杨俊霞
- 作品数：36 被引量：151H指数：7
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黑色素浓集激素及其受体与肥胖的相关关系
- 2006年
- 黑色素浓集激素(MCH)是一种含19个氨基酸的神经肽,由下丘脑外侧区释放,其神经纤维广泛分布于大脑各个区域,在摄食行为、能量平衡及体重的调节中起重要作用,并与肥胖的发生、发展密切相关。近年来研究发现,MCH受体有2个亚型,即MCH-1R和MCH-2R,均属于G蛋白偶联受体家族,可激活多个第二信使通路。对MCH及其受体与肥胖关系的研究可能为控制肥胖提供新的治疗策略。
- 杨俊霞宋方洲
- 关键词：肥胖
- Ber对肝HepG2细胞Insig-2和VDR基因表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:研究小檗碱(berberine,Ber)对人肝癌细胞株HepG2细胞中胰岛素诱导基因2(Insulin-induced gene 2,Insig-2)和维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)基因表达的影响,探讨其调血脂的作用机制。方法:采用RT-PCR技术检测不同浓度(1、3、10、30、100μmol/L)Ber处理24 h后及3μmol/L Ber处理不同时间(0、12、24、48、72 h)后HepG2细胞中In-sig-2和VDR mRNA的表达,并进行相关性分析。结果:不同浓度Ber处理HepG2细胞后,Insig-2及VDR基因的表达均明显上调,其上调效应随药物浓度的升高而逐渐增强,至3μmol/L浓度时达高峰,随后则逐渐减弱,两者的变化具有相关性,r=0.753(P<0.01);用3μmol/L浓度Ber处理HepG2细胞不同时间后,Insig-2及VDR基因的表达均明显上调,其效应随着时间的延长而不断增强,于48 h达峰值,随后减弱,两者的变化具有相关性,r=0.922(P<0.01)。结论:Ber调血脂的作用机制可能是通过上调VDR的表达,进而上调Insig-2基因表达,从而抑制肝脏中胆固醇的合成代谢。
- 常伟周岐新杨俊霞
- 关键词：小檗碱VDR基因表达降血脂
- 人白介素24基因克隆表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2007年
- 目的克隆人IL-24基因,构建原核表达载体,表达纯化GST-IL-24融合蛋白,检测其活性。方法用密执毒素诱导HeLa细胞表达IL-24 mRNA,通过RT-PCR获取IL-24cDNA,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,IPTG诱导表达,经GSTrap TMF Fcolumn亲合纯化,SDS-PAGE和Westernblot检测融合蛋白的表达,MTT法检测GST-IL-24对宫颈癌CaSKi细胞的抑制作用。结果克隆得到人IL-24的cDNA,序列与GenBank公布序列完全一致,SDS-PAGE电泳可见50kD大小的融合蛋白表达。GST-IL-24以剂量依赖的方式抑制宫颈癌CasKi细胞的生长。结论成功构建人IL-24基因原核表达载体,表达纯化得到GST-IL-24,该融合蛋白对宫颈癌CasKi细胞具有抑制作用。
- 魏丽丽李成华杨俊霞石华丁嵩涛马永平易发平宋方洲
- 关键词：原核表达纯化MTT
- 小檗碱对兔血脂代谢及维生素D受体和胰岛素诱导基因2基因表达的影响被引量：8
- 2011年
- 目的研究小檗碱对高脂模型兔血脂代谢的影响,并探讨其调血脂作用是否与维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)的表达变化有关。方法雄性新西兰大耳白兔40只随机分为对照组、模型组、阳性药非诺贝特(30 mg/kg)组和小檗碱低、高剂量(28、112 mg/kg)组。兔喂饲高脂饲料8周建立高脂模型,给药8周后测定各组兔血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白a(LPa)等指标的水平。RT-PCR法检测脂肪组织中VDR和Insig-2基因表达的变化。结果与对照组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa水平明显升高(P<0.05),而ApoA1水平则明显降低(P<0.05);经小檗碱处理后,兔血清中TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa的水平较模型组显著降低(P<0.05),同时ApoA1水平则明显升高(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,小檗碱干预后兔脂肪组织中VDR、Insig-2 mRNA的表达较模型组显著升高(P<0.05),且低剂量小檗碱的效果更明显。结论小檗碱具有明显的调血脂作用,其机制可能是通过上调脂肪组织VDR和Insig-2 mRNA表达来实现的。
- 罗映金磊何琦周岐新杨俊霞
- 关键词：小檗碱调血脂维生素D受体基因表达
- 人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立
- 2007年
- 目的构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测MCHR1的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR1功能奠定了良好的实验基础。
- 袁成福杨俊霞魏丽丽石华陈济易发平马永平宋方洲
- 关键词：真核表达载体CHO细胞转染
- 敲减人MCHR2基因抑制CHO细胞的放射性配体受体结合能力及Ca^2＋释放被引量：1
- 2008年
- 研究人黑色素浓集激素受体2（MCHR2）基因特异的小发夹RNA（shRNA）真核表达载体pGenesil-1-MCHR2-shRNA对MCHR2表达及特征的影响．将pGenesil-1-MCHR2-shRNA转染到稳定表达人MCHR2基因的CHO细胞中，通过RT-PCR和Western印迹检测MCHR2表达的变化；放射性配体结合实验（RBA）检测受体最大结合容量Bmax及平衡解离常数Kd值的变化；钙流检测实验观察配体MCH刺激后单个细胞Ca^2＋释放及MCH半数有效浓度EC50的变化,与转染pGenesil-1空载体组比较，pGenesil-l-MCHR2-shRNA能使MCHR2基因mRNA表达减少45．8％～66．4％；蛋白表达减少44．2％～81．0％；Bmax减少39．4％～78．7％，Kd值升高40．9％～81．9％；EC50升高114．8％～822．4％．MCHR2基因shRNA真核表达载体能有效抑制MCHR2基因的表达，减少Bmax、升高虬值及EC50，从而对MCHR2生物活性等特征产生影响。
- 袁成福杨俊霞刘革力卜友泉张琴易发平马永平宋方洲
- 关键词：基因表达生物特征
- 以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的通过双荧光素酶报告基因检测系统建立以胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)启动子为靶点的药物筛选模型。方法将人Insig-2基因启动子序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建重组质粒pGL3-Insig-2并与内参质粒pRL-TK瞬时共转染工具细胞,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化反映Insig-2基因启动子启动转录的活性,并对共转染质粒比例、工具细胞选择等条件进行探索和优化,相关药物处理进行验证。结果成功构建了重组质粒pGL3-Insig-2;确认pGL3-Insig-2:pRL-TK共转染比例为4∶1,确定3T3-L1细胞为工具细胞;1,25-(OH)2D3、小檗碱和姜黄素均能明显增强Insig-2基因启动子活性。结论成功建立了以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型,为筛选新型调脂药奠定基础。
- 张琴杨发建何芸杨俊霞
- 关键词：启动子药物筛选调脂药
- 顺铂体外诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP)的建立被引量：2
- 2007年
- 目的建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP),研究其生物学特性和耐药机制。方法采用间歇诱导法,逐步递增DDP浓度,获得耐药细胞株QGY/DDP;MTT法测定药物敏感性;细胞计数法计算倍增时间,流式细胞术检测细胞周期;原子吸收光谱法测定细胞内铂离子蓄积量,流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达水平。结果成功建立了顺铂诱导的人肝癌耐药细胞株QGY/DDP,耐药指数为10.81,与5-氟尿嘧啶、长春新碱等抗癌药有明显的交叉耐药;与QGY细胞相比,QGY/DDP细胞增殖减慢、倍增时间延长,G0/G1期细胞增多、S期与G2/M期细胞减少,细胞内Pt含量降低,GST-π的表达升高,而P-gp无明显变化。结论QGY/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制与细胞内Pt含量降低和GST-π过表达有关,而与P-gp无关。
- 杨俊霞袁成福罗映邱红梅汤为学
- 关键词：顺铂药物耐受性
- 髓样分化蛋白-2模拟肽抑制巨噬细胞吞噬革兰阴性菌
- 2016年
- 目的探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰阴性菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法采用PCR从p EGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组构建原核表达载体p ET-32a(+)-EGFP,经测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)PLys S中筛选出稳定表达的重组菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(简称为EGFPBL21)。以IPTG诱导重组质粒表达后,通过免疫荧光和流式细胞术检测RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力以验证EGFP-BL21的构建情况。进一步检测RAW264.7细胞对经不同浓度MDMP(1.0、10、100μg/m L)预处理后的EGFP-BL21的吞噬效应;采用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。结果筛选获得稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLys S,重组菌经巨噬细胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦检测结果显示细胞内出现明显的绿色荧光。MDMP预处理后,流式检测结果显示RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力受到明显抑制,预处理组(10、100μg/m L)的吞噬系数(PI)显著低于经血清调理的阳性对照组(P<0.01),且细胞培养上清TNF-α和IL-6的分泌水平显著降低(P<0.01)。结论 MDMP预处理可明显抑制RAW264.7细胞对革兰阴性菌的吞噬作用,并降低该过程中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。
- 王虎杨俊霞黄家君周运江随何欢朱江吴友莉段光杰
- 关键词：革兰阴性菌
- 洛伐他汀对高脂血症大鼠α肾上腺素受体活性的作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨洛伐他汀对高脂血症大鼠α肾上腺素受体活性的作用。方法采用高脂饲料喂养建立大鼠高脂模型,测定各不同处理组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等生化指标的含量。通过大鼠肛尾肌离体实验测定α肾上腺素受体对受体激动剂和拮抗剂的应答反应,并计算各组pD2和pA2值。结果高脂模型组的TC和LDL-C较正常对照组明显升高(P<0.05),且α肾上腺素受体激动剂对其肛尾肌标本的pD2值明显升高,α受体拮抗剂的pA2值则明显降低(P<0.05);洛伐他汀处理后与高脂模型组比较,TC、LDL-C明显降低(P<0.05),且α受体激动剂对肛尾肌标本的pD2值显著下降,α受体拮抗剂对肛尾肌的pA2值则显著升高(P<0.05)。结论洛伐他汀可降低α肾上腺素受体对缩血管物质的反应性,而增强其对扩血管物质的反应性,改善血管舒缩功能。
- 高丽佳杨俊霞邓庆华周岐新
- 关键词：洛伐他汀高脂血症Α肾上腺素受体
