目的探讨在炎性激活条件下的椎间盘退变(IDD)过程中miR-335-3p靶向调控趋化因子配体(CCL)5的机制及可能抑制IDD进展的方法。方法建立人髓核(NP)细胞的原代培养,肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导NP细胞,Trizol法获取NP细胞总RNA,随后对mRNA及miRNA进行高通量测序分析。对miR-335-3p靶向结合mRNA进行预测,结合STRING富集分析miRNA靶标基因,确定TNF-α影响NP细胞的关键基因。应用The Human Protein Atlas(https://www.proteinatlas.org/)分析CCL5及其下游调控蛋白受体趋化因子受体(CCR)5基因在免疫相关细胞中的表达水平。应用Targetscan预测miR-335-3p与CCL53′UTR序列的靶向结合位点。结合promega的双荧光素酶报告系统使用turner仪器进行测量。将人NP细胞分成:Control组(NP细胞)、TNF-α组、mimic-NC组、miR-335-3p mimic组。使用Lipofectamine RNAiMAX将miR-335-3p mimic或miR-NC寡核苷酸序列转染入人NP细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miR-335-3p的表达情况。Western印迹实验检测NP细胞外基质相关蛋白的表达水平。结果与Control组比较,TNF-α组miR-335-3p基因表达水平显著下调(P<0.01),CCL5基因表达水平显著上调(P<0.01);miR-335-3p mimic组miR-335-3p表达水平较mimic-NC组显著上调(P<0.01),CCL5表达水平显著较mimic-NC组下调(P<0.01)。与Control组比较,TNF-α组生长分化因子(GDF)5和性别决定区Y框蛋白(SOX)9蛋白显著下调,而基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与mimic-NC组比较,miR-335-3p mimic组MMP2蛋白表达水平显著下调,而GDF5和SOX9蛋白显著上调(P<0.01)。结论miR-335-3p在TNF-α诱导的炎症条件下可特异性下调CCL5,从而逆转TNF-α诱导的软骨生成因子SOX9的异常表达。
背景:近年来,控释靶向纳米粒子在恶性肿瘤化疗方面得到越来越广泛的应用。目的:综述控释靶向纳米粒子在骨肿瘤治疗方面的应用及其发展前景。方法:以"Nanoparticles,controlled drug release,bone tumor or osteosarcoma or Ewing sarcoma"为关键词,检索Pub Med、Web of Science、NCBI数据库中近十年来关于纳米控释靶向粒子在骨肿瘤治疗方面应用的最新进展。结果与结论:骨肿瘤是一种具有较高发病率和死亡率的恶性肿瘤,严重威胁人类的健康。与传统化疗药物相比,纳米粒子具有控制释放,联合、协同治疗,跨越生物屏障,靶向治疗,增强肿瘤积累,延长循环时间等优势。控释靶向纳米粒子能针对骨肿瘤复杂的微环境实现靶向、精密调控,从而解决传统化疗所具有的不良反应和耐药性等问题。如何在保证载药率的同时提高纳米药物在肿瘤部位渗透效率、减少系统毒性、实现纳米药物治疗的多功能性是最终的研究目标。相信控释靶向纳米粒子以其固有的优势配合其智能、协同的载药方式,必将在这一交叉学科发挥更大的作用。
