任芳
- 作品数：81 被引量：202H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院果树研究所更多>>
- 发文基金：国家葡萄产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 4种葡萄类病毒检测及序列分析被引量：5
- 2011年
- 采用苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)保守区域设计的通用引物和4种葡萄类病毒特异引物,对采自辽宁、山东、新疆、甘肃和宁夏的48个葡萄样品进行RT-PCR检测及序列分析。结果表明,葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSVd1)、葡萄黄斑类病毒2(Grapevine yellow speckle viroid 2,GYSVd2)、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid,AGVd)和啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)检出率分别为41.7%、22.9%、75%和83.3%。通用引物能够检测出大部分样品中的GYSVd1、GYSVd2、AGVd。序列分析结果显示,中国辽宁兴城GYSVd1分离物(GU170805)属于TypeⅠ,与澳大利亚TypeⅠ分离物同源性为99%,与澳大利亚及日本TypeⅡ分离物同源性为97%,与中国GYSVd3分离物及美国、日本TypeⅢ分离物同源性仅为89%,而与GYSVd2分离物同源性均在80%以下。GYSVd2扩增产物(HM211853)与其余分离物的相似性在97%以上,与两个北京分离物DQ377131和DQ377129最为相似,相似性为99%。辽宁AGVd分离物(HM211854)与其他分离物同源性都在97%以上。山东HSVd分离物(HM357802)与北京、日本葡萄分离物的同源性均在98%以上,与德国葡萄分离物同源性为97%,与马铃薯、啤酒花、柑橘等其他作物上的分离物同源性为97%以下。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳
- 关键词：RT-PCR检测
- 我国主要苹果病毒及其研究进展被引量：17
- 2017年
- 苹果病毒病是危害苹果的一类重要病害,给产业的发展带来巨大的影响,树体感染病毒后很难根除。目前,防治苹果病毒病最根本的途径是培育无病毒繁殖材料,栽培无病毒苗木。本文对我国主要苹果病毒及其研究现状进行综述,为苹果病毒的脱除提供理论依据。
- 胡国君张尊平范旭东任芳李正男董雅凤
- 关键词：苹果病毒
- 苹果茎沟病毒侵染对嘎拉苹果果实品质的影响被引量：2
- 2023年
- 为了明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)侵染对苹果果实品质的影响,以单一接种ASGV的嘎拉苹果盆栽树为材料,测定果实单果重、纵横径、硬度、维生素C、可溶性固形物、糖酸组分、花色苷组分以及香气物质含量等。结果表明,与健康植株相比,感染ASGV植株的果实纵横径无明显变化,单果重、果实硬度、可溶性固形物含量和可溶性糖含量显著降低,有机酸含量增加,香气组分占比发生改变,果皮中4种花色苷的含量均显著降低。
- 贾晓君胡国君张尊平范旭东任芳董雅凤
- 关键词：苹果苹果茎沟病毒侵染果实品质
- 葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：12
- 2016年
- 根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。该方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998,灵敏性分别是常规RT-PCR和巢式RT-PCR的100倍和10倍。重复性试验表明组内和组间变异系数均小于2.59%,显示该方法具有较好的检测稳定性。内参基因的稳定性测试结果表明葡萄EF1和GAPDH基因具有较好的试验稳定性。利用建立的荧光定量方法测定12个葡萄样品中GFLV含量,并检测58个葡萄样品,结果表明不同葡萄样品中GFLV含量差异较大,最高含量是最低含量的81 245.5倍,与ELISA和巢式RT-PCR相比,实时荧光定量方法能检测出更多的GFLV分离物。
- 周俊范旭东董雅凤张尊平胡国君任芳李正男
- 关键词：葡萄葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR
- 基于RT-PCR检测对6个香味葡萄品种感染病毒状况的分析被引量：5
- 2021年
- 为明确我国6个香味葡萄品种感染病毒的状况,2018—2019年采用RT-PCR方法,对来源于13个省(市、自治区)的212个样品进行了14种葡萄病毒的检测。结果显示:‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’‘巨峰’‘夏黑’‘水晶葡萄’‘着色香’的带毒株率分别为93.22%、67.74%、82.98%、63.33%、27.27%、43.48%;以上各品种检出的病毒种类数分别为13、10、10、8、3、3种,其中分布较广的为沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)、葡萄斑点病毒(GFkV)和葡萄卷叶相关病毒3(GLRaV-3)。
- 李晨范旭东张尊平胡国君任芳张宝东董雅凤
- 关键词：葡萄病毒病毒检测
- 葡萄A病毒外壳蛋白基因克隆及分子变异分析被引量：8
- 2012年
- 为获得葡萄A病毒（Grapevinevirus A，GVA）外壳蛋白（CP）基因，并为开展GVA-CP介导的抗病毒转基因研究提供基础，本研究从葡萄休眠枝条中扩增获得12个GVA分离物的CP基因序列，全长597nt，编码198个氨基酸。所得分离物间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83．9％～99．8％和92．4％～99．5％，与GenBank中12个GVACP序列比较，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为71．0％～93．1％和81．8％～98．0％。系统进化分析表明，本研究12个分离物CP序列与已报道的GVAI组亲缘关系最近。种群变异分析表明，GVA种群具有多种变异体类型，并且多个样品存在不同变异体类型的复合侵染。但绝大多数变异体克隆聚集在GVAⅠ组分支，有60％的克隆序列间同源性较高，并且聚集在同一个次级分支ⅠAa，表明其为该GVA种群的优势序列。克隆的GVACP基因以及优势序列群体的分析为葡萄抗病毒转基因研究奠定了基础。
- 任芳范旭东董雅凤张尊平王教敏
- 葡萄浆果内坏死病毒的LAMP可视化检测引物、试剂盒及其应用
- 本发明公开了葡萄浆果内坏死病毒的LAMP可视化检测引物、试剂盒及其应用。所述试剂盒包括由引物1‑引物6组成的成套引物组合；所述引物1‑引物6为序列表中序列1‑6所示的单链DNA分子。通过实验证明：本发明的成套引物组合特异...
- 范旭东董雅凤张尊平任芳胡国君
- 文献传递
- 酵母pac1基因介导对葡萄B病毒的抗性被引量：1
- 2015年
- 为明确广谱性抗病毒基因—酵母pac1基因对葡萄B病毒（Grapevine virus B,GVB）的抗性效果,通过农杆菌介导的遗传转化,将pac1基因导入西方烟37B,对转基因植株进行PCR鉴定及Southern blot分析,通过病毒摩擦接种观察症状以及实时荧光定量RT-PCR检测植株体内病毒含量,并对转基因植株抗病性进行初步鉴定。结果表明,目的基因pac1成功导入并整合至西方烟37B基因组,共获得10个转基因株系。不同株系的T1代烟草中阳性植株比例为16.7%~72.7%,表明目的基因可成功遗传到子代。接种病毒后转基因植株普遍延迟发病,但后期症状与非转基因对照相似,其中仅1个转基因株系B6具有不表现典型症状等抗性反应。接种植株病毒含量检测中,所有转基因植株均检测到病毒存在,但表现为抗病的B6株系中病毒含量显著低于非转基因对照,表明该转基因植株虽不能完全抵抗GVB侵染,但对GVB具有耐病性。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊
- 关键词：抗性
- 沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2022年
- 根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。
- 胡国君张尊平范旭东任芳翟秀丽时晓燕董雅凤
- 关键词：葡萄巢式RT-PCR
- 葡萄病毒A实时荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用被引量：10
- 2018年
- 根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)SYBRGreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好线性关系,扩增效率为99.2%,决定系数为0.999,可特异性检测GVA,灵敏度高(达常规RT-PCR的100倍),重复性好。对不同季节、不同品种以及不同部位葡萄样品(嫩叶、嫩叶柄、老叶、老叶柄、卷须和休眠枝条)中GVA的检出率普遍高于常规RT-PCR。不同季节间比较,对秋、冬季样品检测效果最好,除嫩叶外其余部位检出率均达100%,春夏季检出率为10%～100%。不同部位间比较,老叶柄和休眠枝条检测效果最好,检出率均达100%,其次为老叶(80%～100%),其余部位样品检出率为10%～100%。在大量田间样品检测中,休眠枝条样品检测结果与常规RT-PCR一致,而秋季老叶柄样品检出率明显高于常规RT-PCR。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君
- 关键词：葡萄实时荧光定量RT-PCR
