陈超
- 作品数：16 被引量：245H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金更多>>
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- 猪肺炎支原体p97 C末端基因重组腺病毒的构建及其免疫效果被引量：7
- 2009年
- 【目的】构建携猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)黏附因子p97C末端基因的重组腺病毒并研究其诱导小鼠产生的免疫反应,为研制新型Mhp疫苗奠定基础。【方法】从Mhp基因组中扩增p97C末端基因,并将其克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,该重组穿梭质粒经PmeI线性化后电转化到BJ5183-AD-1细胞中进行同源重组获得重组腺病毒DNA,纯化后的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞以获得重组腺病毒。对该重组腺病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定,用氯化铯密度梯度离心纯化试剂盒对该重组腺病毒进行纯化并确定其滴度。重组病毒经肌注、滴鼻两种途径免疫小鼠并从体液免疫、粘膜免疫和细胞免疫3个方面对其免疫结果进行分析。【结果】PacⅠ酶切证实同源重组成功,RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定证明了该重组腺病毒成功转录并表达了p97C末端蛋白,将该重组病毒进行纯化后滴度可达到5×1011TCID50/mL,重组病毒可诱导小鼠产生血清、肺匀浆液特异性IgG,通过滴鼻免疫方式还可诱导肺匀浆液SIgA的产生,但不能诱导特异的淋巴细胞增值。【结论】成功构建了表达p97末端基因的重组腺病毒,该病毒可诱发小鼠产生特异的的体液免疫和粘膜免疫,但不产生细胞免疫应答。
- 陈超李媛郭丹曹培丽张美晶姜海芳乔祖建王亮辛九庆
- 关键词：猪肺炎支原体猪支原体肺炎重组腺病毒免疫效果
- 国内首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到牛支原体被引量：207
- 2008年
- 牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化。通过生化实验、特异性PCR鉴定和序列比较证明为牛支原体。其16SrRNA核酸序列与牛支原体国际标准株PG45同源性为99.3%。以该培养物作为包被抗原的ELISA检测方法对13份发病犊牛血清进行了检测,其中11份血清抗体OD值为阴性血清对照值的2倍以上。该结果首次证实,国内部分地区存在牛支原体的流行。
- 辛九庆李媛郭丹宋念华胡守萍陈超裴洁曹培丽
- 关键词：牛支原体
- 猪肺炎支原体p52基因重组腺病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了猪肺炎支原体p52基因重组腺病毒及其构建方法和应用。本发明将p52基因克隆到穿梭载体pShuttle－CMV中经线性化后，电转化入BJ5183菌内与其含有的骨架载体pAdEasy－1同源重组，再与脂质体混合转...
- 辛九庆李媛曹培丽陈超郭丹王亮乔祖建
- 文献传递
- 猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2008年
- 以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别。以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠。筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11。Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应。抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF11分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链。相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位。
- 乔祖健王亮李媛陈超辛九庆李继昌
- 关键词：猪肺炎霉形体热休克蛋白70单克隆抗体
- 猪肺炎支原体P97 C末端基因重组腺病毒的构建与鉴定
- 从猪肺炎支原体基因组中扩增其黏附因子P97C末端基因,然后通过KpnⅠ和SalⅠ酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。将鉴定正确的的重组穿梭质粒经PemⅠ线性化后电转化入内含腺病毒骨架...
- 陈超辛九庆李媛王亮郭丹曹培丽乔祖建
- 关键词：猪肺炎支原体猪喘气病重组腺病毒
- 文献传递
- 牛支原体套式PCR检测方法的建立被引量：26
- 2009年
- 为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。
- 李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆
- 关键词：牛支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR
- 表达猪肺炎支原体P102蛋白的重组腺病毒及其应用
- 本发明公开了表达猪肺炎支原体P102蛋白的重组腺病毒及其应用。本发明首先将猪肺炎支原体P102蛋白的基因进行突变，将突变后的全基因(SEQ ID NO：1)克隆到穿梭载体pShuttle-CMV上，得到重组穿梭载体；经线...
- 辛九庆李媛郭丹郭军陈超曹培丽张美晶董惠姜海芳
- 文献传递
- 猪肺炎支原体P97 C末端蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析被引量：4
- 2010年
- 以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最小抗原决定区域,并通过生长抑制试验及抗黏附特性试验对抗原表位进行了分析。结果显示,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株A3C9和B4D5,并成功鉴定出P97C末端蛋白的2个独立线性表位F905PMAFSY911和G991TPNQGKKAE1000。2株单抗对猪肺炎支原体的生长均有一定的抑制作用,但对其黏附特性没有显著抑制作用。
- 张美晶王亮李媛董慧姜海芳陈超曹培丽郭丹辛九庆
- 关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体抗原表位
- 猪肺炎支原体P52蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：4
- 2009年
- 为表达猪肺炎支原体(Mhp)P52蛋白及制备其血清,本实验利用PCR从MhpJ株扩增P52基因,克隆到表达载体pET-30a中,获得重组质粒pET-P52,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE和westernblot检测重组蛋白表达及其免疫学活性。以该重组蛋白为抗原免疫兔制备抗血清,采用间接ELISA检测抗血清效价,并利用抗血清通过间接免疫荧光检测P52基因在AD-293细胞中的表达情况。结果表明,PCR扩增目的基因为1202bp,SDS-PAGE检测重组蛋白大小约52ku,其表达量占菌体总蛋白的28%。Westernblot检测表明,目的蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫活性。间接免疫荧光检测到P52基因在AD-293细胞中表达。本研究为构建P52蛋白腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 曹培丽李媛陈超郭丹辛九庆李继昌
- 关键词：猪肺炎支原体原核表达抗血清
- 编码猪肺炎支原体P102蛋白的DNA及其制备方法和用途
- 本发明公开了编码猪肺炎支原体P102蛋白的DNA及其制备方法和用途。本发明利用体外诱变技术将猪肺炎支原体表面蛋白P102基因的阅读框架C端500个核苷酸的其中1个UGA诱变为UGG，得到SEQ ID NO：1所示的序列；...
- 辛九庆李媛陈超郭丹郭军曹培丽张美晶董慧姜海芳赵巧香刘洋
- 文献传递
