罗金杰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广州医学院第二附属医院神经科学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 部分性发作癫痫相关SCN1A基因M145fsX148突变体的构建及亚细胞定位
- 2013年
- 目的构建部分性发作癫痫SCN1A基因M145fsX148突变体与黄色荧光蛋白(YFP)融合基因表达载体pCMV-YFP-MuSCN1A,观察其在人类神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞中的亚细胞定位。方法应用基因重组技术,构建YFP与部分性癫痫SCN1A基因M145fsX148融合表达质粒载体,脂质体法转染技术将其与荧光真核表达载体pECFP-ER共转入SH-SY5Y细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位情况。结果重组质粒经酶切鉴定和测序分析证实构建成功,激光扫描共聚焦显微镜显示重组真核表达载体pCMV-YFP-MuSCN1A主要在SH-SY5Y细胞胞质中表达。结论成功构建部分性发作癫痫相关SCN1A基因M145fsX148突变体与YFP融合基因质粒载体,实验显示其在SH-SY5Y细胞胞质中表达,为该突变基因的进一步研究奠定了基础。
- 罗金杰李文斌汤斌廖卫平
- 关键词：部分性发作癫痫质粒构建亚细胞定位
- Dravet综合征患者c.1738C>T突变体体外剪接分析被引量：2
- 2013年
- 目的:选取本实验室筛查SCN1A突变的Dravet综合征患者,通过生物信息学方法分析其对剪接的影响,构建迷你基因进行体外剪接分析。方法:使用Human Splicing Finder数据库预测c.1738C>T突变对剪接的潜在影响,通过PCR方法扩增SCN1A第10、11、12、13号外显子及两端部分内含子,克隆到pTARGET真核表达载体,构建pTARGET-EXON-10-11-12-13迷你基因,以野生型pTARGET-EXON-10-11-12-13为模板构建c.1738C>T突变体。将野生型和c.1738C>T突变体分别转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR。结果:野生型与c.1738C>T突变体RT-PCR产物大小都为591bp。结论:c.1738C>T突变不是通过对剪接的影响导致疾病发生。
- 夏永仁汤斌罗金杰李文斌廖卫平
- 关键词：DRAVET综合征SCN1A剪接
