于在江
- 作品数：22 被引量：91H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在酵母菌中的表达被引量：3
- 2010年
- 在成功克隆流感病毒H1N1全长HA（Hemagglulinin，HA）、NA（Neuramidinase，NA）基因并测序的基础上，将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上，构建了重组表达质粒pMETA/HA（52～1557bp）、pMETA／NA（121～1263bp），电转化真核酵母菌pMAD16，甲醇诱导表达，利用Ni^2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。SDS-PAGE显示重组蛋白在酵母菌中可以高效表达，蛋白纯度占总蛋白的95％以上，ELISA和Western blotting实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H1N1HA、NA基因序列，为流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了参考。
- 张烨于在江辛丽陈永坤唐启慧陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母表达
- 新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立被引量：2
- 2011年
- 建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。
- 朱云刘丽琦周剑芳朱闻斐秦堃于在江王大燕赵翔李希妍蓝雨舒跃龙
- 关键词：全基因组分析
- 流感病毒样颗粒疫苗研究进展被引量：13
- 2011年
- 流行性感冒（流感）是由正粘病毒科的负链RNA流感病毒引起的一种上呼吸道急性传染病,它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高,严重影响着人类的健康和全球经济的发展,对老年人和婴幼儿危害尤其大。在人类历史上曾经历过多次流感大流行，死亡惨重，
- 张立霞于在江周剑芳舒跃龙
- 关键词：病毒样颗粒人类历史急性传染病正粘病毒科流行性感冒上呼吸道
- 妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺发育的影响
- 目的：研究妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-B、-C表达的影响。方法：用非致死量甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感...
- 张钰周剑芳于在江韦红舒跃龙
- 关键词：流感病毒小鼠妊娠肺发育肺表面活性蛋白
- 孕期流感病毒感染对后代小鼠肺表面活性蛋白表达的影响
- 2013年
- 目的研究孕期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-A、-D表达的影响,探讨影响机制。方法用非致死量甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d Balb/c孕鼠,在孕19 d随机选取孕鼠剖宫取其胎盘组织,并收集羊水标本;取胎鼠肺组织。待余下孕鼠自然分娩后,取P0,P4,P7,P14 d小鼠肺组织。观察后代小鼠肺组织病理学改变;检测其肺组织SP-A、-D的表达水平。检测胎盘、胎鼠肺组织流感病毒基因;检测羊水白介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果与对照组相比,感染组后代小鼠肺泡发育程度较低,肺泡隔厚度明显增加。SP-A的表达量从P4 d开始显著降低;SP-D的表达量从P7 d开始显著升高。未检测到胎盘或胎鼠肺组织流感病毒基因;羊水中IL-6,TNF-α水平明显升高。结论孕期流感病毒感染可能通过造成宫炎症环境间接改变后代肺组织形态和SP-A,-D的表达模式。
- 张钰韦红周剑芳于在江舒跃龙
- 关键词：流感病毒肺表面活性蛋白
- 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。
- 邹淑梅于在江张烨辛丽陈永坤陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶
- 杆状病毒表面展示甲型流感病毒核蛋白的免疫原性及保护效果的初步评价被引量：6
- 2013年
- 流感病毒的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究利用杆状病毒表面展示技术,将杆状病毒GP64蛋白的信号肽(Signal peptide,SP)和胞质尾(Cytoplasmic tail,CT)与甲型流感病毒(A/Hubei/1/2010(H5H1))的NP蛋白融合表达,从而将NP蛋白展示在杆状病毒的表面,并对该病毒NP蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。Westernblot实验证明NP蛋白可以在Sf9细胞中有效表达。免疫电镜试验显示NP蛋白已成功展示在杆状病毒表面。通过小鼠感染实验,ELISA结果证明NP疫苗可以诱导产生高水平的IgG血清抗体。ELISPOT结果表明NP蛋白的2个细胞免疫抗原表位(NP57-66IQNSITIERM和NP441-450RTEIIKMMES)可以诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,利用NP57-66、NP441-450和NP蛋白均可刺激CD4+和CD8+T细胞产生IFN-γ,但主要以CD8+诱导为主,表明重组病毒可以产生有效的细胞免疫反应。利用小鼠鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)进行攻毒实验,结果表明该重组病毒感染小鼠后可以降低小鼠肺病毒载量,减轻肺组织损伤,减少体重下降,并可以保护50%小鼠存活。
- 张立霞周剑芳于在江舒跃龙
- 关键词：NP蛋白H5N1禽流感病毒
- 妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺发育的影响
- 2013年
- 目的:研究妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-B、-C表达的影响。方法:用非致死量流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d BALB/c孕鼠,待其自然生产,取后代小鼠。称取各时点小鼠体重及肺组织重量;观察小鼠肺组织病理学改变;Western blotting法检测肺组织SP-B、-C表达的变化。结果:与对照组相比,感染组小鼠体重明显减轻,肺组织重量轻度增加,肺泡发育程度较低,肺泡隔厚度明显增加,辐射状肺泡计数(radial alveolar counting,RAC)明显减少,肺泡Ⅱ型上皮细胞数量无明显改变;SP-B的表达量在出生当天(P0)降低,在出生后4、7和14 d均明显升高,SP-C的表达在P0升高,在其它各检测时点显著降低。结论:妊娠晚期流感病毒感染可影响后代肺发育,改变后代肺组织SP-B、-C的表达模式,可能对后代肺功能产生深远影响。
- 张钰韦红周剑芳于在江舒跃龙
- 关键词：小鼠肺发育表面活性蛋白
- 切胶纯化表达蛋白包涵体的可行性分析被引量：51
- 2007年
- 目的:高效率地纯化以包涵体形式表达的蛋白。方法:将SDS-PAGE电泳后的目的蛋白用4mol/L的乙酸钠显现出来,切割下来的目的蛋白可直接用于免疫,将切割下来的目的蛋白装在透析袋中,在电场中将游离的目的蛋白洗脱下来可用于ELISA检测。结果:用该法得到的蛋白经ELISA和Western blot检测均能保持其原有的抗原性,并用该法纯化的蛋白成功制备了相应的多抗和单抗。结论:证实了回收的蛋白仍能保留原有的抗原性,与传统的方法比较,方法简单且比较经济实用特别是包涵体,为切胶纯化蛋白提供了一个新的方法。
- 于在江马学恩周建华
- 关键词：SDS-PAGE包涵体蛋白纯化
- 流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
- 2010年
- 目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1 549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础。
- 李梓张烨唐启慧陈禹宝于在江辛丽陈永坤陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母菌
