李娴 作品数:21 被引量:67 H指数:6 供职机构: 中国林业科学研究院资源昆虫研究所 更多>> 发文基金: 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 国家林业局科研项目 国家林业公益性行业科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性 被引量:2 2015年 [目的]建立达摩凤蝶Papilio demoleus Linnaeus新孵幼虫细胞系,并对其生物学特性进行研究。[方法]使用改良配方的Grace培养基并辅以20%胎牛血清,通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系。通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定,获得4个新建细胞系的生物学特性数据。使用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(Ac MNPV-SEAP)。使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对Ac MNPVSEAP的半数组织培养感染剂量(TCID50),比较达摩凤蝶细胞系对Ac MNPV-SEAP的敏感性。[结果]建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系(RIRI-Pa De-1,RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3及RIRI-Pa De-4),且均传至60代以上。形态学方面,细胞系RIRI-Pa De-1和RIRI-Pa De-4较为相近,均由圆形、梭形以及多边形细胞组成,细胞系RIRIPa De-2主要为圆形细胞,而RIRI-Pa De-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞。细胞增殖动力学方面,4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77,67.42,81.48及65.43 h。核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布,其中RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3以及RIRI-Pa De-4的染色体数目分布区间比较接近,在45~97条之间,RIRI-Pa De-1的染色体条数相比偏少,在36~90条之间。通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因序列,证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织。比较4个细胞系对Ac MNPV-SEAP敏感性发现RIRI-Pa De-3对此病毒较为敏感,可作为重组杆状病毒表达的宿主。[结论]虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同,具有相同的遗传背景,但其生物学特征仍有明显差异,具有进一步研究的价值。 丁伟峰 冯颖 张欣 李娴 王成业 谢世聪关键词:昆虫细胞系 重组杆状病毒 五种昆虫多糖的体外抗氧化活性 被引量:15 2015年 采用邻苯三酚自氧化法、DPPH法、Fenton反应体系、FRAP分析法及对过氧化氢损伤细胞保护作用方法对白蜡虫Ericerus pela Cavannes雌成虫多糖、蝗虫多糖、喙尾琵甲多糖、美洲大蠊多糖及家蚕蛹多糖进行体外抗氧化研究,评价昆虫多糖总还原能力,对超氧阴离子自由基(O2-·)、DPPH·、羟自由基(·OH)的清除作用及损伤细胞存活率影响。试验结果表明,5种多糖对几种自由基均有不同程度的清除作用,且均呈现一定的量效关系;但对不同的氧化体系呈现不同的清除活性,白蜡虫多糖的总还原能力最强;白蜡虫、喙尾琵甲、美洲大蠊及蝗虫多糖对DPPH的清除率相对较明显;在羟自由基的清除能力上蚕蛹、喙尾琵甲及美洲大蠊多糖相对较强;各昆虫多糖对超氧阴离子清除能力不明显。5种多糖对过氧化氢损伤细胞有一定保护作用,在不同浓度范围内能增加细胞存活率。研究表明昆虫多糖具有一定抗氧化活性,可成为天然抗氧化物的来源。 何钊 李娴 孙龙 陈智勇 冯颖关键词:多糖 抗氧化 白蜡虫 美洲大蠊 蝗虫 蚕蛹 一种常压下红铝还原白蜡制备高级烷醇的方法 本发明涉及一种常压下红铝还原白蜡制备高级烷醇的方法,包括以下步骤,步骤一:将白蜡研磨过筛后置于反应容器中,加入还原剂,再加入有机溶剂,加热回流反应2‑6 h,所述还原剂为70%的红铝甲苯溶液;步骤二:反应结束旋蒸回收溶剂... 孙龙 冯颖 何钊 李娴 马琛婧 张欣 甘瑾 赵敏 陈晓鸣文献传递 一种改善学习记忆的高级烷醇脂质体及其制备方法 本发明提供一种改善学习记忆的高级烷醇脂质体及其制备方法,该方法步骤如下:将高级烷醇粉碎后过200目筛;将高级烷醇、磷脂、胆固醇放入锥形瓶中,再加入三氯甲烷,充分溶解后转移至圆底烧瓶中,在40℃水浴温度下旋转蒸发直至瓶底形... 孙龙 李娴 冯颖 何钊 张欣 马琛婧 甘瑾 赵敏文献传递 美洲大蠊油脂的提取及性质分析 被引量:8 2016年 为确定美洲大蠊成虫油脂的提取方法、性质及脂肪酸构成,为其利用奠定基础,采用响应曲面对超声波-微波提取美洲大蠊油脂条件进行优化,分析了油脂的热力学性质、脂肪酸构成及理化指标。结果表明,美洲大蠊成虫油脂超声波-微波法提取的最佳条件是时间5 min,液料比10∶1,超声波功率321.35 W,微波功率179.84 W,温度50.07℃,理论得率为31.00%,实际得率为30.65%。GC-MS检测到13种脂肪酸,棕榈酸、油酸、亚油酸为主要成分,占总脂肪酸的77.02%,含量分别为70.47、36.49、81.38 mg/g。不饱和脂肪酸含量高,占总脂肪酸的71.49%。油脂RGB颜色的饱和度(HIS)S为0.67,偏黄色,油脂的碘值为128.11g/100 g、酸值为8.73 mg/g、过氧化值为1.10 mmol/kg、皂化值为407.17 mg/g、熔点为3.56℃,结晶点为-36.37℃。油脂品质较好,可以作为潜在的食用油脂来源。 袁东强 何钊 孙龙 李娴 赵敏 冯颖关键词:美洲大蠊 油脂 GC-MS 理化性质 DSC 昆虫细胞系建立及细胞系库管理技术 冯颖 张欣 丁伟峰 王成业 马艳 李娴 马涛 成果重要性概述:离体昆虫细胞系可用于基础生物学、毒理测定、基因工程、生物制药和生物农药研究和应用等多方面,是重要的生物资源.新昆虫细胞系建立技术和细胞库管理技术的确定,增加了可供利用的新昆虫细胞系、并有效保存昆虫细胞系资...关键词:关键词:昆虫 基因工程 余甘原汁中多酚的大孔树脂提取分离及其抗氧化活性 被引量:3 2018年 为研究余甘子多酚的分离提取方法,本文以余甘原汁为原料,采用NKA-Ⅱ大孔吸附树脂,对上样量、洗脱剂、洗脱体积及洗脱速度等条件进行了考察,并对提取物的抗氧化活性进行了对比分析。通过试验确定了余甘原汁多酚的大孔树脂分离提取条件为:上样速度2BV/h,上样量0.8BV,洗脱剂为70%乙醇溶液,洗脱体积3BV,洗脱速度8BV/h,在此条件下NKA-Ⅱ大孔树脂对余甘原汁中多酚的吸附率可达到88.42%,洗脱率为90.93%,提取率为80.39%;对提取物的抗氧化活性分析显示,与分离前的余甘原汁干燥物相比,提取物的多酚和维生素C含量均提高了0.53倍,类超氧化物歧化酶活性(SODL)提高了1.4倍;铁离子还原能力(FRAP)明显高于分离前,对DPPH自由基、ABTS自由基及脂质氧化的半抑制浓度(IC50)均显著低于分离前的原汁干燥物,表明通过大孔吸附树脂分离,使余甘原汁中的多酚等抗氧化活性成分得到了有效的分离纯化。 甘瑾 何钊 李娴 侯彬 冯颖关键词:多酚 大孔吸附树脂 抗氧化活性 昆虫细胞系的建立方法 本发明提供一种昆虫细胞系的建立方法,经过虫体灭菌处理、清洗、剪碎、消化处理,得昆虫细胞悬液,加入改良培养基培养、传代,从而建立昆虫细胞系。通过本发明对多种昆虫组织细胞进行了原代及传代培养,取得了较好的培养效果,从而建立了... 冯颖 张欣 丁伟峰 李娴 马涛 孙龙 何钊文献传递 白蜡虫多糖免疫调节与抑制肿瘤活性 被引量:7 2014年 采用环磷酰胺诱导免疫低下小鼠模型,通过测定模型小鼠的炭粒廓清指数、吞噬指数、胸腺指数和脾指数考察白蜡虫多糖的免疫调节能力;对接种S180瘤细胞的小鼠采用口服和注射方式提供白蜡虫多糖,以抑瘤率考察白蜡虫多糖体内抑瘤活性;以生长率为指标考察白蜡虫多糖对人白血病细胞株、人肺癌细胞株、人胃癌细胞株及人肝癌细胞株等4种肿瘤细胞的抑制作用。结果显示:白蜡虫粗多糖(Cwps)和纯化多糖(Pwps)均能明显增加免疫低下小鼠碳粒廓清指数及吞噬指数,但对胸腺指数和脾指数无改善作用;体内抑瘤试验发现,白蜡虫多糖对小鼠体内S180有明显的抑瘤效果,但对离体肿瘤细胞生长却无明显抑制作用。研究结果表明:白蜡虫多糖能增加免疫低下小鼠的非特性免疫能力,具有体内抑制肿瘤作用,但对肿瘤细胞无细胞毒作用,揭示白蜡虫多糖通过提高小鼠免疫能力达到体内抑制肿瘤的功效。 冯颖 何钊 李娴 陈智勇 孙龙关键词:白蜡虫 多糖 免疫调节 肿瘤抑制 大孔吸附树脂对白蜡虫多糖脱色及抗氧化活性的影响 被引量:8 2014年 试验研究了大孔吸附树脂对白蜡虫粗多糖脱色效果的影响和脱色前后多糖抗氧化活性的变化。通过静态吸附法确定大孔吸附树脂NKA-9较适合白蜡虫粗多糖脱色,动态吸附法确定白蜡虫多糖脱色条件为30℃下10 mg·mL-1多糖溶液(pH值8.0)以1 BV·h-1流速上样1 BV后,以5 BV水洗脱,脱色率为71.4%、脱蛋白率51.9%、多糖收率为60%。体外细胞抗氧化结果表明:脱色前多糖溶液仅在1 000μg·mL-1浓度时能提升过氧化氢损伤人神经母细胞瘤细胞的存活率,而脱色后多糖溶液在10 1 000μg·mL-1范围内均能提升模型细胞存活率,其中,1 000μg·mL-1的脱色白蜡虫多糖与模型组的差异显著(P<0.01),结果表明,脱色后多糖抗氧化能力增加。 何钊 李娴 陈智勇 孙龙 冯颖关键词:白蜡虫 多糖 脱色 大孔吸附树脂 抗氧化 人神经母细胞瘤细胞