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MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1: 2014年; 为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。; 李昊薛超张秋婷王春生朴善花宋红卫安铁洙; 关键词：绵羊成纤维细胞 MSTN基因 RNA干涉转基因细胞

小鼠MSTN基因RNA干涉载体的构建及干涉效率的检测被引量：2: 2012年; 为了筛选小鼠肌肉生长抑制素(MSTN)基因的干涉序列,根据GenBank中小鼠的MSTN基因序列,采用RT-PCR方法克隆获得MSTN基因序列,构建其真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;根据MSTN基因序列设计合成3种MSTN基因干涉序列(M1、M2、M3),并构建相应的RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3。将构建的真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN单独或分别与3种干涉载体共转染293GP细胞,检测干涉载体对MSTN基因的干涉效率。结果表明:试验成功克隆得到与GenBank中的序列同源性为99.91%的小鼠MSTN基因序列,并构建了真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;与转染pcDNA 3.1(+)-MSTN后的293GP细胞中MSTN基因的相对表达量(1.000)相比,转染pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3后MSTN基因相对表达量明显下降,pRNAT-M1的干涉效率最高。说明研究成功获得对MSTN基因表达具有明显干涉作用的干涉序列。; 安星兰薛超朴善花苗向阳滕春波安铁洙王春生; 关键词：小鼠 RNA干涉

转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定: 2018年; 为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。; 杜文敬李昊薛超朴善花王春生安铁洙; 关键词：绵羊 RNA干涉体细胞核移植

转RNA干涉Myostatin基因小鼠成纤维细胞的筛选: 肌肉抑制素基因/(Myostatin, MSTN/)属TGF-β超家族,是肌肉细胞的自分泌因子,主要在动物骨骼肌中特异性表达并对肌肉的生长发育起到负调控作用,因此人工敲低MSTN基因表达可以有效促进成肌细胞分化为成熟肌纤...; 薛超; 关键词：RNA干涉小鼠成纤维细胞; 文献传递

转肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株的筛选: 2012年; 为了筛选肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株,研究利用人工合成的小鼠肌肉启动子SP,连接前期工作中获得带有GFP基因的小鼠MSTN基因RNA干涉载体pR-NAT-M1,构建真核表达载体pRNAT-SP-M1,将pRNAT-SP-M1线性化后转染小鼠成纤维细胞并通过300μg/mL G418筛选获得转基因阳性细胞。结果表明:获得的转基因阳性细胞呈现正常的小鼠成纤维细胞的梭形,且在荧光显微镜下呈现出表达绿色荧光蛋白的绿色;转基因阳性细胞的生长曲线呈"S"形;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍具有正常的细胞形态和增殖特性;PCR鉴定结果显示转基因阳性细胞基因组DNA中整合有pRNAT-SP-M1序列。说明成功获得了转肌细胞特异表达的MSTN基因RNA干涉序列小鼠成纤维细胞株。; 吴治昊薛超安星兰王春生苗向阳安铁洙朴善花; 关键词：小鼠 MSTN基因 RNA干涉成纤维细胞

蜘蛛拖丝蛋白基因嵌合体小鼠的研究: 蜘蛛拖丝由于具有独特的抗拉性和弹性的力学特性而备受关注。为了建立通过动物获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究以小鼠为实验动物模型,利用前期工作获得的含有蜘蛛拖丝蛋白基因的假病毒感染小鼠ES细胞,通过囊胚注射制备整合有目的基因的...; LIANG Yang梁洋WANG Chun-sheng王春生PIAO Shan-Hua朴善花XUE Chao薛超AN Tie-zhu安铁洙; 关键词：蜘蛛动物模型

绵羊Klf4基因逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1: 2011年; Klf4作为诱导产生多能性干细胞的基因之一,在体细胞的重编程过程中发挥着重要的作用。为构建绵羊Klf4基因逆转录病毒载体,参照本实验室已克隆出的绵羊Klf4基因编码区(GenBank登录号GQ280389)设计引物,将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到逆转录病毒载体pMXs的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,和包装质粒pVSV-G联合转染293GP细胞获得重组逆转录病毒。通过绵羊胎儿成纤维细胞检测病毒侵染能力,并使用RT-PCR和SDS-PAGE方法检测在包装细胞和被侵染的成纤维细胞中Klf4基因的转录和表达。本试验成功获得具有侵染能力可以表达绵羊Klf4转录因子的重组逆转录病毒,为今后进一步开展以此为基础的绵羊体细胞诱导重编程研究奠定了基础。; 王春生杨越飞宁方勇薛超朴善花安铁洙; 关键词：绵羊逆转录病毒载体

小鼠骨骼肌Desmin启动子的克隆及表达活性分析被引量：3: 2011年; 为了研究在体细胞中小鼠Desmin基因启动子是否具有表达活性,试验根据NCBI中小鼠Desmin启动子的序列,利用生物软件Primer Premier 6.0设计序列上、下游引物,克隆小鼠基因组中Desmin启动子片段,将克隆到的Desmin启动子片段与pAcGFP1-N1载体中的CMV启动子进行置换以构建真核表达载体pAcGFP1-N1-Des,然后将pAcGFP1-N1-Des依次转染CHO-K1、COS-7、293GP和NIH-3T3等细胞后,观察绿色荧光蛋白表达活性。结果表明:克隆得到的Desmin基因上游启动子(841 bp)与NCBI序列(NT_039173.7)比对同源性为99.76%;克隆得到的启动子中含有CAAT-box、GC-box核心调控区以及MyoD等多种转录因子结合位点;所构建的pAcGFP1-N1-Des经转染COS-7、CHO-K1和Hela细胞后可观察到呈现表达活性的绿色荧光。说明克隆获得了在COS-7、CHO-K1以及Hela细胞中的具有表达活性的小鼠Desmin基因启动子。; 薛超安星兰王春生朴善花苗向阳安铁洙; 关键词：小鼠启动子活性分析

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薛超