方立
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 温固化水凝胶复合细胞外基质与膀胱平滑肌细胞的相容性
- 2007年
- 目的:选用膀胱平滑肌细胞为实验细胞,评估细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架材料的生物相容性。方法:实验于2005-02/05在武汉大学人民医院泌尿外科研究室完成。①实验分组:实验分为4组。细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架组:细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架种植平滑肌细胞;单纯细胞外基质组:单纯细胞外基质种植平滑肌细胞;阴性对照组:单纯培养平滑肌细胞;空白对照组:无细胞培养液。②实验操作:种植细胞前先用培养液将支架材料预湿,取第3代兔膀胱平滑肌细胞悬液(1×108L-1)50μL缓慢接种于材料上。③实验评估:培养2d后倒置相差显微镜下观察细胞黏附、生长情况以及扫描电镜下观察细胞在材料上的空间生长情况;培养5,10d取细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架组、单纯细胞外基质组材料,进行细胞计数,观察细胞黏附数量;培养1,3,5,7d时MTT法检测细胞的活力。结果:①相差显微镜下可见细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合材料为红染的网状结构,纤维较粗,网孔直径较小,未见到细胞碎片;种植平滑肌细胞后6h,可见细胞紧密黏附于材料表面;种植平滑肌细胞后12h,可见细胞已伸展,有多个突起;培养3d时,贴附于材料的细胞数量增加,细胞增殖明显。②扫描电镜下可见发育良好的细胞附于材料上,伪足沿纤维伸展,附着牢固,细胞间连接紧密,可见到细胞外基质分泌。③膀胱平滑肌细胞在单纯细胞外基质上黏附性良好,黏附率为87.6%,复合温度敏感性水凝胶后的细胞外基质表面黏附能力较之增强,黏附率为96.7%。④细胞活力:细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架组、阴性对照组细胞活力(A)高于单纯细胞外基质组,差异有显著性意义(P<0.05,0.01),培养1,3,5d细胞外基质/温度敏感性水凝胶复合支架组细胞活力(A)低于阴性对照组,培养7d高于阴性对照组,差异�
- 姚颐张杰方立叶达夫彭建平李强
- 关键词：水凝胶细胞外基质复合支架材料生物相容性
- LeftyA蛋白对转化生长因子β1所致肾小管上皮细胞纤维化的影响
- 2010年
- 目的 观察LeftyA蛋白对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）纤维化的影响,并初步探讨其作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2）细胞,通过LipofectamineTM2000介导基因转染及药物筛选构建LeftyA蛋白稳定表达HK-2细胞系;TGF-β1（10ng/ml）刺激此细胞系,于0、6、12、24、48h通过Western blot分别检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及p-Smad2/3的表达变化,通过Real-time PCR检测Ⅰ型胶原（ColⅠ）及结缔组织生长因子（CTGF）基因的表达变化.结果 不同浓度的TGF-β1刺激24 h后HK-2细胞内E-eadherin、α-SMA蛋白的变化均表现出明显的剂量效应,而当TGF-β1浓度达到10ng/ml时,α-SMA蛋白合成达到平台期（P＞0.01）,因此本实验中以10ng/ml的TGF-β1作为刺激剂量;TGF-β1（10 ng/ml）刺激HK-2细胞6 h可引起E-cadherin表达下降（P＜0.01）,刺激24 h后可诱导其合成表达α-SMA（P＜0.05）,同时细胞内ColⅠ基因转录增加（P＜0.01）;正常HK-2细胞内没有p-Smad2/3的表达,TGF-β1（10 ng/ml）刺激30min即可诱导其激活表达,并在1 h时迅速达到高峰,其后开始下降;高表达LeftyA蛋白能够减轻TGF-β1所致上皮细胞转分化（EMT）及纤维化的程度,降低p-Smad2/3的表达高峰,并抑制CTGF的表达（P＜0.01）.结论 LeftyA蛋白能够通过抑制TGF-β1所致Smad2/3磷酸化及CTGF表达发挥抗肾小管上皮细胞纤维化的作用.
- 李又空张杰姚颐方立李万强
- 关键词：肾小管间质纤维化转化生长因子Β
- 肾上腺皮质细胞移植研究进展
- 2009年
- 为治疗各种原因引起的肾上腺皮质功能不全，人们进行了肾上腺移植的探索，时至今日，临床疗效并不理想。当前学者主要以皮质细胞为研究对象，探讨肾上腺细胞如何再生，如何促进其再生及如何将干细胞诱导分化为肾上腺皮质细胞的问题。现就以上进展作一综述。
- 方立张杰
- 关键词：肾上腺皮质细胞移植
- 两种不同方法培养大鼠肾上腺细胞的比较
- 2009年
- 目的观察胶原凝胶三维培养对肾上腺细胞形态和功能的影响。方法分离SD大鼠乳鼠肾上腺细胞，于自制鼠尾Ⅰ型胶原凝胶中培养14d，与传统平面培养的肾上腺细胞相对比，比较两者在细胞形态、细胞增殖率、蛋白表达和分泌功能方面的差异。结果两种培养方式下，肾上腺细胞均能表达其特异性细胞色素氧化酶CYP11B1和CYP11B2。原代培养8d后，三维胶原凝胶培养大鼠肾上腺细胞的增殖率显著高于平面培养，至第14天，胶原凝胶中培养的肾上腺细胞增殖率为16．6％，而传统平面培养的仅为2．9％。胶原凝胶中培养的肾上腺细胞分泌功能维持时间更长，第14天其培养液中皮质酮和醛固酮浓度分别为（278．33±38．20）μg/L和（133．85±38．20）ng／L，而相应的平面培养肾上腺细胞分泌皮质酮和醛固酮浓度分别为（160．35±28．12）μg／L和（74．03±12．12）ng／L，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胶原凝胶中三维培养肾上腺细胞更有利于细胞功能的维持。
- 方立张杰杜贤进李又空彭建平
- 关键词：肾上腺细胞
- 人重度积水肾组织的基因芯片分析及左右不对称发育因子1的表达变化被引量：2
- 2010年
- 目的用基因芯片技术研究人重度积水肾与正常肾组织中表达差异的基因，探讨重度积水后人肾组织发生纤维化病变的分子机制。方法收集临床重度肾积水新鲜标本12例（积水组）、正常肾组织标本6例（对照组），包括组织切片及核素肾动态显像（SPECT）检测结果。分别提取总RNA并纯化，选择转化生长因子（TGF）-β／骨形成蛋白（BMP）信号通路聚合酶链反应（PCR）芯片，采用比较阈值（△△C1）法分析两组基因的表达差异。以免疫组织化学法检测两组标本中左右不对称发育因子（LEFTY）1的表达。结果与对照组比较，积水组肾组织结构破坏严重，表现为广泛的纤维化样改变。SPECT提示积水组患。肾肾小球滤过率（GFR）为（8．7±3．5）ml／min，而对照组GFR为（46．7±6．9）ml／min。PCR芯片筛查提示，积水组表达显著性上调的基因25个，包括BMP3、Ⅰ型胶原α1链（Col—Ⅰα1）、Nodal、GSC、胰岛素样生长因子（IGF）1等；下调24个，包括LEFTY-1、BMP7、BMP2和骨形成蛋白内皮结合调节因子（BMPER）等。免疫组织化学检查发现，积水组肾组织中LEFTY—A的表达明显低于对照组（P〈0．05），约为正常肾组织的（23．37～29．46）％。结论LEFTY基因和蛋白在重度积水肾组织中的极低表达，提示LEFTY可能具有延缓纤维化形成并促进胶原降解的“双效应”作用，延缓。肾积水-肾纤维化改变。
- 林亮姚颐张杰叶达夫谭大清彭建平方立
- 关键词：肾积水肾纤维化基因芯片
- LeftyA真核表达载体的构建及其对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的构建pcDNA3．1-LeftyA真核表达载体，观察其对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人。肾小管上皮细胞（HK-2）转分化（EMT）的影响。方法基因克隆技术构建pcDNA3．1-LeftyA真核表达载体，将其瞬时转染HK-2细胞，TGF-β1（10μg／L）刺激后，观察细胞形态变化，检测E-钙黏蛋白（E—cadherin）、d-平滑肌肌动蛋白（仅-SMA）基因及蛋白的表达。结果TGF-β1刺激后HK．2细胞内E—cadherin mRNA和蛋白时间依赖性表达下调，α-SMAmRNA和蛋白时间依赖性表达上调，同时E-cadherin表达变化早于α-SMA；LeftyA蛋白可以显著抑制E—cadherin蛋白的下调表达（P〈0．05），其表达比同时间点单纯刺激组高17．6％；同时可逆转d—SMA蛋白的上调表达（P〈0．05），其蛋白表达比单纯刺激组低14．0％。结论LeftyA蛋白可以抑制TGF-β1所致的EMT。
- 李又空张杰姚颐方立罗鹏程周晓光
- 关键词：上皮细胞转分化转化生长因子-Β1
- 大鼠肾上腺细胞经胶原凝胶三维培养后进行同种移植的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨大鼠肾上腺细胞经胶原凝胶三维培养后进行同种移植治疗肾上腺功能不全的可行性。方法分离SD大鼠（出生3d内的乳鼠）的肾上腺细胞，置于自制鼠尾Ⅰ型胶原凝胶中培养，1周后移植到双侧肾上腺切除的成年雄性SD大鼠肾被膜下。术后每周取血1次，测量血浆皮质酮和醛固酮的水平；移植8周后处死大鼠，观察移植物的组织学特点；肾上腺细胞的增殖情况及CYP11B1和CYP11B2蛋白的表达情况；并与单纯肾上腺细胞移植组和正常对照组相比较。结果大鼠移植经胶原凝胶三维培养的肾上腺细胞后，80％（12／15）存活达8周；手术后血浆皮质酮水平显著高于同期单纯肾上腺细胞移植组，移植6～8周时，与正常对照组已无显著性差异；其醛固酮水平术后恢复缓慢，与单纯肾上腺细胞移植组的差异无统计学意义；移植后肾上腺细胞在胶原内生长良好，增殖率高，95％为束状带细胞，表达CYP11B1，而表达CYP11B2的球状带细胞仅占5％，未见炎症细胞浸润。结论肾上腺细胞经胶原凝胶三维培养后移植能形成有功能的血管化肾上腺组织，长期效果理想，有望成为临床治疗肾上腺功能不全的有效方法。
- 方立张杰彭建平李又空杜贤进韦梅红
- 关键词：肾上腺胶原
