李刚山
- 作品数：82 被引量：174H指数：6
- 供职机构：成都军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 犬2型腺病毒E1转化细胞系的特性研究被引量：1
- 2003年
- 对筛选到的一株CAV-2 E1转化细胞(DK/E1)进行了初步的特性研究。以DK细胞为对照,观察到转化细胞的形态与DK细胞有明显区别,细胞变长,易聚集生长。通过测定DK及DK/E1细胞分别在2％、5％和10％牛血清培养基中的生长曲线,结果发现DK/E1细胞的生长速度比DK细胞快。用蚀斑和TCID50测定了病毒在DK和DK/E1细胞上的病毒滴度,结果表明DK/E1细胞产生的病毒蚀斑比DK细胞的大,TCID50测得的病毒滴度比DK细胞产生的病毒滴度高。CAV-2全基因组DNA对DK/E1细胞和DK细胞的转染试验结果表明,5μg和10μg的CAV-2DNA转染的DK/E1细胞,分别在转染后第14天和第11天均出现了典型的腺病毒细胞病变,而相同量CAV-2 DNA转染的DK细胞未出现病变,说明DK/E1细胞有助于CAV-2 DNA的复制和病毒粒子的包装。在DK/E1细胞内的重组试验表明,DK/E1细胞也有利于重组病毒的产生。以上转化特性在DK/E1细胞传至80代时仍保持不变,说明本试验获得了一株CAV-2 E1基因的转化细胞系。
- 邱薇夏咸柱范泉水扈荣良王雷高玉伟孙阳尹惠琼李刚山
- 关键词：犬2型腺病毒病毒载体转染
- 小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：9
- 2015年
- 目的了解昆明市腹泻患者粪便标本中分离出的少见致病性小肠结肠炎耶尔森菌与其他地区该菌生物特性的差异。方法采集腹泻患者新鲜粪便标本,用磷酸盐缓冲液(PSB)4℃增菌21 d后,接种CIN培养基平板,25℃培养48 h,分离获得纯培养菌,采用肠杆菌科细菌微量生化编码管(GYZ-11e系统)进行鉴定,API-20E生化鉴定编码系列进行复核,使用小肠结肠炎耶尔森菌诊断血清进行血清分型,PCR检测菌株携带的毒力基因,采用K-B法测定小肠结肠炎耶尔森菌的毒力。结果分离到7株小肠结肠炎耶尔森菌,经鉴定为O∶8血清型小肠结肠炎耶尔森菌。毒力试验结果显示,小白鼠48 h内均发病死亡。PCR检测结果表明,有6株携带的毒力基因为ail-,yst A-、yst B+、yad A-、vir F-,1株为ail-、yst A+、yst B-、yad A-、vir F-。药敏试验显示,该菌对20种常见抗生素敏感率为80%。结论本研究分离得到7株O∶8型小肠结肠炎耶尔森菌,具有潜在的致病性和较强的毒力,是国内不多见的致病性菌型。
- 姜晓梅李刚山王意银覃敏王惠萱黄卫昆范泉水
- 关键词：小肠结肠炎耶尔森菌腹泻毒力基因药敏谱
- 云南4株狂犬病毒N和G基因的克隆及测序被引量：4
- 2008年
- 目的：认识云南狂犬病毒株N基因和G基因的结构特征及其与已知毒株的遗传相关性。方法：对2006-2007年云南曲靖（YNQJ07）、昭通（YNZT07）、楚雄（YNMD06）、保山（YNTC06）狂犬病毒株N基因和G基因进行RT-PCR扩增，克隆至pPICZαA载体进行测序，并与已知代表性毒株进行比对及系统发育分析。结果：云南狂犬病毒株均属于基因Ⅰ型毒株，YNQJ07、YNZT07、YNMD06以及近年部分广西、浙江、江苏、湖北、安徽、江西省毒株N基因和G基因核酸序列同源性分别介于97.0%-99.3%、97.4%-99.3%，与其它基因I型毒株同源性分别介于86.3%-90.2%、82.9%-93.0%。YNTC06与泰国和部分广西毒株同源性介于95.0%-95.8%，与其它基因Ⅰ型毒株同源性介于82.9%-92.9%。结论：YNQJ07、YNZT07、YNMD06属于亚组群Ⅱ毒株，YNTC06毒株属于亚组群Ⅲ毒株，云南狂犬病毒核蛋白和糖蛋白存在特异性氨基酸变异位点。
- 赵焕云张文东金卫华杨斌张富强李朝仓李刚山宋建领何晓辉周建国胡媛媛王永贤张应国范泉水李作生高云英
- 关键词：狂犬病毒测序
- 云南省不同宿主H9N2感染调查和NA分子进化分析被引量：4
- 2011年
- 2006年6月-2007年10月,从云南省16个地州随机采集的各种家禽、家猪的喉气管和口腔棉拭子样品7 901份,应用RT-PCR结合血凝、血凝抑制试验和抗原捕捉ELISA,检测H9N2亚型禽流感感染情况,选择具有代表性的阳性样品,克隆NA全基因并进行基因序列分和推导氨基酸的糖基化位点分析。结果表明,云南省2006-2007年H9N2亚型禽流感病毒在全省14个地州均有流行,感染宿主包括鸡、鸭、鹅和猪;分离的19个毒株中的13个鸡源和1个鹅源毒珠的NA全基因长1 407bp,编码469个氨基酸,同源性为96.1%～99.6%,是目前云南省流行的优势亚群;3个鸭源毒株、1个鹅源和1个猪源毒株NA基因长1 398bp,编码466个氨基酸,5个非鸡源毒株的NA基因的同源性为99%,构成云南目前流行的另一分支,推导氨基酸第61～63位3个氨基酸的缺失是与优势分支的特征性区别;2个分支间NA基因同源性为90%,与国内外其他毒株比较神经氨酸酶基因序列具有多态性。
- 张泉鹏李作生鲍晓伟李乙江张富强郑钧丰王意银张应国张文东宋建领邱薇李刚山张向荣范泉水
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因
- 云南部队腹泻患者中首次检出EIEC O_(124):K_(72)被引量：1
- 2010年
- 目的:了解EIEC O124:K72在云南部队引起腹泻的情况,对EIEC O124:K72进行分离鉴定。方法:分离培养,生化鉴定,血清分型,豚鼠角膜试验测定侵袭力,药敏试验采用K-B法。结果:从671份腹泻患者粪便标本中检出6株EIECO124:K72,所分离菌株均有较强的侵袭力,对17种抗生素敏感,1种耐药。结论:分离的6株EIEC O124:K72具有较强侵袭力,与致病性密切相关。药敏试验可作为此菌感染时临床用药的重要参考。
- 王意银李刚山朱琼媛朱姝媛邓波刘德华胡挺松秦海燕古良琪王惠萱张朝雄周丽华李明邱薇张富强李作生黄留玉范泉水
- 关键词：腹泻药敏试验
- 感染性腹泻患者中缓慢爱德华菌的分离鉴定及侵袭性实验研究被引量：3
- 2002年
- 感染性腹泻是一组由不同病原体引起的肠道传染病,也是当今全球性重要公共卫生问题之一.
- 李刚山尹惠琼邱薇孙阳龙沛然徐庆
- 关键词：感染性腹泻
- 一起由副溶血弧菌引起的急性胃肠炎
- 本文报告了一起由副溶血弧菌引起的急性胃肠炎,对该病的产生原因、发病机制进行了分析和讨论,并提出了防止该病发生的措施和建议.
- 李刚山孙阳龙沛然范泉水丘薇尹惠琼
- 关键词：急性胃肠炎副溶血弧菌流行病学细菌学
- 文献传递
- 军犬侵袭性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
- 目的：探讨军犬侵袭性大肠杆茵的分离鉴定及药敏试验的方法。方法 采集犬肠内溶物划线培养，纯化，革兰氏染色，镜检，生化试验，血清试验：药敏试验。结果 革兰氏染色为阴性，生化试验鉴定为大肠埃希菌，血清凝集试验EIEC诊断为阳性...
- 刘华李刚山张富强范泉水尹革芬郑颖覃敏靳杭红邱薇
- 关键词：大肠埃希菌药敏试验
- 甲型副伤寒细菌单克隆抗体的制备及其初步应用被引量：1
- 2016年
- 目的制备甲型副伤寒特异性多糖（O-specific polysaccharide,O-SP）单克隆抗体,建立鉴定甲型副伤寒沙门血清型细菌的全菌体ELISA和O-SP的竞争ELISA定量检测方法。方法用甲型副伤寒全菌体免疫小鼠,通过常规方法融合,以破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）为载体偶联的O-SP为筛选检测抗原,间接ELISA法筛选分泌抗甲型副伤寒O-SP的特异性抗体杂交瘤细胞株;分别以甲型和乙型副伤寒的O-SP-TT及伤寒Vi-TT为包被抗原,检测制备的单克隆抗体与不同血清型细菌多糖的交叉反应;以不同沙门菌菌体为包被抗原,用制备的1株甲型副伤寒O-SP特异性单克隆抗体进行菌体间接ELISA,检测细菌血清型;用该株单克隆抗体为竞争抗体,建立定量检测样品中O-SP的竞争ELISA方法。结果筛选出6株分泌抗甲型副伤寒O-SP抗体的杂交瘤阳性细胞株;其中2株仅与甲型副伤寒O-SP呈特异性反应,其余4株与乙型副伤寒O-SP呈交叉反应;用其中1株单克隆抗体进行的菌体间接ELISA显示,该株单克隆抗体仅与甲型副伤寒沙门菌反应,而不与伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和肠炎沙门菌反应;竞争ELISA定量检测O-SP的检测范围在0.4~0.003 2μg/ml最准确。结论制备的特异性抗甲型副伤寒O-SP的单克隆抗体可用于甲型副伤寒细菌血清型快速鉴定和O-SP的竞争ELISA定量检测。
- 代云波李生迪钱雯黄微王志慧江曼台晓媛樊会兰吴俊波吴凯马波李刚山李作生
- 关键词：甲型副伤寒单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 云南边境地区登革1型病毒非结构蛋白编码区序列测定及进化分析
- 2010年
- 登革病毒有4个血清型，可引起登革热和登革出血热／登革休克综合征。登革病毒包括5’和3’非编码区（UTR）及一个单一的开放阅读框（ORF），该ORF编码一个聚蛋白前体，经蛋白酶裂解加工成3种结构蛋白（C、PrM和E）和7种非结构蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5）。我国云南省边境与登革热流行区的缅甸和泰国等东南亚国家接壤，自然生态环境又与东南亚地区相似，
- 苑述友蔡学敏张富强邱薇李刚山刘华尹革芬李作生郑颖王双印张海林范泉水
- 关键词：非结构蛋白编码区进化分析
