杨佳
- 作品数：16 被引量：25H指数：4
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- 羽衣甘蓝泛素结合酶ubc7基因分离、原核表达及纯化被引量：2
- 2013年
- 为分离羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-b S13-b)泛素结合酶7(ubc7)基因,探讨Ubc7重组蛋白的原核表达及纯化。利用CTAB的方法提取羽衣甘蓝柱头总RNA,通过RT-PCR的方法分离ubc7基因,将编码ubc7基因的cDNA序列亚克隆到pET-14b原核表达载体中,将阳性重组表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达,并通过Ni2+-NTA树脂进行亲和层析的方法纯化重组蛋白。结果表明,获得的Boubc7含有一个长度为501 bp的开放读码框,编码一个含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测BoUbc7的相对分子质量约为18.7 kDa,理论等电点(pI)为5.35。利用IPTG诱导的细菌蛋白中,SDS-PAGE显示出在分子量大小23 kDa处有蛋白特异性的表达,这与预测的His6融合的BoUbc7蛋白分子量相符;利用Ni2+-NTA树脂进行亲和层析纯化后,成功获得了BoUbc7融合蛋白。该试验分离了羽衣甘蓝ubc7基因,并通过原核表达系统获得了BoUbc7重组蛋白,为进一步分析其生物学功能奠定了基础。
- 蓝兴国李晓屿杨佳王艳红李玉花
- 关键词：羽衣甘蓝泛素结合酶原核表达
- 植物U-box／ARM蛋白被引量：2
- 2008年
- 文章介绍了高等植物特有的U-box/ARM蛋白在结构、植物自交不亲和性、抗病性和激素信号转导等方面的研究进展。
- 杨佳蓝兴国李玉花
- 关键词：自交不亲和抗病性
- 羽衣甘蓝柱头酵母双杂交cDNA文库的构建及ARC1相互作用蛋白质的筛选
- 植物自交不亲和性（Self-incompatibility，SI）是指雌蕊对自己和异己花粉进行识别，通过细胞内信号传递与级联反应，最终抑制自己花粉的生长，阻碍受精作用的过程。SI是植物采取的一种促进异交、避免自交的策略。...
- 杨佳
- 关键词：自交不亲和酵母双杂交
- 羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定被引量：4
- 2015年
- 为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子ARC1与下游底物Exo70A1相互作用的结构域,利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝Bo ARC1、Bo ARC1-N端(1~279 aa,含有UND结构域)及Bo ARC1-C端(280~663 aa,含有U-box结构域和Arm repeat结构域)的序列分别构建到p GBKT7载体中,获得BD-ARC1、BD-ARC1-N和BD-ARC1-C重组质粒。将羽衣甘蓝Bo Exo70A1、Bo Exo70A1-Δ1(1~85 aa)、Exo70A1-Δ2(1~270 aa)及Exo70A1-Δ3(271~638 aa,含有Exo70结构域)的序列分别构建到p GADT7载体中,获得AD-Exo70A1、AD-Exo70A1-Δ1、AD-Exo70A1-Δ2和AD-Exo70A1-Δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母Y187菌株中,在双缺陷(-Leu-Trp)酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明,共转BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ1或BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ2的酵母在滤纸上显示蓝色,这说明Bo ARC1的N端与Bo Exo70A1的N端介导了两者的相互作用。
- 曹明明杨佳李晓屿李玉花蓝兴国
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和性结构域
- 羽衣甘蓝ARC1相互作用蛋白及授粉过程中差异表达蛋白的研究
- 自交不亲和性(Self-incompatibility, SI)是芸苔属植物重要的生殖保障,具有避免自交、促进异交的作用。芸苔属植物SI不仅是植物细胞识别、信号转导的模式系统,而且在植物生殖生物学研究中具有重要的意义。近...
- 杨佳
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和蛋白质相互作用蛋白质组学
- 文献传递
- 大青杨PubZIP1基因的克隆及亚细胞定位与抗旱表达特性分析被引量：1
- 2020年
- 从大青杨中克隆得到PubZIP1基因,通过基因测序结果可知,PubZIP1基因全长1083 bp,编码360个氨基酸。分析得出PubZIP1蛋白含有BZIP和DOG1两个结构域,其二级结构包括α-螺旋(62.50%)、无规卷曲(29.72%)、延伸链(5.56%)、β-折叠(2.22%)。通过亚细胞定位试验表明PubZIP1基因位于细胞核。通过qRT-PCR分析表明,在模拟干旱的不同7%PEG6000胁迫时间下,分析结果表明胁迫后PubZIP1基因在大青杨根中的表达量呈下降趋势。而在大青杨茎和叶片中的表达量呈上升趋势,尤其是在叶片中明显被诱导表达。预测该基因可能主要在叶片中表达并行使功能。
- 刘晓杨佳张馨马苗苗杨静莉
- 关键词：生物信息学亚细胞定位
- 羽衣甘蓝ARC1的基因分离、表达及与SRK相互作用的分析被引量：4
- 2011年
- 以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试验材料,利用RT-PCR的方法分离其ARC1基因cDNA序列(命名为BoARC1,GenBank登录号为EU344909)。BoARC1 cDNA序列中含有1个1 992 bp的开放读码框(ORF),编码1个含有663个氨基酸的蛋白质。羽衣甘蓝BoARC1与油菜BnARC1的氨基酸序列具有94%的一致性;Southern杂交结果显示BoARC1在基因组中只存在单一拷贝;Northern杂交结果显示BoARC1特异性地在柱头组织中表达;在酵母双杂交试验分析中,BoARC1能够与SRK3、SRK13-b和SRK910的胞内激酶域发生相互作用。
- 蓝兴国杨佳赵昕李玉花
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和相互作用
- 羽衣甘蓝柱头酵母双杂交cDNA文库的构建与分析被引量：1
- 2010年
- 目的:构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法:以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料,提取柱头的总RNA,用亲和层析法分离纯化mRNA,利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果:羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2.5×105;扩增后文库的库容量约为4×108,重组率为96%,插入片段大小为0.4～3kb,平均长度在0.8kb左右。结论:构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库,为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。
- 杨佳王艳红李玉花蓝兴国
- 关键词：羽衣甘蓝柱头CDNA文库酵母双杂交
- 羽衣甘蓝S_(13-b)位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达被引量：1
- 2010年
- 目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RT-PCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1mmol/LIPTG诱导,用Ni-NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE显示相对分子质量约43×103的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。
- 蓝兴国杨佳王艳红李玉花
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和原核表达纯化
- 羽衣甘蓝ARC1蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析被引量：3
- 2013年
- ARC1是植物特有的一类含有U-box/ARM结构域的蛋白,在芸薹属植物自交不亲和(self-incompatibility,SI)信号转导中起着正向调控因子的作用。将羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)BoARC1编码区的序列连接到原核表达载体pET-14b上,通过酶切鉴定和测序分析,构建pET-14bBoARC1表达质粒;将获得的阳性表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量69 kD处有BoARC1蛋白特异性地诱导表达;利用Ni2+-NTA树脂通过亲和层析的方法获得BoARC1融合蛋白。在泛素激活酶(E1)、泛素结合酶UBC7(E2)和泛素体外泛素化反应后,通过免疫印迹的方法检测,显示出BoARC1融合蛋白能够将底物进行多泛素化修饰;当U-box中保守位点第323位Pro突变为Ala或其他泛素化组分缺少时,底物不能被泛素化修饰。
- 蓝兴国李晓屿杨佳李玉花
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和性原核表达泛素连接酶
