汤斌
- 作品数：15 被引量：28H指数：4
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- Dravet综合征患者SCN1A基因剪切位点突变对剪切影响的体外分析
- 李斌况耀鋆卞文君邵传兴周鹏汤斌石奕武廖卫平
- 氨来占诺和万古霉素对无义突变的通读作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨氨来占诺和万古霉素对无义突变通读效率的作用。方法利用定点突变技术,构建在海肾荧光素酶基因54位氨基酸位置含有UAG、 UAA和UGA三种提前终止密码子(PTCs)的无义突变体。将质粒转染HEK293细胞,使用不同浓度氨来占诺和万古霉素处理24小时,采用双荧光素酶报告系统检测PTC的通读效率。结果双荧光素酶报告系统的相对荧光值结果显示,氨来占诺对UGA和UAA的通读效率高于UAG,而万古霉素对PTCs的通读作用略低。结论本研究建立新的双荧光素酶报告系统能有效检测三种PTCs的通读效率,氨来占诺的PTCs通读作用对UGA和UAA有偏好。
- 祝萍萍汤斌
- 关键词：无义突变万古霉素
- 拉莫三嗪与丙戊酸钠对Ⅰ型钠离子通道Na_v1.1膜蛋白表达的影响被引量：4
- 2019年
- 目的比较Ⅰ型钠离子通道NaV1.1在拉莫三嗪(LTG)及丙戊酸钠(VPA)处理后的蛋白表达水平,探讨LTG和VPA参与癫痫治疗的可能机制。方法构建带YFP标签的Na_V1.1蛋白表达载体(pCMV-YFP-SCN1A),转染HEK293T细胞。使用LTG、 VPA处理24 h,提取总蛋白和生物素标记的膜蛋白,采用Western blotting检测Na_V1.1总蛋白及膜蛋白的表达水平。结果与对照组比较, Na_V1.1膜蛋白表达水平在VPA处理24 h后显著增加(P <0.05),而在LTG处理24 h后无显著改变(P>0.05); Na_V1.1总蛋白表达水平在LTG、 VPA处理24 h后无明显变化(P>0.05)。结论 VPA可促进Na_V1.1膜蛋白表达,可能是参与抗癫痫治疗过程的潜在机制。
- 汤斌蔡秀曲徐海清廖卫平何娜
- 关键词：拉莫三嗪丙戊酸钠膜蛋白
- 跨膜区突变氨基酸酸碱性变化对Nav1.1通道功能的影响
- 何勇汤斌陈迁廖卫平
- 三种生物信息学软件对癫痫相关SCN1B错义突变的预测性能评估
- 2019年
- 目的使用三种生物信息学软件(MutPred2、PROVEAN和SNAP2)对癫痫相关SCN1B基因错义突变的预测性能进行评估。方法从HGMD数据库收集22个具有明确致病性的错义突变作为阳性组,从dbSNP和ExAC数据库收集136个无疾病表型报道的错义突变作为阴性组,评估三种软件的预测性能。结果从准确率、特异度、PPV、NPV、MCC值和AUC值指标进行评估,排名依次均为PROVEAN、SNAP2、MutPred2。PROVEAN软件阳性判断的阈值为-2.5,位于SCN1B错义突变阳性组和阴性组预测分值的中位数(-3.199^-2.026)之间。结论三种软件在使用不同指标参数进行评估时的性能有所不同,其中PROVEAN软件综合多个指标参数对SCN1B基因错义突变的预测性能最佳。
- 汤斌周鹏李斌何娜
- 关键词：错义突变
- Lennox-Gastaut综合征合并孤独症与智力发育障碍的临床特征及危险因素分析被引量：7
- 2019年
- 目的探讨Lennox-Gastaut综合征(LGS)患者中孤独症、智力发育障碍的共患发生率、临床特点及临床影响因素。方法收集广州医科大学附属第二医院癫痫中心自2012年6月至2018年6月确诊为LGS的患者64例,采用儿童孤独症家长评定量表(ABC)和孤独症医生评定量表(CARS)对患儿进行孤独症评估;采用《中国儿童韦氏智力量表》(C-WISC)和《Gesell儿童发育诊断量表》对患儿进行智力发育评估,分析不同临床因素对LGS并发孤独症及智力发育障碍的影响。结果64例LGS患者中仅3例(4.7%)患者合并有孤独症,其平均ABC和CARS评分分别为80分和40分。不同年龄分组中,起病年龄<1岁患者ABC和CARS评分最高,分别为(40.9±26.7)分和(26.0±8.9)分,与其他年龄组患者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗药物数量分组中,服用≥3种抗癫痫药物(AEDs)患者ABC和CARS评分最高,分别为(27.8±22.8)分和(22.2±8.7)分;与服用1~2种AEDs患者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,不同癫痫发作频率、具有/不具有明确病因的LGS患者,ABC和CARS评分差异也具有统计学意义(P<0.05)。64例患者中50例(78.1%)患者呈现不同程度的智力障碍,其中重度智力障碍为主要类型,占31.3%。轻度、中度以及极重度智力障碍患者人数分别为12(18.8%)、7(10.9%)和11(17.2%)。与不伴智力发育障碍患者比较,伴有智力障碍患者起病年龄更低、脑电图特征表现为慢背景活动比例更高、具有症状性病因的比例更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫起病年龄早,癫痫发作频繁,服用≥3种AEDs且具有明确病因的LGS患者合并孤独症的几率更高。起病年龄是LGS患者合并智力障碍的独立危险因素。
- 何娜黎冰梅汪洁刘晓蓉李斌卞文君区锶文高志炜廖卫平汤斌
- 关键词：LENNOX-GASTAUT综合征孤独症智力发育障碍
- 热性惊厥相关癫痫SCN1A基因内含子突变对mRNA剪切的影响及其与临床表型的关系被引量：9
- 2018年
- 目的研究与热性惊厥相关癫痫中不同临床表型相关的SCN1A基因内含子突变对mRNA剪切的影响，探讨其剪切模式与临床表型-基因型-遗传模式的关系。方法采用Minigene体外剪切分析技术，对来自热性惊厥相关癫痫谱中的部分性癫痫伴热性惊厥附加症（PEFS＋）和Dravet综合征（DS）患者的5个SCN1A基因内含子突变配对分组后进行分子克隆、HENK293细胞体外表达，应用逆转录PCR（RT-PCR）和实时荧光定量PCR（qPCRl对各突变的mRNA剪切形式及其相对表达量进行定性定量分析。结果（1）RT—PCR显示DS相关突变c．602＋1G〉A和c．4853—1G〉C均出现mRNA异常外显子丢失，且未见明确正常剪切mRNA；而PEFS＋相关突变c．473＋5G〉A、c．473＋5G〉C和c．4853—25T〉A表现为外显子删除或内含子插入,正常和异常mRNA转录共存。（2）qPCR显示PEFS＋相关突变c．473＋5G〉A和c．473＋5G〉C的异常mRNA的相对表达量分别为4．92％±1．05％和7．97％±1．12％，正常mRNA的相对表达量分别为6．10％±0．21％和3．94％±1．25％，分别与DS相关突变c．602＋1G〉A的异常和正常mRNA的相对表达量（60．51％±1．81％和0．060％±0．022％）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；PEFS＋相关突变c．4853．25T〉A的正常和异常mRNA的相对表达量分别为71．22％±11．92％和7.38％±1．61％，分别与DS相关突变c．4853-1G〉C的正常和异常mRNA的相对表达量（0．08％±0．01％和22．11％±2．83％）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SCNIA基因内含子突变位置、剪切模式的差异是导致热性惊厥相关癫痫遗传模式和临床表型差异的潜在分子机制。
- 余璐孟珩汤斌徐海清蔡秀曲何娜刘晓蓉黎冰梅高玫梅石奕武易咏红廖卫平
- 关键词：临床表型
- PRRT2基因筛查阴性的发作性运动障碍患者CNVs分析
- 目的 在中国南方汉族人群中对富含脯氨酸的跨膜蛋白2(Proline-rich transmembrane protein 2,PRRT2)基因筛查阴性的发作性运动障碍患者(Paroxysmal Dyskinesias,P...
- 李文刘晓蓉王一凡曾涛黎冰梅李朝霞石奕武汤斌廖卫平
- 关键词：发作性运动障碍拷贝数变异
- Ⅰ型纳离子通道基因α亚基c.5768A＞G突变型多能性干细胞多向分化能力的研究
- 2014年
- 目的 研究携带有人Ⅰ型纳离子通道基因α亚基（SCN1A）基因c.5768A＞G杂合突变的诱导多能性干细胞（iPSCs）在裸鼠体内的多向分化能力. 方法 将人源SCN1A c.5768A＞G杂合突变iPSCs细胞株分别注射到3只NOD/SCID小鼠同侧前肢皮下组织和后肢肌肉组织中,40 d后观察成瘤情况,记录畸胎瘤大小;取出畸胎瘤组织制作石蜡切片,进行HE染色,观察畸胎瘤的细胞形态特征;提取畸胎瘤组织基因组DNA,PCR扩增带有c.5768A＞G突变位点的片段并对其进行测序及生物信息学分析. 结果 注射iPSCs 40 d后,1只NOD/SCID小鼠前肢皮下和后肢肌肉中均有畸胎瘤形成;HE染色显示畸胎瘤组织中至少有3种类型的细胞,分别为源于内胚层的腺体细胞、源于中胚层的脂肪细胞和源于外胚层的成纤维细胞;测序分析显示畸胎瘤组织基因组中存在SCN1A基因c.5768A＞G杂合突变;生物信息学分析显示该位点为高危险性突变. 结论 人源SCN1A基因c.5768A＞G杂合突变型iPSCs具有分化成三胚层的多向分化能力.
- 李文斌华立栋张林明王超汤斌秦兵廖卫平石奕武
- 关键词：离子通道突变多向分化
- Dravet综合征相关NaV1．1（F1237fsX1269）截短突变对钠通道膜蛋白表达和功能的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究Dravet综合征相关Ⅰ型电压依赖性钠通道（NaV1．1）截短突变体F1237fsXl269蛋白在HEK293T细胞中总蛋白及膜蛋白的表达水平变化，探讨NaY1．1截短突变的可能致病机制。方法以质粒pCMV—SCN1A-WT为模板，构建带有增强型黄色荧光蛋白（EYFP）融合表达的野生型与截短突变质粒（分别标记为pCMV-EYFP-SCN1A-WT、pCMV-EYFP-3710），并转染至HEK293T细胞，48h后运用生物素标记方法提取总蛋白与膜蛋白，应用Westernblotting检测野生型蛋白与截短突变蛋白的总蛋白及膜蛋白表达水平。应用全细胞膜片钳技术记录野生型蛋白与截短突变蛋白所产生的钠电流。结果Westernblotting检测结果显示：pCMV-EYFP-3710质粒转染HEK293T细胞后可检测到相应截短突变蛋白，相对分子质量约为191000，且均可在细胞胞浆及胞膜上表达。截短突变蛋白的总蛋白表达水平与野生型蛋白相比明显减少，膜蛋白表达水平只有野生型蛋白的43％，差异有统计学意义（P〈0．05）。电生理检测结果显示：野生型蛋白可检测到正常钠离子电流[电流密度为（-149．0±7．7）pA／pF]，而截短突变蛋白未检测到钠离子电流。结论Dravet综合征相关NaV1．1截短突变体F1237fsXl269产生的截短突变蛋白的膜蛋白表达水平降低，并丧失钠离子通道功能，其机制可能与野生型蛋白竞争β1、β2亚基而产生显性负效应有关。
- 徐海清蔡秀曲余璐汪洁廖卫平石奕武高玫梅汤斌
- 关键词：DRAVET综合征膜蛋白
