刘俊丽
- 作品数：50 被引量：166H指数：7
- 供职机构：解放军第306医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 酵母双杂交筛选与甲状旁腺素1型受体相互作用的蛋白
- 2010年
- 目的:采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统,筛选与甲状旁腺素1型受体(PTH1R)相互作用的蛋白。方法:将全长PTH1R基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵,用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTH1R和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中,检测Mel1报告基因的表达,并进行相互作用的验证。结果:测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTH1R相互作用;根据对SNAPIN基因的功能分析,其可能与细胞内钙稳态的调控有关。结论:为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的机制提供了一定的线索。
- 刘俊丽冯凯路浩军秦亚亚张建中
- 关键词：酵母双杂交相互作用
- SARS冠状病毒核衣壳蛋白的研究进展被引量：3
- 2006年
- 核衣壳蛋白(N蛋白)是SARS冠状病毒(SARS-CoV)的结构蛋白,与病毒RNA结合形成核衣壳,是主要的抗原分子。最近的亚定位研究表明,它主要定位到细胞质,核仁内也有较少的分布。SARS-CoVN蛋白参与SARS-CoVRNA合成的调控以及核衣壳的形成,并能结合人亲环素(hCypA)解离病毒核心,激活AP-1信号转导途径,类泛素蛋白化干扰宿主细胞分裂,在缺乏生长因子的情况下诱导细胞凋亡。
- 刘俊丽曹诚马清钧
- 关键词：SARS冠状病毒核衣壳蛋白生物学功能
- 重组骨保护素(rhOPG)药物的研究现状及应用展望被引量：4
- 2008年
- 破骨细胞分化因子(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)与骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是调节破骨细胞分化和骨吸收功能的关键因子。RANKL是连接骨与免疫系统的破骨细胞生成因子,能刺激破骨细胞分化和发挥骨吸收功能;OPG作为RANKL的诱饵受体,能够阻止RANKL与RANK的结合,从而抑制破骨细胞的分化和激活。应用重组骨保护素OPG融合蛋白可以预防和治疗骨丢失类疾病,抑制牙周炎发病过程中牙槽骨吸收,并成为目前预防微重力相关的骨损失的最有希望的药物之一。笔者对重组人骨保护素(rhOPG)基因工程药物的研究现状进行了简要的综述。
- 刘俊丽张建中施生根
- 关键词：骨吸收
- 模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应。方法在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞能力,利用半定量RT-PCR测定破骨细胞中TRAP的表达。结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HSA处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05)。结论 SMG条件下,rhOPG-HSA能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化。
- 刘俊丽宋淑军司少艳冯凯刘军连赵刚张建中
- 关键词：模拟微重力
- mTERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达研究被引量：4
- 2011年
- [目的]构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6、结肠癌细胞CT26、黑色素瘤细胞B16和成纤维细胞NIH3T3中的表达情况。[方法]采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,转化Ad293细胞制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染上述四种细胞。采用免疫荧光染色法及流式细胞术检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。[结果]以感染复数为100病毒量感染上述细胞后,CD80和SEA的不同肿瘤细胞上表达率不同,而病毒感染的NIH3T3细胞不表达SEA和CD80。[结论]成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在不同肿瘤细胞中的靶向表达,但表达效率有所不同。为进一步采用同一腺病毒对不同肿瘤细胞的进行靶向基因治疗研究奠定了基础。
- 司少艳徐冰心宋淑军史亮赵刚刘俊丽刘志国张建中
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒
- 变频振动在模拟微重力环境下对成骨细胞增殖和分化的影响被引量：7
- 2014年
- 目的：观察变频振动在模拟微重力环境下对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法利用沿水平轴连续回转（30 r/min）细胞培养系统模拟微重力环境，应用电磁振动台将振动强度为0.5 g（g为加速度）在不同频率45 Hz、90 Hz、变频（5～90 Hz）振动应力作用于新生24 h大鼠颅盖骨成骨细胞，分别使用MTT比色法和碱性磷酸酶（ ALP）活性测定了解成骨细胞的增殖和分化情况。结果模拟微重力环境可以抑制新生24 h 大鼠颅盖骨成骨细胞的增殖和分化功能；90 Hz 和5～90 Hz变频振动促进模拟微重力环境成骨细胞的增殖功能（p＜0.01）；45 Hz（p＜0.05）和5～90 Hz（p＜0.01）变频振动刺激对模拟微重力环境成骨细胞的分化功能具有一定的保护作用。结论在模拟微重力环境下机械振动对成骨细胞的增殖和分化功能具有保护作用，这为机械振动刺激防治微重力环境下骨丢失提供了理论和实验依据。
- 陶飞飞吴继功马华松宋淑军刘俊丽邵水霖张乐乐陶有平高博李海侠
- 关键词：微重力成骨细胞增殖碱性磷酸酶
- hTERT启动子调控的SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达鉴定
- 2014年
- 目的:构建肿瘤靶向性葡萄球菌肠毒素A和CD80基因共表达重组腺病毒载体。方法:采用PCR技术从质粒pShuttle-AFP-CD80扩增人CD80全长cDNA片段,克隆至已构建载体pMD18-T-BIS,取代小鼠CD80 cDNA片段。重组质粒命名为pMD18-T-hBIS。经酶切,将CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子从已构建载体pGL3-CWVE-hTP,亚克隆至穿梭质粒pShuttle2,然后经酶切将片段hCD80-IRES-SEA从pMD18-T-hBIS质粒亚克隆至CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子下游,构建质粒pShuttle2-CE-hTP-hBIS。再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,以获得的重组子(命名为Ad-CE-hTP-BIS)转染Ad293细胞制备病毒并纯化。将病毒分别感染人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞,经免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜观察SEA和CD80在细胞膜的表达情况。结果:重组腺病毒能够使CD80和SEA在人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞膜上共表达,而在人牙龈成纤维细胞中不表达。结论:成功地构建了多肿瘤靶向性SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体。为应用SEA和CD80基因对人多种肿瘤进行靶向基因治疗奠定了基础。
- 司少艳刘俊丽王晓菲谭小青宋淑军
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A腺病毒
- 携带SEA和CD80双基因的重组腺病毒转染B16细胞体外诱导T淋巴细胞活化的研究
- 2015年
- 目的:观察恶性黑色素瘤B16细胞经重组腺病毒感染后,表达在B16细胞膜上的SEA和CD80体外能否诱导免疫学反应。方法:B16细胞分别经空载体腺病毒Ad(空)和重组腺病毒Ad-MMRE-m TERTB7、Ad-MMRE-m TERT-SEA、Ad-MMRE-m TERT-BIS感染后,和小鼠脾淋巴细胞共培养,然后,采用Brdu酶联免疫法(ELISA)检测淋巴细胞增殖;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群增殖;ELISA法检测细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的产生。结果:与感染空载体腺病毒Ad(空)和未感染B16细胞相比,经重组腺病毒感染的B16细胞体外能够显著诱导脾淋巴细胞的增殖,其中CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞增殖显著;细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2的产生显著升高;CTLs对肿瘤细胞的杀伤活性显著增强;表达双基因的B16细胞体外诱导免疫应答的能力高于单基因过表达B16细胞。结论:B16细胞经重组腺病毒感染后,表达在细胞膜上的SEA和CD80具有免疫学活性,本研究为今后进一步采用所构建重组腺病毒进行恶性黑色素瘤的免疫基因治疗提供了实验依据。
- 司少艳刘俊丽徐冰心化楠秦亚亚刘昌叶宋淑军
- 关键词：CD80恶性黑色素瘤免疫基因治疗
- 牛骨胶原肽对成骨细胞分化的影响被引量：2
- 2014年
- 目的研究3 mg/ml牛骨胶原肽(Bovine collagen peptides,BCP)对人成骨细胞(Human osteoblast,HOB),小鼠前成骨细胞系MC3T3分化的影响。方法 Western blot检测MC3T3细胞中BCP对Runx2表达的影响;分离培养HOB,利用对硝基苯磷酸比色法检测3 mg/ml BCP对碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)含量的影响;骨钙素(osteocalcin,OC)ELISA法测定BCP对OC含量的影响;茜素红矿化染色检测BCP对HOB矿化,然后用5%高氯酸进行脱色,用吸光度法检测BCP对人成骨细胞矿化程度。结果 Western blot检测表明,14 d后BCP处理的MC3T3细胞中Runx2蛋白表达水平(0.178±0.201)与CN组(0.146±0.582,P>0.05)比较,有增高趋势。ALP染色结果表明,BCP混合物处理组的ALP的染色面积(33859±8221)在第10d与CN组(19900±2796)相比,显著增加(P<0.05),表明BCP混合物能促进人成骨细胞早期的ALP表达量。BCP混合物处理组的OC吸光度值(0.137±0.014)在第14d高于CN组(0.086±0.023,P<0.05),表明BCP混合物能促进人成骨细胞晚期阶段的OC含量。茜素红矿化染色结果表明,3mg/ml BCP能显著促进HOB的矿化骨基质的形成。当使用5%的高氯酸脱色后,BCP处理组在490 nm处测吸光度值(0.579±0.093)显著高于CN组(0.193±0.021,P<0.01),表明BCP混合物能促进人成骨细胞的矿化。结论 BCP在成骨细胞分化和矿化骨基质的形成中发挥了积极作用。综合上述结果,本文为BCP混合物在骨关节炎和骨质疏松症潜在的预防和治疗提供了分子机理。
- 刘俊丽张兵宋淑军马铭司少艳王毅虎吴继功郭燕川
- 关键词：成骨细胞分化
- 季节对维生素D水平的影响被引量：19
- 2014年
- 目的了解健康年轻(22～37岁)男性和女性人群维生素D状况以及季节对维生素D水平的影响。方法选取在冬春季或夏秋季进行体检的健康年轻男性和女性,共416例,用酶联免疫的方法测定血中25-羟维生素D(25(OH)D)水平。结果所有的受检对象不论季节和性别25(OH)D水平均明显低于正常值,其中维生素D缺乏和不足(<75 nmol/L)的比率近90%,其中冬春季节多数为轻中度缺乏(达80%),而夏秋季节以轻度缺乏或不足为主(70%以上)。25(OH)D水平在冬春季节明显低于夏秋季节。此外,不论任何季节,女性组维生素D中重度缺乏的比率明显高于男性组,25(OH)D水平明显低于男性组。结论我国北方地区居住的人群不论季节和性别维生素D缺乏的发病率均很高,特别是年轻女性是维生素D缺乏的高危人群。应采用有效的措施防治维生素D的缺乏,减少维生素D缺乏对健康的影响。
- 宋淑军贾海英刘俊丽周金莲杨乐冰周玲王敏司少艳
- 关键词：维生素D缺乏25(OH)D
