张笑人
- 作品数：43 被引量：121H指数：7
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人卵巢癌cDNA表达文库的构建被引量：6
- 1998年
- 以polyA^+ mRNA提取试剂盒从卵巢癌组织中获得高质量的polyA^+ mRNA,并以此合成第1、2链cDNA.cDNA两端补平后加EcoR Ⅰ接头,Xbo酶切,通过分级分离去除<400bP的片段.取100ng cDNA与噬菌体表达载体Uni-ZAP XR连接,体外进行噬菌体DNA包装,并立即进行文库的滴定和扩增,获得卵巢癌cDNA表达文库.该文库原始重组子为10~6独立克隆;重组率>99%;并以引物PUCⅠ、PUCⅡ扩增插入片段,平均大小约为1.1kb.证实此cDNA表达文库合格.以PCR从此cDNA表达文库中筛选HLA-DPB和β-actin基因,获得成功.
- 张笑人葛海良王颖周光炎蔡晓敏谢毅柴建华
- 关键词：卵巢癌CDNA文库PCR
- 体外培养中黑色素瘤细胞表面HLAI类分子丢失的鉴定被引量：1
- 1999年
- 应用流式细胞术，从ＨＬＡＡ２阳性人黑色素瘤细胞系（６２４Ｍｅｌ）中选择培养，鉴定出一株丢失ＨＬＡ—Ａ２分子的黑色素瘤细胞（６２４—ｎＭｅｌ），它具有抵抗ＨＬＡＡ２限制的、黑色素瘤抗原肽特异性ＴＩＬ杀伤作用。经ｒＩＦＮγ诱导，能提高６２４－ＭｅｌＨＬＡ－Ａ２分子表达，而不能增强６２４ｎＭｅｌＨＬＡ－Ａ２分子表达和其对ＴＩＬ的敏感性。结果提示，ＴＩＬ对瘤细胞抗原的识别依赖于ＨＬＡⅠ类分子，而瘤细胞ＨＬＡⅠ类分子的缺失可能是肿瘤逃逸机体免疫监视的一个重要因素。
- 葛海良张笑人王树军张惠珍
- 关键词：黑色素瘤流式细胞术肿瘤浸润性
- HLA—A＊0201的cDNA克隆及在COS—7细胞上的瞬时表达
- 2001年
- 目的 :克隆HLA A 0 2 0 1编码区的cDNA ,并建立在COS 7细胞上的瞬时表达系统。方法 :采用逆转录 PCR技术从HLA A 0 2 0 1阳性的淋巴细胞中获得HLA A的cDNA ,将其定向克隆至载体pBluescriptIISK(+ / - )中 ,经测序确证后 ,将该基因插入真核表达载体pcDNA3中 ,通过阳离子脂质体介导转染至COS 7细胞 ,用流式细胞仪测定细胞表面HLA A 0 2 0 1分子的瞬时表达。结果 :获得的HLA A 0 2 0 1基因的cDNA序列与Genebank登录的cDNA序列一致。FACS检测结果显示 ,COS 7细胞上HLA A 0 2 0 1的表达率为 5 3%。结论 :成功克隆HLA A 0 2 0 1基因 ,并实现了在COS 7细胞上的瞬时表达 ,为研究HLA
- 尤强葛海良张笑人王颖周光炎
- 关键词：COS-7细胞CDNA基因治疗
- 人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究被引量：11
- 2003年
- 目的:探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法:采用Westernblot、免疫组化和流式细胞术,检测卵巢癌细胞中HLA分子表达,以RT-PCR技术,分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC Ⅱ类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达。结果:被检测的11株卵巢癌细胞中,HLA-Ⅰ类分子异常的表达率达为45％。而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关。卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CIITA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后,其HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达增强;而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞,其HLA分子的表达无增强作用。结论:卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷,是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素,提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达。
- 葛海良张笑人王颖马安伦张惠珍王树军周光炎
- 关键词：人卵巢癌细胞HLA分子相关基因表达
- 非经典NF-kB通路的小分子抑制剂及其应用
- 本发明涉及非经典NF‑kB通路的小分子抑制剂及其应用。具体而言，本发明提供能抑制或阻止RelB蛋白与其靶DNA结合的试剂或能抑制RelB蛋白的转录功能的试剂在制备治疗或预防受益于RelB蛋白与其靶DNA的结合受阻而使得非...
- 张笑人朱维良李翠峰蒋宇航杨卓徐志建
- 文献传递
- CD40单克隆抗体的制备、筛选及功能鉴定
- 2017年
- CD40是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,其自然配体是CD40L。CD40-CD40L信号通路在许多重要的生理和病理过程中都起到关键的调节作用。基于其在激活免疫应答中的重要作用,在肿瘤免疫治疗中,具有激活CD40-CD40L信号的CD40激动剂抗体可用于提高抗肿瘤免疫应答;在移植排斥和炎症反应中,CD40-CD40L信号也起重要作用,阻断CD40信号通路是目前治疗风湿性关节炎、肠炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化和糖尿病的一个重要靶点。制备CD40阻断性抗体或激动剂抗体不仅可用于检测CD40分子表达,还可以开发用于炎症性疾病或肿瘤治疗的免疫疗法。本研究表达CD40胞外段蛋白,通过免疫制备14株CD40单克隆抗体,筛选发现全部可作为western blotting检测CD40蛋白表达的抗体,9株CD40抗体可作为一抗用于流式细胞术检测人CD40表达,1株CD40抗体能阻断人CD40L和CD40相互作用。有意义的是,8株CD40抗体能激活人CD40分子信号通路,另外有10株能激活小鼠脾脏细胞CD40下游基因的表达,7株能上调小鼠脾脏B细胞表面共刺激分子CD86的表达。本研究制备一系列CD40抗体,可用于CD40检测、CD40信号的阻断或激活。
- 张界李玲玲詹誉刘丹丹彭宝珍刘寒梢张笑人
- 关键词：CD40单克隆抗体
- 抑制肿瘤转移的方法和试剂
- 本发明涉及抑制肿瘤转移的方法和试剂。首次揭示Bcl-3与肿瘤(如乳腺癌)的转移密切相关，是一种在肿瘤转移机制中发挥重要作用的因素，从而可以作为药物靶点开发抑制肿瘤转移的药物。
- 张笑人曹新伟孙小华
- 文献传递
- 长链非编码RNA在结直肠癌中的应用
- 本发明提供了一种分离的长链非编码RNA(LncRNA)集合，其包括LncRNA 91H、和选自PVT‑1和MEG3的一种或多种。具体地，本发明提供了一种或多种长链LncRNA及其组合在结直肠癌早期无创性诊断中的应用。本发...
- 刘寒梢张笑人
- 文献传递
- 人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究
- 研究卵巢癌细胞HLA—Ⅰ、—Ⅱ类分子表达异常的分子基础及IFN—γ诱导HLA分子表达与MHCⅡ类反式激活蛋白(CⅡTA)表达的关系,有助于弄清肿瘤细胞逃逸机体免疫监视的机制以及提高肿瘤细胞抗原性和增强肿瘤免疫疗效。
- 葛海良王颖张笑人张惠珍王树军马安伦周光炎
- 关键词：卵巢癌IFN-Γ
- 文献传递
- 铁剂在提升缺铁性贫血病人B细胞水平中的应用
- 本发明涉及铁剂在提升缺铁性贫血病人B细胞水平中的应用；即铁剂(叶酸亚铁)在给予缺铁性贫血病人时，能显著回复贫血导致的B细胞水平下降的症状。本发明发现了铁剂叶酸亚铁可用于制备治疗缺铁性贫血引发的B细胞功能缺陷的药物，扩大了...
- 王福俤张笑人吴谦蒋宇航
- 文献传递
