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利用基因芯片分析鸡法氏囊差异表达基因被引量：2: 2014年; 为了解鸡法氏囊发育过程中转录组的变化,应用鸡基因表达谱芯片对从18胚龄、10和30日龄SPF鸡法氏囊组织抽提和纯化的mRNA进行芯片杂交,对差异表达基因进行了GO功能分类和KEGG信号通路分析,并利用荧光定量PCR验证了部分差异表达基因。结果表明,法氏囊总RNA的基因检出率在79%~85%,30日龄雏鸡与18胚龄鸡胚相比、10日龄雏鸡与18胚龄鸡胚相比和30与10日龄雏鸡相比分别筛选到5 043、2 368和1 874条差异表达基因,主要涉及到结合功能、细胞组成、代谢过程、细胞加工、生物学调节等功能,一些差异表达基因参与细胞因子及其受体相互作用通路、Toll样受体(TLR)信号通路、核苷酸寡聚化域样受体(NLR)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路等。结果表明在法氏囊发育过程中,基因表达谱发生了很大变化,表明法氏囊发育是多基因参与的复杂的生物学过程,但这些差异表达基因在法氏囊的发育过程中的作用及其对法氏囊的功能的影响还有待于深入研究。; 杭柏林桑建君钱琨叶建强邵红霞金文杰梅梅缪佶秦爱建; 关键词：基因表达谱法氏囊差异表达基因

商品蛋鸡J亚群禽白血病病毒分离鉴定及序列分析被引量：10: 2010年; 为了解商品蛋鸡群中J亚群禽白血病病毒(ALV-J)流行情况和病毒特性,本实验对感染血管瘤与髓细胞瘤混合型ALV-J的商品海兰褐蛋鸡进行了病毒分离,对2个分离株的致瘤关键基因序列LTR与gp85进行了测定,并与参考毒株进行比对,分析结果表明这两株病毒的LTR及gp85均存在显著的变异。在这两个基因的遗传进化树中均形成一个单独的分支:LTR的U3序列与参考毒株的同源性低至89.7%～92.4%,而参考毒株之间的同源性高达90.7%～99.6%,这两株病毒的U3区变异产生了一个与肿瘤形成与转移间接相关的调控元件TCF11(Transcription Factor11),但Y box、TATA box、CArG box都很保守;两株病毒的gp85氨基酸序列均在第179位缺失一个Lys,两个毒株的gp85蛋白序列与肉鸡分离毒株之间的同源性很低,为86%～89%,而与参考蛋鸡分离毒同源性相对较近,为89.2%。本研究证实从多种肿瘤类型并发的蛋鸡自然发病病例中分离到ALV-J病毒,其关键序列发生了显著的变异。; 吴晓平钱琨秦爱建王平平沈海玉邵红霞金文杰; 关键词：商品蛋鸡 J亚群白血病病毒

马立克氏病毒感染不同细胞中Meq与MHC-Ⅰ基因表达初探: 为初步探索MDV MCQ与免疫相关基因MHC—Ⅰ之间的相关性.本研究应用荧光定量PCR技术对MHC—Ⅰ和MeQ在MDV感染不同细胞中基因表达水平进行检测。结果显示，在BUdR刺激下，MDV感染的淋巴细胞系MDCC—MSB...; 郁川刘秋胡序明徐文财钱琨金文杰梅梅邵红霞秦爱建; 关键词：马立克氏病荧光定量检测基因表达

胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立被引量：3: 2010年; 牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研究结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91.3%。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。; 钱琨尹天燕赵士学黄大卢金文杰秦爱建; 关键词：牛结核病单克隆抗体胶体金免疫层析

鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制被引量：1: 2020年; 本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102400与1:12800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3.本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础.; 史静柯王鹏霍臣智宋昊杨海蓉朱韩钰许文琳袁慧莎叶建强叶建强秦爱建钱琨; 关键词：鸡传染性贫血病毒 VP3蛋白原核表达单克隆抗体

禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用被引量：6: 2012年; 禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。; 梁有志尹丽萍杭柏林杭柏林钱琨金文杰邵红霞; 关键词：禽白血病病毒抗原试纸条

鸡星状病毒研究进展被引量：6: 2018年; 鸡星状病毒属于星状病毒科禽星状病毒属,目前尚未定种。鸡临床感染星状病毒后引发腹泻性肠炎、肾炎等症状,导致发育缓慢和生产力低下,对家禽养殖业造成了一定的损失。文章就近年来国内外对鸡星状病毒的研究进展进行综述,为鸡星状病毒的后期研究以及防控提供依据。; 武宗仪孔正茹秦爱建秦爱建; 关键词：病原学

鸡β2-微球蛋白的基因克隆与原核表达: 2014年; 本研究通过RT-PCR从正常鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增chβ2m基因全长片段,然后将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG对其进行诱导表达,利用HiTrap亲和柱对表达产物进行纯化。结果显示,采用RT-PCR扩增出chβ2m基因全长约360 bp,编码120个氨基酸,与基因库公布的相一致,同源性为100%;经0.8 mM IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析发现chβ2m融合蛋白主要以可溶性形式存在于细菌裂解上清;利用His标签纯化该蛋白,SDS-PAGE分析仅见约34 kDa大小的chβ2m融合蛋白条带;Western-blot分析表明,纯化后的chβ2m融合蛋白与特异单克隆抗体反应呈现特异性的条带。以上结果证实,本研究成功表达并获得了纯化的可溶性chβ2m融合蛋白,为进一步对chβ2m结构及其功能研究奠定基础。; 徐文财刘秋李旦胡序明吴庚华钱琨邵红霞金文杰秦爱建; 关键词：Β2-微球蛋白基因克隆原核表达

致蛋鸡血管瘤病例的病原分离与鉴定: 群禽白血病病毒诱发的肿瘤、患鸡胴体废弃、产蛋性能下降和其它未知的对鸡群生产性能的影响，给养禽业带来巨大经济损失和严重威胁。为了对江苏某蛋鸡群疑似禽白血病的疫情进行确诊，在组织剖检观察的基础上，经ELISA抗原抗体检测，聚...; 沈海玉秦爱建钱琨金文杰吴晓平仇钰; 文献传递

氯化锂抑制细胞培养中J亚群禽白血病病毒的复制: 据报道氯化锂(LiCl)能抑制多种DNA和RNA病毒的复制,但是LiCl对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染是否具有相似的抑制作用尚未见报道.本研究通过使用实时荧光定量PCR,Western blot,IFA和p27E...; 钱琨程晓薇张丹阳秦爱建; 关键词：氯化锂 J亚群禽白血病病毒病毒复制抗病毒活性

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钱琨

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