邓小昭 作品数:136 被引量:448 H指数:10 供职机构: 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
吸毒人群中丙型肝炎患者F蛋白抗体检测 被引量:4 2010年 目的了解丙型肝炎病毒(HCV)F抗体在南京市吸毒人群HCV感染者中的分布特点,为丙型肝炎防治及制定慢性化预防策略提供依据。方法利用pEGX-4T-2/HCV-F融合载体表达蛋白HCV-F/GST作为抗原,包被酶联反应板,ELISA间接法检测362例HCV感染者及50例正常人血清HCV-F抗体,结合其人口学特征和疾病特征,统计分析HCV-F抗体的分布情况及与HCV感染的关系。结果 362例感染HCV的吸毒者F抗体阳性率为31.5%。通过比较发现F抗体阳性率在性别、吸毒时间、吸毒方式等因素中分布无统计学差异,而F抗体阳性率与年龄、联合感染可能具有一定关联。结论南京市吸毒人群HCV感染者中存在F抗体,其可能与疾病病程相关。 朱萍 王昊鹏 杨静静 邓小昭 郑锦锋 张云关键词:肝炎病毒属 F蛋白 吸毒人群 一种新型家蚕核多角体病毒Bac to Bac系统的构建 被引量:13 2000年 用家蚕核型多角体病毒的全基因组DNA与AcBacmidDNA共转染家蚕BmN细胞,构建转座一穿梭载体BmBacmid。另一供体质粒以转座方式将乙肝病毒e抗原基因HBeAg整合到BmBacmid的attTn7位点上成为重组rBmHBe。结果表明BmBacmid既能在大肠杆菌中以质粒的形式复制,又能在家蚕BmN细胞和草地夜蛾Sf9细胞中复制,形成感染性病毒粒子。Southernblotting证实重组病毒的构建是正确的。BmN细胞能正确识别与切割HBeAg信号肽序列,SDSPAGE表明HBeAg基因在家蚕细胞中高效表达,ELISA测定培养上清中HBeAg效价达1∶32000,细胞内HBeAg效价为1∶2000,培养液及细胞内的HBcAg含量极低(〈1∶160)。 邓小昭 朱应 刁振宇 齐义鹏 周宗安关键词:BMNPV BAC HBCAG 血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及丙型肝炎的关系 被引量:2 2012年 目的探讨血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及不同临床分型的丙型肝炎的关系。方法收集256例抗HCV抗体阳性患者血清标本,用ELISA法检测血清抗F蛋白抗体,提取HCV RNA并进行逆转录反应,根据5'非编码区(5'NCR)1,2,3,1b型碱基序列,设计保守区通用引物及型特异性引物。用巢式PCR对HCV进行基因分型。结果抗F蛋白抗体阳性率为61.3%(157/256)。男性与女性抗F蛋白抗体率分别为64.3%(110/171)与55.3%(47/85),差异无统计学意义(χ2=1.953,P>0.05)。与急性丙型肝炎抗F蛋白抗体阳性率的36.6%(15/41)相比,慢性丙型肝炎为63.6%(112/176)、丙型肝炎合并肝硬化为76.9%(30/39),差异有统计学意义(χ2分别为10.02和13.21,P均<0.01)。HCV RNA阳性患者抗F蛋白抗体阳性率为62.5%(90/144)与阴性患者的59.8%(67/112)相比无显著性差异(χ2=0.187,P>0.05);基因分型结果表明,1b型抗F蛋白抗体阳性率为62.8%(81/129),2型为60.0%(6/10),1b/2型为60.0%(3/5),各型抗F蛋白抗体阳性率无明显差异(χ2分别为0.109和0.105,P均>0.05)。结论血清抗F蛋白抗体与HCV临床分型有关,与性别、HCV RNA以及HCV基因型分布无关。 丁伟良 刘奇 黄莺 葛志军 王洁 邓小昭 喻荣彬 张云关键词:丙型肝炎 基因分型 从狗肺中分离到流行性出血热病毒 被引量:2 1989年 1984—1985年,从安徽省EHF疫区收集78只狗肺,用IFAT检测,5只EHF抗原阳性,阳性率为6.4%,并从EHF抗原阳性的狗肺中分离到两株EHFV,从而首次证明狗可自然感染EHFV。狗有捕食鼠类的习性,与人接触密切,其传播EHF的作用需要进一步研究。 张云 沈建中 张炳根 邓小昭 赵学忠 吴光华关键词:出血热病毒 间接免疫荧光 重组病毒/家蚕细胞系统稳定高效表达HBeAg基因的研究 被引量:3 1998年 以 HBe Ag(乙型肝炎病毒 e抗原 )基因置换家蚕核多角体病毒 (Bm NPV)中多角体蛋白基因编码序列 ,获得高效表达 HBe Ag的重组病毒 r Bm HBe。在重组病毒复制过程中 ,家蚕 Bm N细胞的病理变化与野生型病毒的感染相同 ,但不能形成多角体。重组病毒的复制为典型的一步生长曲线 ,感染后 2 4 h~ 36h,病毒效价递增并达到最高。感染后 2 4 h,培养液中可检测到表达产物HBe Ag,72 h达到高峰。病毒感染复数的改变对 HBe Ag表达的影响是时限性的。低感染复数时HBe Ag产量较高。细胞接种密度及病毒接种时间对 HBe Ag的表达有较大的影响 ,最适的细胞接种密度为 3.2~ 6.4× 1 0 5 细胞 /瓶 ,在细胞指数生长前期 (48h~ 60 h)接种重组病毒 ,对于获得较高的重组病毒复制效价和 HBe Ag的产量都是有利的。在采用最佳技术参数组合的条件下 ,ELISA法检测细胞培养液中 HBe Ag滴度可达 1∶ 32 0 0 0。以上研究结果有助于在生产中高效稳定地制备HBe Ag,以满足供应配套乙肝 HBe Ag/抗 邓小昭 何亮 刁振宇 张林元 李光富关键词:核多角体病毒 E抗原 HBV 丙型肝炎病毒5′utr分型和C区基因分型结果的比较 被引量:1 2006年 目的比较丙型肝炎病毒(hepatitis C vims,HCV)不同基因分型方法的一致性。方法采用5′非编码区(NCR)型特异性引物分型法和核心区型特异性引物分型法分别对95例和其中的31例HCV RNA阳性患者的血清样本进行基因分型,分析不同分型方法的灵敏度和稳定性异同。结果两种分型方法的一致性达到93.5%,对于混合感染的发现能力C区分型较强,稳定性无差异。结论C区分型方法更加精确。 丁伟良 许可 邓小昭 喻荣彬 杨志贤 邵建伟 谈永飞 张云关键词:丙型肝炎病毒 核心区 基因分型 家蚕核多角体病毒载体稳定高效表达HBeAg条件及其初步应用的研究 2001年 利用已构建的含有HBeAg基因的重组家蚕核多角体病毒rBmHBe ,摸索了HBeAg在家蚕细胞中表达的最佳条件组合 ,细胞接种密度 :(3 .2~ 6 .4)× 10 5细胞 /瓶。病毒接种时间 :细胞接种后 48~ 6 0h。感染复数 (MOI)为 0 .0 4~ 0 .4PFU/细胞。细胞上清经硫铵沉淀、分子筛和阴离子交换柱层析纯化获得电泳纯样品。该样品与E .coli表达的HBeAg相比 ,抗原性高出 10 0倍 ,且与抗HBc交叉反应低至 1%倍。利用该样品建立双抗原夹心法测定抗HBe ,灵敏度高于目前的市售抗HBe试剂盒。 高健 刁振宇 邓小昭 周宗安 王永山关键词:乙肝病毒E抗原 家蚕核多角体病毒 纯化 乙型肝炎 携带猪囊虫表位的嵌合蛋白疫苗的构建及其免疫学研究 被引量:6 2006年 用PCR法将猪囊虫抗原表位n1、n2插入乙肝病毒核心蛋白(HBc)序列的第78~79位之间,将猪囊虫抗原表位n3接在149位之后,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建了重组表达质粒pET28a—△c-3n,在大肠杆菌中表达出融合蛋白。命名为PCCE。将PCCE纯化后免疫小鼠,以ELISA检测小鼠的体液免疫应答,Western blot检测抗体的特异性.Dot ELISA验证所选表位的保护性。另用绦虫卵攻击免疫小鼠,以观察疫苗的保护作用。测序结果表明,重组质粒构建成功;SDS—PAGE显示,融合蛋白表达正确,电镜证实有蛋白颗粒形成。对免疫小鼠应用ELISA检测到高滴度抗体;Western blot结果表明。免疫鼠体内诱导出了3种特异性抗体;Dot ELISA结果表明,所逸表位对宿主可能具有保护性。绦虫卵攻击免疫小鼠试验表明,疫苗PCCE的相对保护率为89%。结论:成功地表达和纯化了以HBc为载体的携带3个猪囊虫表位的融合蛋白(PCCE),以PCCE作为疫苗免疫小鼠,能诱导较强的特异性体液免疫反应,免疫小鼠对绦虫卵攻击具有较好的免疫保护作用。 邓小昭 周宗安 刁振宇 高健 王元伦 刘玉 郑纪山关键词:猪囊虫 疫苗 HBCAG 免疫反应 HCV-F基因在hepG2细胞中的表达以及对PI3K的影响 2008年 探讨丙型肝炎病毒(HCV)F基因对PI3K表达的影响。应用PCR技术从含有HCV全长开放阅读框的质粒中获得HCV-F基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0(-)中。通过酶切、PCR及测序鉴定,HCV-F基因已正确插入到pcDNA3.0(-)中,再利用脂质体转染HepG2细胞。经RT-PCR及Westernblot检测,HCV的F基因在HepG2细胞中获得表达,而且在表达重组HCV-F的转染HepG2细胞中,检测到PI3K蛋白的表达。实验表明HCV-F可在体外激活PI3K及其信号通路。 储春丽 邓小昭 董莉莉 胡学芳 喻荣彬 张云 吴超关键词:丙型肝炎病毒F蛋白 HEPG2细胞 磷脂酰肌醇-3激酶 马立克氏病病毒糖蛋白B基因克隆及其在家蚕细胞中的表达 1996年 将马立克氏病病毒(MDV)GA株基因文库中的BamHII3和K3克隆质粒分别用双酶切消化,获得2.8kb的BamHI-SalⅠ片段和1.1kb的BamHI-EcoRI片段,然后将这2个片段定向克隆于载体pUR222中,构建了含MDV糖蛋白B(gB)基因的重组质粒。为了基因操作方便和高效表达,设计了1对带有酶切位点的引物,用PCR扩增了MDVgB基因部分片段,并按正确方向插入去磷酸化的载体质粒中,得到起始密码子前带有EcoRI酶切位点的MDVgB基因克隆,再将该基因插入去磷酸化的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBF14中,DNA序列分析确证了克隆基因及阅读柜架的正确性。以重组转移载体与野生型BmNPV共转染家蚕细胞,用有限稀释法点杂交结合空斑技术纯化重组病毒。用荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞。 罗满林 陈溥言 蔡宝祥 张林元 邓小昭关键词:马立克氏病 病毒 分子克隆