李黎
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hfg12凝血酶原酶短干扰RNA表达质粒的构建及其效应被引量：1
- 2008年
- 目的探索人fg12凝血酶原酶（hfg12）短干扰RNA（siRNA）在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应。方法构建产生hfg12短发夹状RNA（shRNA）的载体Phfg12shRNA，将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因表达质粒pEGFPhfg12共转染到中国仓鼠卵母细胞（CHO细胞），转染48h后，倒置荧光显微镜下观察EGFP在CHO细胞中的表达，并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率。将Phfg12shRNA和hfg12表达质粒pcDNA3．1-hfg12共转染到CHO细胞，通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测hfg12基因转录和蛋白表达水平的变化。分为4组：共转染P—hfg12shRNA和pcDNA3．1-hfg12为干预组，共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3．1-hfg12为非相关干预组，仅转染pcDNA3．1-hfg12为未干预组，不转染任何质粒为空白组。结果在CHO细胞中，含Phfg12shRNA的干预组较未干预组和非相关干预组的绿色荧光强度明显减弱，荧光细胞数明显减少；荧光表达阳性细胞率：干预组α为6．5％±0．2％，未干预组α为40．1％±1．8％，两组比较，Χ^2=8．056，P〈0．01，差异有统计学意义。抑制效率达85．5％。hfg12shRNA显著抑制了hfg12mRNA和蛋白质的表达，干预组hfg12mRNA水平为0．11±0．01，未干预组为0．84±0．06，两组比较，F=10．7，P〈0．01，差异有统计学意义。结论P—hfg12shRNA可在体外高效特异地抑制hfg12基因转录和蛋白的表达，为进一步的体内干扰实验奠定了基础。
- 习东李黎高随朱传龙郭健文王鸣罗小平宁琴
- 关键词：肝功能衰竭RNACHO细胞
- 重症肝炎相关基因hfg12表达质粒和干扰质粒的构建及其体外RNA干扰的初步研究
- 目的纤维介素蛋白/(fgl2/)在重型病毒性肝炎发生发展中发挥较为重要的作用,本课题旨在探索人纤维介素蛋白/(hfgl2/)的发夹状双链RNA/(shRNA/)在体外对hfgl2基因表达的干扰作用规律,为重型病毒性肝炎的...
- 李黎
- 关键词：凝血酶原酶RNA干扰
- 文献传递
- 人纤维介素基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建人纤维介素(hfgl2)基因的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达。方法:提取人外周血单个核细胞的总RNA,逆转录得到cDNA,以其为模板,PCR扩增hfgl2 cDNA片段,将目的片段通过T载体过渡克隆至表达载体pcDNA3.1,将重组质粒转染CHO细胞并制作细胞爬片,对爬片进行免疫组化染色,显微镜下观察并摄片。结果:扩增出1.3 kb的目的片段,并将其克隆至pcDNA3.1,经酶切鉴定和测序鉴定无误;重组质粒转染CHO细胞,细胞爬片免疫组化染色可见细胞质中存在明显的阳性棕染。结论:成功构建hfgl2基因的真核表达载体,为进一步探讨其功能学和干预研究奠定了基础。
- 李黎朱传龙宁琴
- 关键词：基因表达病毒性肝炎
