将重组质粒pET28 a-VP2转化禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40,探讨该转化菌表达的VP2是否具有免疫原性,以及重组表达质粒在转化菌内的稳定性。该转化菌在体外经IPTG或乳糖诱导,表达产物经AGP检测,VP2滴度可达1/4;经间接ELISA检测,VP2滴度可达1/512;经SDS-PAGE分析,出现VP2蛋白条带。结果表明,诱导表达的提取液中有一定量可溶性VP2。将pET28 a-VP2转化的禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40经诱导后,接种爱维茵肉仔鸡,21日龄及35日龄时,分别肌肉注射菌液0.1、0.2 m l/只(3×108个/m l活菌)。49日龄时,感染IBDV标准强毒株BC6/85。IBDVVP2血清抗体检测结果,不接种组(B)、0.1 m l接种组(C)、0.2 m l接种组(D)及空质粒转化菌接种组(E)的AGP抗体检测阳性率分别为0、65%、70%、0;间接ELISA抗体检测阳性率分别为0、80%、85%、0;IBDV强毒感染的免疫保护率分别为5%、75%、75%、5%。经t检验,B组与C组、B组与D组、E组与C组、E组与D组,P<0.05,差异均显著,但B组与E组、C组与D组,P>0.05,差异均不显著。免疫试验结果表明,诱导表达产物VP2可有效地刺激鸡体产生体液免疫应答,刺激鸡体建立的免疫力可以抵抗一定剂量强毒的攻击。在质粒稳定性测定中,第9代次及以后的3个代次,20个菌落的VP2目的基因PCR检测结果均为阴性,表明该质粒在禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40内是不稳定的。
