孙兆明
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胶质瘤细胞增殖及凋亡调控紊乱研究的进展被引量：5
- 2005年
- 于士柱孙兆明
- 关键词：胶质瘤细胞凋亡调控原发性脑肿瘤中枢神经系统全身肿瘤浸润性生长
- 生长抑制因子1基因核定位序列绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建p33ING1b核定位序列(nuclearlocatingsequence,NLS)绿荧光蛋白融合表达载体,将其转染到人胚肺纤维母细胞系MRC5,建立稳定表达该融合蛋白的细胞模型。方法应用逆转录PCR获得p33ING1b的NLS序列,然后将NLS序列插入绿荧光蛋白融合表达载体pEGFP C1的多克隆位点,构建pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,再用此载体转染MRC5细胞系,观察活细胞绿荧光蛋白的亚细胞定位。结果成功构建了pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,由该载体表达的绿荧光蛋白NLS肽段融合蛋白产生的绿色荧光信号全部定位于胞核部位,而空载体转染的细胞表达的绿色荧光蛋白,绿色荧光信号定位于细胞浆中。结论在活细胞内,生理情况下P33ING1b完全定位于细胞核,并且在其亚细胞定位的转运过程中,NLS肽段起着决定性作用。
- 孙兆明于士柱张文治康春生周宏旭黄慧玲安同岭
- 关键词：质粒亚细胞定位
- GST-NLS(ING1)融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究被引量：8
- 2006年
- 目的构建P33ING1b核定位信号肽(NLS)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白(GST-NLS)原核表达载体及建立GST-NLS纯化技术。方法先用RT-PCR从ING1基因中扩增编码NLS的cDNA片段,将其插入克隆质粒pbluescript-SK,再以克隆质粒NLS片段为模板,PCR扩增NLScDNA片段,并加入限制性酶切位点和终止子,进而将其插入原核表达质粒pGEX-5X-3,构建GST-NLS原核表达载体pGEX-5X-3-NLS,最后用IPTG诱导其在大肠杆菌(BL21)中表达,用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-NLS。结果酶切鉴定和测序分析显示,NLScDNA片段被成功插入pbluescript-SK多克隆位点;NLScDNA片段在pGEX-5X-3-NLS中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确,NLScDNA序列位于表达载体的GST序列下游,插入片段全长183bp。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和亲和纯化,从负荷pGEX-5X-3-NLS质粒的BL21菌株中获得了31.57ku的GST-NLS。结论成功建立了重组GST-NLS的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法学,为进一步研究p33ING1b入核运载机制提供了重要技术手段。
- 孙兆明于士柱安同周宏旭
- 关键词：基因重组融合蛋白
- 生长抑制因子基因1及其与p53基因的相互关系
- 2005年
- 孙兆明于士柱
- 关键词：P53基因ING1肽段生物学功能
- ING1基因编码蛋白在染色质修饰中的作用
- 2005年
- 孙兆明于士柱
- 关键词：ING1基因
