白福良
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 编码重组新城疫病毒的cDNA、由该cDNA拯救的病毒及其在治疗恶性肿瘤中的应用
- 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。
- 吴云舟白福良李德山牛泽杉何金娇
- 文献传递
- 重组新城疫病毒rNDV-IL15在黑色素瘤治疗中的效果被引量：3
- 2014年
- 为了提高重组新城疫病毒抑制肿瘤的效果,本实验拯救获得了重组新城疫病毒rNDV-IL15。构建prNDV-IL15重组质粒,转染BHK21细胞后,拯救重组病毒rNDV-IL15,并测定病毒生长曲线;rNDV-IL15以0.1 MOI感染B16F10细胞,ELISA法检测细胞上清液中IL15的表达量;MTT法比较rNDV-IL15和rNDV在体外抑制B16F10细胞的效果,并比较了两者在黑色素瘤肿瘤模型中对荷瘤小鼠的治疗效果。结果表明,rNDV-IL15构建并成功拯救;病毒生长曲线表明,插入IL15后对病毒的生长无影响;IL15在细胞上清液中有较高的表达,达到(1 044.3±27.7)ng·mL-1;rNDV-IL15和rNDV对B16F10细胞的抑制率呈时间依赖性,但两者的抑制率无显著差异;与rNDV相比,rNDV-IL15在体内能较明显地抑制肿瘤生长。结果提示,rNDV-IL15是一种更有效的抗肿瘤制剂。
- 牛泽杉白福良孙田田辉尹杰超曹宏伟于丹田贵游吴云舟李德山任桂萍
- 关键词：重组新城疫病毒黑色素瘤B16F10抗肿瘤制剂
- 重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统的抗肿瘤活性被引量：3
- 2013年
- 本研究提取大肠杆菌JM109菌株的全基因组,克隆获得CD基因,将CD基因和IRES-EGFP基因构建到pEE12.4表达载体上,形成pEE12.4IE-CD真核表达载体。用该表达载体转染人肝癌细胞后,以不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)处理细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定CD/5-FC系统对人肝癌细胞HepG2的杀伤效果。当前导药物5-FC的浓度分别为10、20和30 mmol.L 1时,CD/5-FC系统对HepG2细胞的杀伤效率分别为18.07%、42.98%和62.20%,与对照组相比较差异具有统计学意义。急性毒性实验结果表明,小鼠尾静脉注射不同剂量5-FC,组间剂量比为1∶0.5,采用改良寇氏法测定5-FC对小鼠的LD50为507 mg.kg 1,95%可信限为374～695 mg.kg 1。再以LD50实验中最大LD0剂量为基准,组间剂量差值为10 mg.kg 1,测得最大安全剂量为200 mg.kg 1,并对体重、体征指标进行跟踪观察。这些检测结果可为动物实验奠定基础。将CD基因连于新城疫病毒(NDV)rClone30载体中并建立肿瘤动物模型,抑制肿瘤实验结果表明,重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统具有较高的体内抗肿瘤活性。综上所述,克隆获得的CD基因具有生物学活性,重组rClone30-CD/5-FC系统是一种潜在的治疗肿瘤的方法。
- 吕政张天援韩苗苗白福良吴伟田贵游任桂萍李德山
- 关键词：5-氟胞嘧啶新城疫病毒抗肿瘤活性半数致死量
- 利用SUMO表达系统高效可溶表达人白细胞介素15及其活性研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨重组人白细胞介素15(rhIL-15)的表达条件、纯化工艺并进行生物活性鉴定。方法:采用RT-PCR方法从正常成人外周血淋巴细胞中扩增出人白细胞介素15(hIL-15)cDNA,克隆到pSUMO Vector中,构建rpSUMOhIL-15重组质粒。将转化重组质粒的工程菌诱导表达,超声破碎后取菌液上清,经过亲和层析、酶切、亲和层析得到成熟蛋白。高效液相色谱进行纯度分析;利用rhIL-15促进T细胞增殖、rhIL-15诱生的NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力鉴定其生物活性;荷瘤鼠实验研究rhIL-15抗肿瘤作用。结果:经纯化后得到rhIL-15,其分子量大小为14.4 kD,蛋白纯度在95%以上,具有显著刺激T细胞增殖和NK细胞杀伤肿瘤细胞效果。动物实验结果显示其具有明显的抗肿瘤作用。结论:经过纯化获得高纯度和高生物学活性的rhIL-15,且具有明显增强NK细胞杀伤、刺激T细胞增殖和抗肿瘤的活性,为细胞因子联合其他方法治疗肿瘤等疾病提供了实验基础。
- 白福良田辉牛泽杉于引航王文飞周兵李德山
- 关键词：融合蛋白T细胞增殖NK细胞杀伤活性抑制肿瘤作用
- 编码重组新城疫病毒的cDNA、由该cDNA拯救的病毒及其在治疗恶性肿瘤中的应用
- 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。
- 吴云舟白福良李德山牛泽杉何金娇
- 文献传递
- 重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL对人肝癌细胞的协同作用及其机制探讨被引量：3
- 2014年
- 为研究重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL蛋白对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用及其机制,首先将pee12.4-hDR5转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选,建立了细胞表面稳定高效表达DR5的HepG2细胞系。利用MTT法检测TRAIL对该细胞和对照HepG2细胞的抑制率,表明TRAIL对该细胞的抑制率显著高于对照HepG2细胞(P<0.01),证明了克隆的hDR5具有生物学活性;与rClone30-hDR5组和TRAIL组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL在体外能更好地抑制HepG2细胞的生长。Annexin V-FITC/PI染色和Quantitative Real-time PCR结果表明,与其他组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL显著提高caspase 3和caspase 8的mRNA表达水平并协同诱导细胞凋亡。以1 MOI感染HepG2细胞,流式细胞仪检测证明,与rClone30相比,rClone30-hDR5能显著诱导hDR5的表达上调,从而增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。综上所述,rClone30-hDR5联合TRAIL在肿瘤治疗方面存在潜在的应用价值。
- 孙田牛泽杉刘雪莹田贵游白银白福良尹杰超于丹吴云舟李德山于庆忠李思明任桂萍
- 关键词：DR5TRAIL重组新城疫病毒肿瘤治疗
- FGF-21对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响被引量：10
- 2014年
- 本研究探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织学习记忆与抗氧化的影响。实验分为正常对照组、模型组及FGF-21高、中、低剂量处理组,模型组及FGF-21处理组,连续8周于小鼠背部皮下注射D-半乳糖180 mg·kg-1·d-1,FGF-21处理组同时给予颈部皮下注射FGF-21(5、2及1 mg·kg-1·d-1),正常对照组颈部皮下注射等量生理盐水。实验第7周时采用程控水迷宫和跳台仪检测各组小鼠的学习记忆能力。实验结束后取各组大脑对其海马区采用HE染色观察其海马区细胞损伤程度,并测定脑组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(MDA)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)的活性。结果表明,与模型组相比,FGF-21能显著缩短D-半乳糖衰老小鼠在水迷宫中到达终点的时间(P<0.01,P<0.05)、降低碰撞盲端的次数(P<0.01,P<0.05)、延长小鼠跳台实验的潜伏期(P<0.05)及降低错误次数(P<0.01,P<0.05)。HE染色结果显示,FGF-21能明显降低大脑海马区细胞损伤情况。FGF-21能降低衰老模型小鼠脑组织ROS(P<0.01,P<0.05)和MDA(P<0.01,P<0.05)的含量,提高SOD、GPx、CAT和T-AOC的活性,且呈剂量依赖性。结果表明,FGF-21能够改善D-半乳糖衰老模型小鼠的学习记忆能力,提高脑组织的抗氧化能力,具有一定的延缓脑衰老的作用。
- 于引航任桂萍刘要南曲素素白福良张童王文飞田贵游叶贤龙李德山
- 关键词：衰老抗氧化学习记忆能力半乳糖
- 错配PCR技术提高抗hIL17A单链抗体亲和力的研究被引量：5
- 2012年
- 目的:通过错配PCR技术提高1株人源化抗hIL17A单链抗体(scFv)的亲和力,为进一步开发治疗类风湿性关节炎(RA)的人源化抗体药物奠定基础。方法:本研究采用错配PCR和重叠PCR的方法,对抗体的重链、轻链可变区分别随机引入突变,并将细菌内膜展示技术和流式细胞技术(FCM)相结合进行高通量筛选,获得高亲和力突变株。由于hIL17A能刺激HeLa细胞产生白细胞介素IL-6和IL-8,因此scFv突变株经表达纯化后,利用real-time PCR技术在mRNA转录水平上检测其阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力。结果:筛选出5株突变株,经流式细胞仪检测其中有3株亲和力与亲本相比有很大程度的提高,2株与亲本相当,而且所有突变株均保留了亲本与hIL17A的结合能力,经real-time PCR检测证明这5株突变株均有阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力,突变株的亲和力与中和效果成正比。结论:错配PCR技术是抗体体外亲和力提高的一种可行性方法,在保证与抗原结合能力的基础上提高了其亲和力和中和活性。该实验结果为RA的靶向治疗提供了候选药物,而且也为抗体的体外亲和力的提高提供了参考方法。
- 田辉白福良徐黎明王文飞牛泽杉任桂萍李德山
- 关键词：FCMREAL-TIMEPCR单链抗体
