卢一凡
- 作品数：71 被引量：196H指数：9
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 快速提取基因组DNA鉴定转基因鼠被引量：1
- 1998年
- 剪取鼠尾提取基因组DNA做点杂交、DNA印迹或做PCR,是鉴定转基因鼠常用的方法,而后者因操作简单快速更受青睐。传统的提取基因组DNA方法需要蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤。对于做PCR模板的DNA来说,不需要这些复杂的纯化程序,另外开发更为简洁的方法对于筛选大批量样品快速鉴定转基因鼠无疑具有重要意义。本文作者在试验中摸索出一种快速提取DNA做PCR模板的方法,在转基因鼠的鉴定中取得了较好的结果。现将结果报告如下,并将其与其它几种方法进行了比较。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：转基因鼠PCR模板提取DNA工程研究转基因动物
- 一种转基因动物生产多肽方法
- 1996年
- 化学合成多肽虽然可行,但却受到费用、纯度以及长链多肽的合成效率的影响。1994年,美国Sharma为首的科学家提出了一种新颖、经济的生产方法——转基因动物生产体系。 这一体系的基本思想是。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：转基因鼠动物生产转基因动物融合蛋白多肽工程研究
- 利用PCR方法从人染色体DNA中扩增G-CSF基因
- 1996年
- 利用PCR技术从染色体基因组DNA中扩增大DNA片段具有相当大的难度。本试验采用碱变性模板以及热启动等方法,成功地扩增出1.5kb的人基因组DNA,并讨论了影响扩增大DNA片段特异性和产量的因素。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：PCR扩增G-CSF特异性
- RT-PCR测定组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)在转基因鼠乳腺表达的研究
- 1999年
- 利用所构建的乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（Ｌａ－ｔＰＡ）载体．对５４０枚小鼠受精卵进行显微注射，经ＰＣＰ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，获得６只整合有人Ｌａ－ｔＰＡ转基因小鼠．为了精确研究转基因在小鼠体内的表达，采用ＲＴ－ＰＣＰ方法测定转基因鼠在泌乳期１～２０ｄＬａ－ｔＰＡ基因的转录，结果表明，在转基因鼠乳腺的Ｌａ－ｔＰＡｍＲＮＡ水平在１０～１５ｄ最高，在２０ｄ时降为最低．
- 卢一凡邓继先程萱黄培堂
- 关键词：转基因鼠RT-PCR乳腺表达
- 一种快速鉴定转基因鼠的方法
- 1998年
- 转基因动物的鉴定工作是决定其成败的关键一步,本文提出在PCR扩增初步筛选的基础上,对其产物进行限制性内切酶酶切以确定外源基因的整合方法,并结合DNA印迹分析进一步验证,可快速得到明确、可靠的结果。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：转基因鼠PCR酶切
- 快速提取基因组DNA鉴定转基因鼠被引量：2
- 1996年
- 快速提取基因组ＤＮＡ鉴定转基因鼠卢一凡，邓继光，肖成祖，马清钧，王冬平（军事医学科学院生物工程研究所，北京）采用ＰＣＲ方法快速鉴定转基因鼠是目前较为常用的方法。但剪取鼠尾提取ＤＮＡ做模板则较为费时、费力，它需要蛋白酶Ｋ消化过夜，然后酚／氯仿抽提等程序...
- 卢一凡邓继光肖成祖马清钧王冬平
- 关键词：转基因鼠PCR方法基因组DNA剪取
- 组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)转基因鼠的建立被引量：3
- 1999年
- 用羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５区５×１０３ｂ（１０３ｂ，旧称ｋｂ）为调控序列，构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（Ｌａ－ｔＰＡ）载体．对５４０枚小鼠受精卵进行显微注射，经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，获得６只整合有人Ｌａ－ｔＰＡ的转基因小鼠，整合率为３２％．
- 卢一凡邓继先程萱周江黄培堂
- 关键词：转基因鼠激活剂突变体
- 胚胎发育早期转基因的PCR检测研究被引量：1
- 1997年
- 转基因在受精卵中的整合时间对于转基因动物的建立十分重要。采用ＷＡＰ基因调控序列指导的人Ｇ－ＣＳＦ基因为构件，对小鼠受精卵进行显微注射。对培养至１细胞期、２细胞期和８细胞期的胚胎进行ＰＣＲ检测。结果表明，三个时期转基因的检出率分别为１００％、７７．７７％和４４．４４％。说明随着培养时间的增加，转基因逐渐丢失。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧王冬平
- 关键词：转基因PCR检测受精卵F基因
- 人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)转基因小鼠的建立
- 1999年
- 利用小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的调控序列指导人ＧＣＳＦ基因所构建的融合基因，注射小鼠受精卵，ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，获得了人ＧＣＳＦ转基因小鼠，整合率为２３７％。
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：G-CSF转基因小鼠组蛋白蛋白
- 提高PCR扩增大DNA片段的特异性和产量被引量：11
- 1996年
- 卢一凡邓继先肖成祖马清钧
- 关键词：聚合酶链反应DNA片断分子生物学
