胡新武 作品数:42 被引量:115 H指数:7 供职机构: 华中科技大学同济医学院基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
An optimized recording method to characterize biophysical and pharmacological properties of acid-sensing ion channel 2008年 Objective To re-confirm and characterize the biophysical and pharmacological properties of endogenously expressed human acid-sensing ion channel 1a (hASIC1a) current in HEK293 cells with a modified perfusion methods. Methods With cell floating method, which is separating the cultured cell from coverslip and putting the cell in front of perfusion tubing, whole cell patch clamp technique was used to record hASICla currents evoked by low pH external solution. Results Using cell floating method, the amplitude of hASICla currents activated by pH 5.0 in HEK293 cells is twice as large as that by the conventional method where the cells remain attached to coverslip. The time to reach peak at two different recording conditions is (21±5) ms and (270±25) ms, respectively. Inactivation time constants are (496±23) ms and (2284±120) ms, respectively. The cell floating method significantly increases the amiloride potency of block on hASIC 1 a [IC50 is (3.4± 1.1 ) μmol/L and (2.4± 0.9) μmol/L, respectively]. Both recording methods have similar pH activation ECs0 (6.6±0.6, 6.6±0.7, respectively). Conclusion ASICs channel activation requires fast exchange of extracellular solution with the different pH values. With cell floating method, the presence of hASIC la current was re-confirmed and the biophysical and pharmacological properties of hASIC la channel in HEK293 cells was precisely characterized. This method could be used to study all ASICs and other ligand-gated channels that require fast extracellular solution exchange. 李爱 司文 胡新武 刘长金 曹晓华关键词:PH 心肌ECM研究进展:心肌ECM的获取、评价、和改造 被引量:2 2013年 急、慢性心肌梗死导致功能性心肌细胞坏死,心泵功能受损,可利用组织工程技术将心肌细胞与细胞外支架制备成心肌补丁进行心功能修复。心肌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)被认为是构建细胞外支架的理想材料。使用ECM构建重组心肌是心肌组织工程研究的重要方向。脱细胞处理制得的ECM具备较低的免疫原性、强大的自我更新能力以及良好的生物相容性。目前心肌ECM的制备方法多种多样,相对彻底的脱细胞化处理是消除免疫原性的必要步骤,但同时会造成ECM超微结构的破坏,不利于ECM重细胞化和心肌重建。研究者尝试通过各种手段检测并评价脱细胞方法的效果,不断改良脱细胞化技术,并通过修饰和改造心肌ECM,提升其生物相容性和机械性能。本综述围绕心肌ECM的获取、评价、和改造,对目前组织工程的心肌ECM相关研究新进展进行总结。 姜煜东 李文思 尹盟盟 余翀 胡新武 席姣娅关键词:心肌 细胞外基质 大麻素对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸激活电流的抑制作用 被引量:2 2007年 目的探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用。方法采用全细胞膜片钳技术。结果①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10~1000μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断。②预加WIN55,212-2(0.03~10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性。WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;最大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85μmol/Lvs25.76μmol/L)。③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断。细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用。结论大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一。 周莹 刘长金 李爱 胡新武 陈蕾 刘烈炬关键词:Γ-氨基丁酸A受体 全细胞膜片钳 大麻素抑制大鼠三叉神经节神经元ATP激活电流(英文) 被引量:1 2007年 本文在培养的大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元上采用全细胞膜片钳技术,探讨大麻素对大鼠TG神经元ATP激活电流(ATP-activated currents,I_(ATP))的影响。结果显示:(1)胞外给予ATP,大部分受检细胞(67/75,89.33%)可记录到一个内向电流,且具有剂量依赖性。该电流可被P2X嘌呤受体特异性拮抗剂PPADS所阻断。(2)预加WIN55212-2[大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1受体)激动剂]可对I_(ATP)产生抑制作用,此作用呈剂量依赖性,并可被CB1受体特异性拮抗剂AM281阻断。预加不同浓度的WIN55212-2(1×10^(-13)、1×10^(-12)、1×10^(-11)、1×10^(-10)、1×10^(-9)和1×10^(-8)mol/L)对I_(ATP)(1×10^(-4)mol/L ATP)的抑制作用分别为(8.14±3.14)%、(20.11±2.72)%、(46.62±3.51)%、(72.16±5.64)%、(80.21±2.80)%和(80.59±3.55)%。(3)预加WIN55212-2后I_(ATP)的浓度-反应曲线明显下移:最大反应浓度时的I_(ATP)幅值减小了(58.02±4.21)%,而阈值基本不变;预加WIN55212-2前后曲线的EC_(50)值非常接近(1.15×10^(-4)mol/L vs 1.27×10^(-4)mol/L)。(4)预加forskolin[腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)激动剂]或8-Br-cAMP可以逆转WIN55212-2对I_(ATP)的抑制作用。以上结果表明,大麻素可能作用于CB1受体,通过抑制AC-cAMP-PKA途径发挥对I_(ATP)的抑制作用。 申晶晶 刘长金 李爱 胡新武 陆永利 陈蕾 周莹 刘烈炬关键词:大麻素受体1 P2X受体 三叉神经节 膜片钳技术 甲基汞诱导海马神经细胞凋亡及其机制研究 被引量:5 2008年 目的研究甲基汞对海马神经元的损伤及致凋亡作用,并初步探讨甲基汞神经毒性的机制。方法以5d内新生SD大鼠海马神经元为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测甲基汞对培养的海马神经细胞活性的影响,原位末端标记(TUNEL)法和流式AnnexinV-FITC-PI法检测甲基汞诱导海马细胞凋亡细胞数和凋亡百分率,并用激光共聚焦技术,从单个细胞水平检测甲基汞对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响。结果MMT法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h对培养的海马神经细胞杀伤率为(22.90±2.77)%(n=7)。TUNEL法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h组海马神经元凋亡指数[(34.45±1.30)%,n=10]高于溶剂对照组[(6.01±0.64)%,n=10],差异有统计学意义(P<0.01)。流式AnnexinV-FITC-PI法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h诱导海马神经细胞凋亡率为(51.20±4.98)%(n=5)。即时染毒0.01、0.1、1μmol/L甲基汞,使海马神经元细胞内游离钙离子浓度分别增加(5.58±2.37)%(n=5),(82.71±20.42)%(n=4)和(246.38±64.77)%(n=4)。预孵育硝苯的平可延缓甲基汞升钙作用的起效时间并降低胞内钙离子浓度增加的幅值。结论甲基汞对培养的海马神经细胞的急剧升钙作用可能参与了甲基汞的致细胞损伤和诱导凋亡作用,并且可能与细胞膜上的电压门控钙通道有关。 李爱 陈雷 胡新武 张亮品 曹雪红 刘烈炬 刘长金关键词:汞 神经元 凋亡 细胞内游离钙 H_2O_2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用 被引量:4 2006年 目的:观察H2O2在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的Kv的影响,探讨H2O2对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。方法:用酶解法急性分离单个PASMCs,以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道(voltage-gated potassium channel,Kv)电流。结果:常氧下H2O2可显著增加Kv电流,电流-电压关系曲线左上移;而且Kv电流呈浓度依赖性增加。结论:常氧下H2O2可使Kv通道开放。 骆红艳 唐明 杜以梅 刘长金 唐碧 胡新武 胡谋先 席姣娅 宋元龙 Jurgen Hescheler关键词:过氧化氢 平滑肌细胞 膜片钳术 TRPV4 在渗透压对大鼠心肌收缩性影响中的作用(英文) 被引量:1 2008年 本文旨在探讨低渗和高渗内环境对心肌收缩性的影响及机制。取Sprague-Dawley(SD)大鼠左心室乳头状肌,在电刺激引起兴奋的条件下,分别记录在低渗、等渗和高渗灌流液中肌条的收缩力;同样条件下观察在低渗、等渗和高渗灌流液中加入渗透压敏感蛋白瞬时感受器电位离子通道家族香草素受体亚家族IV型(transient receptor potential vanilloid4,TRPV4)的拮抗剂和激动剂后肌条收缩力的变化。结果显示:(1)与等渗(310mOsm/L)时心肌收缩力相比,渗透压为290、270和230mOsm/L时心肌收缩力分别增加11.5%、21.5%、25.0%(P<0.05);渗透压为350、370、390mOsm/L时心肌收缩力分别降低16.0%、23.7%、55.2%(P<0.05)。(2)在低渗液(270mOsm/L)中加入TRPV4拮抗剂钌红(ruthenium red,RR),低渗对心肌收缩力的增强作用被抑制36%(P<0.01);在高渗液(390mOsm/L)中加入RR,高渗对心肌收缩力的抑制作用增加56.1%(P<0.01)。(3)在等渗液中(310mOsm/L)加入TRPV4激动剂4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-phorbol-12,13-didecanoate,4α-PDD),心肌收缩力没有改变;在高渗液中(390mOsm/L)加入4α-PDD,高渗对心肌收缩力的抑制作用增加27.1%(P<0.01)。以上结果提示,TRPV4参与渗透压引起的心肌收缩力变化。 李静 汪明欢 王艻 田扬 段亚琦 骆红艳 胡新武 Jüergen Hescheler 唐明关键词:心肌 渗透压 TRPV4 生理学实验教学探讨 被引量:6 2007年 阐述生理学实验课课前准备、课堂教学、课后总结等各个教学环节的内容和要求,说明生理实验教学方法的重要性;探讨如何在实验教学中培养学生的创新能力,开展自行设计实验,培养科研动手能力,激发学生的学习兴趣,以提高生理学实验课的教学质量和效果。 骆红艳 胡新武 唐明关键词:生理学 教学方法 缺氧对小鼠背根神经节细胞I_K电流的影响(英文) 2008年 目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从+10 mV至+70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。 李爱 曹雪松 曹雪红 高琳琳 胡新武 张亮品 陈蕾 刘烈炬 刘长金关键词:缺氧 电压门控钾通道 全细胞膜片钳 β-淀粉肽-(1-40)对电压依赖性钙电流的作用及铝和银杏内酯B对该作用的影响 被引量:3 2004年 目的 探讨不同时期配制的 β 淀粉肽 (1 4 0 ) (Aβ1 40 )对大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流 (IHVA)的作用并观察铝和银杏内酯B (GB)对该作用的影响。方法 应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元IHVA电流 ,并观察药物对其的作用。结果 (1)细胞外给予老化处理的Aβ1 40 可以增强IHVA幅度 ,Aβ1 40 的作用具有不可逆性和浓度依赖性 ;新鲜配制的Aβ1 40 对IHVA几乎没有影响。 (2 )Aβ1 40 增强IHVA的作用可以被L 型钙通道阻断剂nifedipine抵消。 (3)PKA的抑制剂H 89可以抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。 (4)Aβ1 40 增加IHVA的作用可被 1 0mmol/L的AlCl3 进一步增加。 (5 )细胞外给予GB对正常的IHVA没有影响 ,但可抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。结论 β 淀粉肽(Aβ)通过增强IHVA可引起胞内钙超载 ,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一 ,铝可以加强Aβ的毒性作用 ;GB可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用。 陈蕾 刘长金 唐明 胡新武 李爱 张亮品 骆红艳 胡晓玲关键词:AΒ1-40 银杏内酯B 细胞外 淀粉