欧阳珏
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 在基于BAC的EB病毒基因组中引入突变被引量：4
- 2008年
- 为了在Epstein-Barr病毒(EBV)172kb的基因组中引入突变以研究基因功能,建立了一种简单有效的基因操作方法。在载体pcDNA3.1(+)上操作,将两端含有重组蛋白FLP识别位点(FRT)的卡那霉素筛选标记基因(kan)与鼻咽癌(NPC)来源的、包含LMP1基因全长ORF的gDNA"无缝"连接(无外源序列插入)。连接后的kan-LMP1线性DNA片段经转化、由λ噬菌体中redαβγ系统介导在E.coli中发生同源重组(ET克隆),用kan-LMP1替代了BAC-EBV(p2089)中相应的LMP1基因区域,然后经过重组蛋白FLP对FRT-kan-FRT特异性的识别,切除了引入的kan基因,留下一个69bp的FRT"疤痕"。通过抗性筛选和对菌液进行PCR扩增可以鉴定突变子。这种经改进并程序化的方法,也适应于引入其它突变或在其它BAC-疱疹病毒基因组中引入突变。
- 卢建红唐运莲周鸣武明花欧阳珏高建明张荔茗李丹陈琼熊炜李小玲唐珂李桂源
- 关键词：EB病毒突变同源重组
- Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备
- 2002年
- 目的 :构建Parkin基因 3’端的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法 :构建Parkin基因3’端 (937～ 195 9bp)的谷氨酰胺硫转移酶 (glutathion sulfate transferase ,GST)融合表达质粒 ,在JM 10 5中获得表达。用Triton 10 0 (1% )和Tween 2 0 (1% )处理 ,并用亲和层析纯化表达产物 ,将其免疫新西兰兔 ,用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果 :构建的ParkinC表达质粒在JM 10 5中获得表达 ,以分子量为 4 2kD的包涵体存在 ;目的蛋白纯度为 95 % ;得到效价为 1∶6 4的抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中 5 1 6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论 :Parkin蛋白C端在 JM 10 5
- 欧阳珏夏昆郑多张灼华
- 关键词：C端原核表达多克隆抗体帕金森氏病
- SPLUNC1多肽抗体的设计、制备与鉴定被引量：4
- 2006年
- 通过设计SPLUNC1蛋白的一段多肽,快速制备抗SPLUNC1的多肽抗体,检测多肽抗体的性能,为SPLUNC1的功能研究提供可靠的平台.用DS Gene1.1软件分析SPLUNC1蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其它因素,设计出两段15～20个氨基酸的多肽.将合成后的多肽与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联,同时初筛出宿主血清与SPLUNC1无交叉反应的新西兰家兔,用与KLH相连的SPLUNC1多肽免疫家兔,2个月后获取血清,亲和纯化出抗SPLUNC1多肽抗体,通过ELISA法检测其效价,免疫印迹与免疫组化检测其特异性与适用范围.通过该方法得到了高效价与高特异性的SPLUNC1多克隆特异性抗体,ELISA法测定其效价可达到1：105,通过对包含有PLUNC家族不同成员的蛋白混合物进行Western印迹检测证明,该多肽抗体具有较高的特异性,不与同一家族中的其它蛋白发生交叉反应,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的分泌性蛋白SPLUNC1抗体具有高特异、高效价等特点,将为SPLUNC1基因的功能研究提供有用的研究材料.
- 周后德赵瑾张晋欧阳珏周鸣彭淑平李小玲李桂源
- 关键词：多肽抗体特异性
- 新型脑组织特异性基因LRRC4的功能研究被引量：3
- 2005年
- 目的研究LRRC4基因的抑瘤作用,探讨LRRC4基因对U251细胞的生物学功能影响。方法将转染LRRC4基因的U251细胞、转染空白载体PcDNA3.1(+)的U251细胞和阴性对照的U251细胞分别进行HE染色、DNA染色和核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)染色,并采用图像分析系统分别进行平面形态参数、DNA含量、DNA倍体、细胞周期和AgNORs定量分析,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期分布,MTT检测各组细胞的增殖活性。结果转染LRRC4基因U251细胞的面积为(100.6±7.6)μm2,周长为(42.4±2.0)μm,细胞直径为(9.0±1.2)μm,平均DNA含量为(46.8±8.7)pg,AgNORs平均颗粒数为(1.2±0.4)个,AgNORs平均面积为(16.9±2.0)μm2,均显著低于转染空白载体和阴性对照细胞,DNA异倍体也显著低于转染空白载体和阴性对照细胞。转染LRRC4基因的U251细胞的G0/G1期百分比明显增高,而S期和G2/M期细胞减少。转染LRRC4基因的U251细胞增殖活性显著低于转染空白载体和阴性对照细胞(P<0.01)。结论LRRC4基因通过抑制细胞的DNA复制,减少细胞核仁组成区相关蛋白质的合成,使细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞的增殖活性,进而发挥抑瘤功能。形态定量检测技术结合流式细胞检测、MTT检测等实验,能更加全面地阐明新基因的生物学功能。
- 范松青王洁如黄河熊炜肖炳燚欧阳珏曹莉谭琛李桂源
- 关键词：U251细胞核仁组成区嗜银蛋白抑瘤作用
- 一种细胞芯片制作方法及其器具
- 本发明涉及一种细胞芯片。细胞芯片的制作方法为细胞固定、脱水、透明后，将经透明处理后的细胞置于一定规格的条形模具中浸蜡制成条状石蜡细胞芯条，然后直接将一定长度的条状石蜡细胞芯条按序放置于受体石蜡块中，利用胶带转移辅助系统进...
- 李桂源范松青周洁肖炳燚熊炜曹利欧阳珏李伟芳唐珂
- 文献传递
- 鼻咽癌下调新基因 NOR1相互作用蛋白的筛选和鉴定被引量：6
- 2009年
- NOR1基因是新的鼻咽癌相关基因,该基因在鼻咽癌细胞系HNE1和鼻咽癌组织中表达下调.在鼻咽癌细胞HNE1中恢复NOR1基因表达抑制了鼻咽癌细胞的生长和增殖能力.为了探讨NOR1基因的生物学功能,以NOR1基因为诱饵运用酵母双杂交技术在人胎脑文库中筛选其交互作用蛋白,挑选阳性克隆,进行DNA序列分析和同源检索,阳性克隆编码7个不同的蛋白质,其中一个阳性克隆编码线粒体ATP合成酶亚基OSCP蛋白.瞬时转染pCMV-myc-NOR1质粒进入鼻咽癌5-8F细胞,通过密度梯度离心法分离线粒体蛋白,Western blot检测表明myc-NOR1蛋白分布于线粒体与胞浆.免疫荧光检测表明在鼻咽正常上皮细胞NP69中内源性NOR1蛋白与线粒体存在明显共定位.随后采用特异性酵母双杂交、免疫荧光共定位、免疫共沉淀技术证实了NOR1与OSCP在线粒体内存在交互作用.提示,NOR1是一个新的线粒体蛋白,可能通过结合OSCP蛋白调控细胞能量代谢,为深入探讨其功能提供了重要线索.
- 向波王理易梅欧阳珏李夏雨张祖萍李小玲李桂源
- 关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用
- 一种细胞芯片制作方法及其器具
- 本发明涉及一种细胞芯片。细胞芯片的制作方法为细胞固定、脱水、透明后，将经透明处理后的细胞置于一定规格的条形模具中浸蜡制成条状石蜡细胞芯条，然后直接将一定长度的条状石蜡细胞芯条按序放置于受体石蜡块中，利用胶带转移辅助系统进...
- 李桂源范松青周洁肖炳燚熊炜曹利欧阳珏李伟芳唐珂
- 文献传递
- 代谢组学及其在恶性肿瘤研究中的应用被引量：7
- 2007年
- 代谢组学是对某一生物或细胞所有低分子量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科。本文对代谢组学的概念、代谢组学研究的目的和领域以及代谢组学在恶性肿瘤研究中的应用方面进行了综述。
- 欧阳珏武明花黄琛李丹周鸣李小玲李桂源
- 关键词：代谢组学恶性肿瘤系统生物学
- 一种新型细胞微阵列的制作和应用被引量：1
- 2004年
- 为了高通量地检测大量培养细胞中基因原位表达 ,发明了一种制作细胞微阵列的新方法 ,成功地制作含2 0种细胞系共 10 0个供体细胞石蜡混合物点阵的细胞微阵列 .免疫组化检测P5 3,P2 1,PTEN、P16基因在细胞微阵列中的蛋白质表达 .原位杂交检测BRD7、NGX6基因在细胞微阵列中mRNA原位表达 .建立了P5 3、P2 1、PTEN、P16蛋白和BRD7、NGX6mRNA在不同培养细胞中的原位表达谱 .细胞微阵列为基因功能研究提供一种新的高通量工具 .细胞微阵列可广泛用于DNA、RNA和蛋白质水平上的基因原位表达研究 .
- 范松青肖炳燚曹利熊炜欧阳珏谭琛李伟芳唐珂李桂源
- 关键词：原位杂交基因生物学功能
- 一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法被引量：10
- 2005年
- 发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法.利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含448和390个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片.这种新方法制作的组织微阵列切片经H&E染色,显微镜下观察证实,所有切片均无供体点阵组织脱落,切片厚度适中,组织结构无挤压变形,细胞形态均匀一致.免疫组化检测P53和P16蛋白在组织微阵列切片与其相应的常规组织切片中的表达结果完全一致.这种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作新器具和新方法成本低廉,操作简便,具有在实验室推广应用的价值.
- 范松青张文玲熊炜马键周洁周鸣肖炳燚欧阳珏张秋红谭琛李桂源
- 关键词：组织微阵列免疫组化
