祁自柏
- 作品数：121 被引量：464H指数：14
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理电子电信更多>>
- 我国献浆血员中庚型肝炎病毒HGV RNA的检测及部分序列分析被引量：4
- 1997年
- 采用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测１００名献浆血员中庚型肝炎病毒ＨＧＶＲＮＡ，其中１９名（１９％）ＨＧＶＲＮＡ阳性；对其中４份ＰＣＲ产物进行了直接测序，结果表明４株病毒在此区的核苷酸序列相对保守，其同源性在９５％以上，与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ的同源性分别为８８％和８５％不同。提示该４株ＨＧＶ与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ不属于同一基因型。
- 王佑春范金水庄辉孙彬裕李奎吴晓音李奎吴晓音汪兴太郝杰李河民
- 关键词：反转录聚合酶链反应庚型肝炎病毒
- 生物芯片产品质量控制平台及系列生物芯片诊断试剂研究被引量：1
- 2006年
- 祁自柏王军志白东亭穆海东赵建龙胡守旺于洋谷金莲扬振
- 关键词：诊断试剂基因突变检测遗传性疾病传染性疾病
- 对四种国产乙型肝炎酶联免疫试剂盒的灵敏度和特异度分析被引量：14
- 2008年
- 目的比较4种国产乙型肝炎（乙肝）ELISA试剂盒的灵敏度和特异度。方法取慢性乙肝患者和不合格献血员血液样本594份，应用4种国产乙肝ELISA试剂盒检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hge和抗-HBc，并与1种国外乙肝化学发光试剂盒（Abbott公司Architect）比较，对结果不一致的样本再用各试剂盒做双孔重复检测，对HBsAg临界值附近的样本用Abbott HBsAg确证试剂盒（Architect HBsAg confirm）验证；以Abbott试剂盒（Architect）的检测结果为标准，计算4种国产ELISA试剂盒的灵敏度、特异度、总符合率和约登指数。然后用上述试剂盒检测HBV5项标志物的灵敏度参比品，比较不同试剂盒的灵敏度。结果与Abbott公司Architect试剂盒相比，国产IqBsAg ELISA试剂盒的灵敏度低4～10倍；抗-HHs、HBeAg、抗-HHe和抗-HBcELISA试剂盒的灵敏度低4～16倍；且有假阳性。HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc的总符合率分别为96．46％～98，15％、94．28％～98．15％、98．15％～99，49％、90.07％～96．30％、92.09％～96．80％。结论国产乙肝ELISA试剂盒的灵敏度和特异度有待进一步提高。
- 吴星周诚黄维金祁自柏梁争论李河民庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒诊断试剂酶联免疫吸附试验
- 丙型肝炎病毒阳性血清体外感染人肝细胞的研究
- 2008年
- 目的研究丙型肝炎病毒（HCV）抗体（Ab）阴性，HCV—RNA阳性血清建立体外感染肝细胞模型。方法HCVAb阴性，HCV—RNA阳性的窗口期血清与人肝细胞共同培养，用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫荧光染色、Western blot、共聚焦显微镜和透射电镜等方法检测细胞内HCV核酸复制、蛋白质表达及超微结构改变。结果细胞与病毒共同培养7～45d，细胞内和／或培养上清中可间断检出HCV正、负链RNA；细胞浆内有HCV核心和NS3抗原的表达；细胞超微结构有改变，并于感染后第24天时观察到类似病毒样颗粒。结论窗口期血清中的HCV能在人肝细胞7701中复制一段时间。
- 刘艳祁自柏张贺秋李河民谷金莲于洋杨振陈坤
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 抗HCV国家参考品及高质量丙肝诊断试剂的研究被引量：2
- 2002年
- 丙型肝炎病毒(HCV)于1989年刚刚被发现,它的基因为一条正链RNA分子,在我国人群中的感染率为3.2%.丙型肝炎通过血液传播,慢性化率很高,目前尚无预防疫苗,也无特效治疗药物.阻断其传播的最有效途径为用丙肝试剂筛查供血员和血液制品,为诊断丙型肝炎则需要进行基因检测和对初筛结果进行确证.
- 祁自柏凌世淦陶其敏毕胜利李河民张贺秋冯百芳张贺秋周诚宋晓国
- 关键词：丙型肝炎诊断试剂丙型肝炎病毒HCV
- 丙型肝炎病毒北京株NS3基因的克隆及测序
- 1999年
- 用ＲＴ－ＰＣＲ方法从北京株丙型肝炎病毒中扩增出ＮＳ３区基因片段，该片段经ｐＧＥＸ－Ｔ载体克隆到大肠杆菌ＤＨ５α菌株中．经自动序列分析仪测出ＮＳ３基因的７２８ｂｐ长的核酸序列．发现在该片段中第３１位核苷酸发生Ａ→Ｔ突变，产生一个终止突变．这表明，丙型肝炎病毒北京株存在一定的变异，产生缺陷型病毒，这类缺陷型病毒的出现可能是丙型肝炎病毒持续性感染的原因之一．
- 李东梁布锋祁自柏
- 关键词：丙型肝炎病毒RT-PCR
- 生物素标记UTP及温度值对HCV细胞外聚合酶分子复制模型的影响
- 2004年
- 目的 研究建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的生物素标记UTP浓度及温度值 ,为筛选药物创造条件。方法 使用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR ,从我国HCVRNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5bRNA聚合酶全长基因序列 ,构建原核表达载体pET 30a NS5b。在多个载体中选取pET 30a作为表达载体 ,选择诱导表达条件。利用Ni2十 金属离子螯和亲和层析将其纯化 ,对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究。利用 96孔DNA BAND培养板 ,建立生物素标记检测HCVNS5b聚合酶活性的模型。结果 测序及读码框架分析结果表明 ,已得到相关HCVNS5bRNA聚合酶全基因序列。在最佳表达条件下 ,诱导表达的融合蛋白 (相对分子质量6 5 0 0 0 ) ,纯度大于 92 .83%HCV聚合酶活性集团完整。建立了细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的最佳生物素标记UTP浓度及温度值。结论 HCV聚合酶得到高效表达和有效纯化 ,以及HCV聚合酶作用模板及温度的最佳条件分别为 0 .5mmol/L及 37℃。
- 杨振蒋建东祁自柏陈鸿珊张华远李河民
- 关键词：聚合酶HCV生物素标记
- 中国人血清中丙型肝炎病毒聚合酶全长基因的克隆表达及鉴定
- 2003年
- 构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复制的RNA聚合酶原核表达载体pET30aNS5b,并在大肠杆菌中获得NS5B聚合酶蛋白的高效表达,为建立HCV NS5b聚合酶细胞外分子复制模型的方法创造条件。使用高保真Pfu DNA聚合酶进行反转录及套式PCR扩增,从我国HCV RNA阳性血清中扩增出HCV NS5b RNA多聚酶全基因序列,经BamHI和SalI酶切,将其克隆至同样酶切的pET-30a载体中:转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。用抗HCV NS5b单克隆抗体做Western-Blot进行鉴定。结果表明构建了原核表达载体,pET30aNS5bpET30aNS5b明显表达出12-His-NS5b聚合酶蛋白。测序结果表明,与已发表的相关HCV NS5b RNA聚合酶序列比较,其核苷酸和氨基酸的同源性分别在69％～92.7％及88.8％～96.8％之间。在最佳表达条件下,可高效诱导表达融合蛋白(65kDa),最高表达量占菌体蛋白18.9％。Western-Blot结果显示表达蛋白为HCV NS5b酶。HCV聚合酶蛋白全长基因可以成功地克隆在pET-30a载体上并有效表达出目的蛋白,为研究建立HCV NS5b聚合酶细胞外分子复制模型莫定了基础。
- 杨振蒋建东祁自柏陈鸿珊张华远李河民
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 我国部分地区庚型肝炎病毒(HGV)5'端部分基因序列的比较被引量：10
- 1997年
- 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴｎＰＣＲ）法，用５′端引物对我国部分不同地区ＨＧＶＲＮＡ阳性的血清进行扩增，扩增产物为３９１ｂｐ，将其纯化后连接到ｐＧＥＭＴＥａｓｙ质粒上，然后进行测序。测序结果表明，５′非编码区可分为两部分，靠近５′端为保守区，靠近核心区５０ｂｐ为高度变异区，而靠近５′非编码区的部分核心区的序列也较为保守。５株中国南方ＨＧＶ的５′端基因序列与美国报道的ＧＢＶＣ和ＨＧＶ的同源性分别在８３．４％～８９．１％和８５．７％～９０．３％，而５株之间的同源性超过９１．４％，显示中国的ＨＧＶ不同于美国报道的ＧＢＶＣ和ＨＧＶ，而且在中国流行的ＨＧＶ之间的基因序列较为保守。
- 王佑春庄辉孙彬裕吴晓音吴晓音李河民
- 关键词：反转录聚合酶链反应庚型肝炎病毒
- 丙型肝炎病毒NS3区基因的克隆、表达及产物的纯化和抗原性分析
- 2004年
- 目前,我国阻断丙型肝炎传播的主要方法是用抗丙型肝炎病毒(HCV)酶联免疫吸附法(ELISA)试剂筛选供血员,国产试剂盒所用NS3抗原质量不太理想,使得国产试剂对NS3抗体漏检较多,提高该试剂盒质量的当务之急是开发更好的HCV抗原,特别是非结构区抗原[1,2].为分析和比较不同长度和型别的NS3片段的抗原性,我们在大肠杆菌中表达了5个不同长度和型别的HCV NS3抗原,并作为包被抗原,按间接ELISA原理检测抗HCV国家参考品血清及部分临床样本,比较其抗原性.
- 王尊文祁自柏于洋谷金莲杨振张华远李河民
- 关键词：丙型肝炎病毒NS3区基因克隆酶联免疫吸附法
