张敬之
- 作品数：42 被引量：71H指数：4
- 供职机构：上海交通大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 用诱导性多能干细胞进行临床治疗的安全考量
- 2013年
- 诱导性多能干细胞(iPSCs)和胚胎干细胞(ESCs)具有高度相似性。在理论上,iPSCs避免了ESCs无法回避的免疫排斥和伦理问题,为再生医学提供重要的细胞资源,具有广阔的临床治疗前景。然而,为实现其在临床上的应用,还须克服诸多问题,如已发现iPSCs具有潜在的致瘤性和免疫原性,以及iPSCs在重编程和传代培养过程中发生基因组变异和表观遗传改变的可能性等。就iPSCs临床应用所面临的主要问题进行总结并探讨可能的解决方法。
- 张斯敏杨冠恒张敬之
- 关键词：诱导性多能干细胞免疫原性基因组变异表观遗传变异致瘤性
- 在宿主细胞内仅有部分慢病毒载体发生了功能性整合
- 2015年
- 目的研究慢病毒在感染细胞后，是否全部整合入染色体。方法用慢病毒载体的假病毒感染293T细胞后．抽提培养2d和10d的细胞基因组DNA。通过定量PCR检测细胞基因组中LTR拷贝数，计算出整合率。分别取病毒感染3d和11d的细胞，离心重悬后取部分细胞放在荧光显微镜下拍照，在蛋白水平上验证此结论。结果①慢病毒载体在宿主细胞基因组内的平均整合率（47±16）％（n=10）；②细胞感染慢病毒后3d和11d的GFP照片也证实了慢病毒在宿主细胞基因组内部分整合。结论慢病毒载体的假病毒感染293T细胞后，仅有部分的载体骨架是整合人基因组中的，整合入293T细胞基因组中的外源基因能够较长时间稳定表达。
- 张丽萍高越檀硕张敬之
- 关键词：慢病毒载体基因治疗转染
- 一种低通读率慢病毒载体及方法
- 本发明公开了一种低通读率慢病毒载体及降低慢病毒载体通读率的方法。该低通读率慢病毒载体是在慢病毒载体的3’LTR的U3区插入了cHS4的400bp核心序列和SV40的2×USE两种元件中的任何一种或两种所得的。插入的片段最...
- 曾溢滔张敬之方彧聃孙凤强
- 慢病毒载体对内含子的保护现象的探究
- 以艾滋病毒(HIV-1)为基本骨架的慢病毒载体,是上个世纪九十年代末由 Naldini 等通过对 HIV-1基因的功能性删减和分割开发而成。至今,慢病毒载体已研制到第四代,该载体具有既能感染分裂细胞又能感染静息细胞并在宿...
- 方彧聃谢书阳龚秀丽任兆瑞曾凡一张敬之
- 关键词：内含子剪切
- 慢病毒载体介导的转人ahsp基因的β^(654)地中海贫血小鼠的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:经慢病毒载体介导,制备转人α血红蛋白稳定蛋白基因(ahsp)的β654地中海贫血小鼠。方法:用巢式PCR从人血DNA中获得人ahsp基因,构建含有人ahsp基因的慢病毒载体,制备假病毒,通过卵周隙显微注射手段将其导入β654地贫小鼠的受精卵,经移植至假孕母鼠输卵管,最终孕育出转人ahsp基因的β654地贫小鼠;分析小鼠体内外源ahsp基因的表达情况及其遗传稳定性。结果:共获得了8只人ahsp阳性小鼠,转基因阳性率为32%(8/25),其中3只同时具有β654突变基因;人ahsp基因在小鼠体内的表达水平维持在小鼠自身ahsp表达量的1%左右,且可稳定遗传至子代。结论:制备了转人ahsp基因小鼠,并可遗传至子代,为在个体水平上研究α血红蛋白稳定蛋白与β地贫之间的关系提供了工具。
- 王宝斌方彧聃郭歆冰任兆瑞张敬之
- 关键词：慢病毒载体转基因小鼠
- 应用siRNA抑制β654地中海贫血过剩α珠蛋白和异常剪接β珠蛋白的表达
- β654地中海贫血是中国人最常见的β地贫之一,是由于β珠蛋白基因第二内含子654位C→T 点突变导致的剪接缺陷,产生一种异常剪接的mRNA,可致α／β珠蛋白链合成的不平衡,使红细胞寿命缩短,骨髓造血无效。由于β-珠蛋白合...
- 谢书阳黄淑帧张敬之曾凡一任兆瑞曾溢滔
- 关键词：Β珠蛋白地中海贫血SIRNA
- 慢病毒介导的人转铁蛋白转基因小鼠的研制及表观遗传修饰对其表达的影响
- 转铁蛋白(Transferrin,TF)是一种与铁结合的糖蛋白,在细胞生长、分化、增殖过程中起着十分重要的功能。因此, 利用转基因动物生物反应器生产转铁蛋白在生物制药上具有重要的意义和前景．但是外源基因整合率不高和外源基...
- 颜景斌潘树标郭歆冰张敬之龚秀丽曾溢滔
- 关键词：慢病毒
- 转导α血红蛋白稳定蛋白(AHSP)对β地中海贫血小鼠表型的影响
- 目的 α血红蛋白稳定蛋白(α-hemoglobin stabilizing protein,AHSP)是一种小的、高丰度的α珠蛋白(αHb)的重要伴侣蛋白,能够结合并稳定机体内游离的αHb,帮助血红蛋白的正常合成。β地中...
- 王宝斌方彧聃郭歆冰任兆瑞张敬之
- 关键词：Β地贫转基因小鼠
- 用慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠被引量：35
- 2006年
- 以慢病毒(lentivirus)载体为骨架,携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的假病毒,通过小鼠受精卵卵周隙注射,将其感染小鼠受精卵,经移植于假孕母鼠后获得转基因小鼠．应用PCR、荧光显微镜观察和流式细胞仪分析等技术,证明了GFP基因的整合率达到40％以上;实时定量PCR 分析结果表明转基因小鼠中GFP基因整合的拷贝数约为40;染色体荧光原位杂交分析结果显示 GFP基因在小鼠染色体上的整合是随机的,并通过交配可将外源基因遗传至子代,获得的多整合位点和不同表达水平的转基因小鼠具有明显的实际应用和研究价值．文中报道的慢病毒载体介导的转基因技术为高效制备和选育高表达转基因小鼠品系提供了一种有效的途径．
- 张敬之郭歆冰谢书阳朱怡文黄英王舒任兆瑞
- 关键词：慢病毒载体转基因小鼠GFP
- 表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化
- 2018年
- 目的：慢病毒载体（lentiviral vector,LVV）是一种有效的基因治疗导入系统。拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体,优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：比较三款不同的启动子预测软件的分析结果,分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因（β-globin）的LVV,并对其Ⅱ号内含子进行部分删减;用经优化的LVV转导β-地中海贫血（β-地贫）的小鼠诱导性多能性干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSC）后,用此iPSC制备嵌合体小鼠模型;经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果：经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大（2.3×10^（11）LPs/ml）,可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论：优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。
- 韩亚丽杨冠恒陈雁雯龚秀丽张敬之
- 关键词：Β-地中海贫血基因治疗
