兰海云
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：第四军医大学基础医学部中心实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Tet-on和Cre/loxP系统双重调控HCV NS5B真核表达载体的设计与构建
- 2010年
- 目的:构建可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体,为建立可严格调控HCVNS5B蛋白表达的转基因小鼠奠定基础。方法:以真核表达载体pBI-3为载体构建骨架,在其启动子下游依次插入luc报告基因、BGHpA和NS5B基因片段,并分别在luc报告基因上游和BGHpA尾下游引入一个loxP位点。结果:成功构建了可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体pBI-3/luc-BGHpA-NS5B。结论:pBI-3/luc-BGHpA-NS5B真核表达载体的成功构建为可严格调控HCV NS5B蛋白表达转基因小鼠的建立打下了良好的基础。
- 马玉赵亚孙梦宁兰海云吕欣杨敬雷迎峰姚敏尹文汪爱勤
- 关键词：HCVNS5B转基因小鼠TET-ON
- 调控型表达丙型肝炎病毒NS3／4A蛋白酶转基因小鼠的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础。
- 孙梦宁兰海云马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏康健招明高汪爱勤尹文
- 关键词：肝炎病毒属动物小鼠转基因
- Tet-on和Cre／loxP双调控肝靶向表达Cre重组酶转基因小鼠的制备和功能评价被引量：2
- 2011年
- 目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型奠定了良好的基础。
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- 关键词：肝炎病毒属
- 双重调控表达HCVNS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠的建立
- 目的 建立Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法 选择适龄并经鉴定的由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC...
- 兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰尹文
- 关键词：HCV
- 在体生物发光成像技术在生物医学中的应用
- 2011年
- 在体生物发光成像技术采用萤光素酶基因标记细胞及DNA,利用灵敏的光学检测仪器,实时直观地监测活体小动物体内感染性疾病的发生发展、肿瘤的生长及转移及引发的免疫反应、特定基因的表达等诸多生物过程。通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录,跟踪同一观察目标(标记细胞、病原微生物或基因)的移动及变化,与传统的动物实验方法相比,在体生物发光成像得到的数据具有更高的可信度。近年来因其灵敏度较高、不涉及放射性物质、所得结果直观等优势,该技术已普遍应用于生物医学、药物开发等研究领域。
- 兰海云汪爱勤尹文
- 关键词：萤光素酶
- 丙型肝炎病毒小鼠实验模型的研究进展被引量：1
- 2011年
- 丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝病的主要原因。大部分HCV感染者呈持续性感染,这与肝硬化和肝细胞癌紧密相关。近十年来,许多学者通过不懈的努力建立了各种行之有效的小鼠实验模型,基于这些模型的研究极大地丰富和加深了对HCV感染、致病、免疫等方面分子机理的认识,同时也极大地促进了新的抗病毒策略和特异药物筛选的发展。本文就目前最常见和未来有应用前景的两类小鼠实验模型作一综述。
- 兰海云汪爱勤尹文
- 关键词：动物肝炎丙型
- Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立被引量：2
- 2012年
- 目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。
- 兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏黄小军张建敏康健尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒
- HCV包膜糖蛋白基因真核表达载体的构建及其在HepG2中的瞬时表达
- 2012年
- 通过PCR法扩增出HCV包膜糖蛋白E1-E2的全长基因片段。将测序正确的片段克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建HCV包膜糖蛋白基因真核表达载体。再采用脂质体法转染肝癌细胞系hepG2,利用RT-PCR、Western blot等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定。结果表明所构建的含有HCV包膜糖蛋白E1-E2基因的真核表达载体在HepG2细胞中能瞬时表达。重组真核质粒的构建及表达为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定了基础。
- 张建敏姚敏吕欣黄小军杨敬雷迎峰兰海云汪爱勤尹文
- 关键词：HCV包膜糖蛋白真核表达
- HBV截短core基因融合preS1基因在BCG中的表达及其免疫应答被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨HBV相关抗原在卡介苗(BCG)中的有效表达及其刺激产生的体液和细胞免疫应答效果。方法:将带有HBV截短C基因和preS1基因片段的穿梭载体转化BCG菌株,筛选重组菌,SDS-PAGE和Western blot实验分析其抗原表达特性;分别以生理盐水、BCG、BCG-pDE22、BCG-pDE22-CS1皮下注射BALB/c小鼠,进行连续抗体测定和细胞毒性T细胞杀伤实验。结果:与对照组相比,重组BCG可表达Mr为24000的新生蛋白,与CS1融合蛋白大小相符,Westernblot实验分析显示出良好的抗原结合特性;带有HBVCS1抗原基因的重组BCG免疫组抗体滴度显著升高,特异性杀伤能力更强。结论:BCG可以作为HBV相关抗原的活载体,为研制HBV新型疫苗提供了实验依据。
- 尹文吕欣雷迎峰杨敬孙梦宁马玉兰海云汪爱勤
- 关键词：细胞毒性T细胞BCG
