎石术。结果:12例患者均一次手术成功。术后随访3个月～1年,临床症状均消失,8例B超提示肾积水消失,4例明显减轻。4例行排尿性膀胱尿道造影未见明显反流现象。结论:使用腔内镜微创治疗输尿管囊肿伴发结石是一种简单有效的治疗方法。
- 鞠文陶维雄汪良肖亚军曾甫清肖传国
- 关键词：输尿管囊肿结石腔内镜钬激光
- Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定
- 2005年
- 合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著茎环结构的 4个位点 ,合成互补性反义寡核苷酸AS ODN1、AS ODN2 、AS ODN3 、AS ODN4并转染高表达survivin基因的胃癌细胞株MKN 4 5 .逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测发现MKN 4 5细胞的survivinmRNA和蛋白水平均有显著的下降 ;MTT比色法证实 6 0 0nmol LAS ODN1～AS ODN4转染 2 4h后细胞生长受到明显抑制 ,透射电镜、annexinⅤ FITC和PI双染色流式细胞术均检测到细胞凋亡 .说明运用随机寡核苷酸文库 RNaseH酶切割与计算机分析相结合的方法 ,在体外有效筛选出survivin的反义核酸结合位点 ,其相应的反义寡核苷酸能阻断survivin基因的生物学功能 .
- 郑丽端童强松杨渝珍陈方敏曾甫清汪良董继华
- 关键词：SURVIVIN基因基因表达
