王文豪
- 作品数：13 被引量：42H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 食蟹猴志贺氏菌、沙门氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌多重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2015年
- 根据志贺氏菌属侵袭性质粒抗原H(ipa H)基因、沙门氏菌属特异性基因和小肠结肠炎耶尔森氏菌(ail)毒力基因,分别设计3对特异性引物,通过优化、调整PCR条件,建立了一种能同时检测食蟹猴3种致病菌的多重PCR检测方法。临床初步应用于检测137例食蟹猴肛拭子样品137份,检出志贺氏菌属阳性12株,沙门氏菌属阳性1株,小肠结肠炎耶尔森氏菌阳性1株,与传统细菌培养生化鉴定方法检测结果一致。本试验建立的多重PCR方法具有快速、准确、简便、灵敏、稳定性高等优点,具有较高的实际应用价值,为食蟹猴腹泻病原菌提供了新的快速检测方法。
- 陆红玉罗彬符明泰贺东生王文豪
- 关键词：食蟹猴志贺氏菌沙门氏菌小肠结肠炎耶尔森氏菌多重PCR
- 广东地区5种优势血清型猪大肠杆菌的外膜蛋白型研究被引量：1
- 2012年
- 对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后,选取优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)和O_(107)的8个致病性较强的分离株,采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白(OMP),利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型(Ⅰ～Ⅲ型),其中O_(26)、O_(101)、O_(107)型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成,为OMP-Ⅰ型;O_(60)、O_(101)、O_(107)型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成,为OMP-Ⅱ型;O_9型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成,为OMP-Ⅲ型。这表明,优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)、O_(107)的分离株OMP型不单一;同一血清型的分离株,存在不同OMP型;而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。
- 张丹琳王文豪贺东生
- 关键词：大肠杆菌O血清型外膜蛋白
- 表达Omp1和Omp2的猪大肠埃希菌融合菌株R2的构建
- 2013年
- 为了构建猪大肠埃希菌融合菌株,在药敏试验和MIC试验的基础上,对猪大肠埃希菌HY2株(O101,Omp1)和GXA1株(O107,Omp2)进行交叉耐药培育。以HY2(O101,Omp1,Ami r,Czl s)和GXA1(O107,Omp2,Czl r,Ami s)为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备两亲本菌株原生质体,通过聚乙二醇(PEG)助融,进行原生质体融合,得到3株双耐药融合菌株。结果表明,猪大肠埃希菌原生质体制备和再生的最适条件是:溶菌酶浓度为200U/mL,作用时间为25min。筛选得到3株融合菌株R1、R2、R3,均可凝集两亲本的O抗原,其中,R2凝集性更好更稳定。进一步结合SDS-PAGE分析,显示融合菌株R2能较好的表达两亲本菌株形状,经多次传代仍能够稳定遗传。
- 张丹琳王文豪张显浩陈瑞爱苏丹萍贺东生
- 关键词：大肠埃希菌外膜蛋白型原生质体融合
- 猪大肠杆菌融合菌株R2灭活苗的研制及免疫试验被引量：1
- 2014年
- 为了研究猪大肠杆菌融合菌株R2蜂胶灭活苗的免疫效果,试验以猪大肠杆菌原生质体融合菌株R2为菌种制备蜂胶灭活苗,采用肌肉注射方式免疫SPF小白鼠,以间接ELISA方法检测血清中IgG抗体水平,同时用2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株与免疫血清做玻片凝集试验,并对小白鼠进行攻毒保护试验。结果表明:该疫苗免疫性能较好,在免疫小白鼠后的第28,35天左右机体内的抗体水平达到最高值,融合菌株R2蜂胶灭活苗可对2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株的攻毒试验产生保护,而且安全性能良好,是一种效果较好的菌苗。说明融合菌株R2蜂胶灭活苗作为一种新型疫苗防控猪大肠杆菌病将成为一种可能。
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- 关键词：猪大肠杆菌灭活苗免疫原性
- 副猪嗜血杆菌玻板凝集抗原的研制被引量：2
- 2012年
- 副猪嗜血杆菌病是目前危害猪场的主要细菌病之一，给我国养猪业带来巨大的经济损失。而副猪嗜血杆菌十分娇嫩，对营养的要求苛刻，生长需要NAD，且常与其他病原菌混合感染（Barbara等，2008），故不易获得纯培养，给确诊带来困难。为了快速诊断副猪嗜血杆菌病，本试验于2011年3月在华南农业大学兽医学院传染病教研室（广东省人畜共患病重点实验室）研制了副猪嗜血杆菌玻板凝集抗原，建立了检测副猪嗜血杆菌血清抗体的微量玻板凝集方法，现将试验介绍如下。
- 王文豪章胜张丹琳苏丹萍贺东生
- 关键词：副猪嗜血杆菌病凝集抗原人畜共患病经济损失
- 副猪嗜血杆菌弱毒疫苗的研制被引量：3
- 2012年
- 根据本教研室分离得到的副猪嗜血杆菌,选择毒力强、生长性能和毒力都稳定的菌株作为原始毒株。通过化学诱导剂诱导原始菌株发生突变,再经过毒力试验,挑选出毒力有明显减弱的菌株。安全性试验发现,这些减毒菌株具有较高的安全性,为弱毒疫苗的研制奠定基础。
- 苏丹萍王文豪章胜张丹琳张显浩陈瑞爱贺东生
- 关键词：副猪嗜血杆菌化学诱导弱毒疫苗
- 猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白亚单位疫苗免疫效果观察被引量：2
- 2013年
- 用超声波破碎并采用N-十二烷基肌氨酸钠进行猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白提取,提取物经SDS-PAGE电泳检测后制备成疫苗,以肌肉注射方式免疫SPF小鼠,于免疫前及免疫后每隔1周分别收集血清。以间接ELISA的方法检测血清中IgG抗体水平,同时用不同血清型大肠埃希菌菌株与免疫血清做玻板凝集试验和攻毒保护试验。结果表明,在免疫小鼠后的第28天左右机体内的抗体水平达到最高值,免疫血清能够与不同菌株发生凝集反应且不同菌株对小鼠的攻毒都具有免疫保护力,说明外膜蛋白不仅具有一定的免疫原性而且对不同菌株具有交叉免疫保护力,因此外膜蛋白亚单位疫苗作为一种新型疫苗可望适用于防控猪大肠杆菌病。
- 王文豪张丹琳张显浩陈瑞爱苏丹萍贺东生
- 关键词：大肠埃希菌外膜蛋白亚单位疫苗
- 广东省猪大肠杆菌优势血清型O_(107)外膜蛋白的提取被引量：2
- 2012年
- 实验室从广东省鉴定的猪大肠杆菌优势血清型O_(107)中,选出一株有致病性菌株。通过细菌培养、超声波裂解、N—十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取出大肠杆菌O_(107)的外膜蛋白。提取物经SDS—PAGE电泳检测后发现蛋白条带大小与预期的实验结果相同。
- 王文豪张丹琳苏丹萍贺东生
- 关键词：猪大肠杆菌外膜蛋白
- 间接ELISA法测定猪源大肠杆菌外膜蛋白抗体方法的建立被引量：1
- 2013年
- 大肠杆菌是条件性致病菌，是引起仔猪黄痢、白痢和成年猪水肿病的重要病原。大肠杆菌病对规模化猪场哺乳仔猪的危害较严重，给养猪业造成了严重经济损失。
- 张丹琳王文豪张显浩陈瑞爱苏丹萍贺东生
- 关键词：猪源大肠杆菌间接ELISA法抗体方法外膜蛋白仔猪黄痢
- 副猪嗜血杆菌广东流行株的分离鉴定与基因分析被引量：3
- 2011年
- 本研究从广东省各个地区送检病料中成功分离鉴定了4株副猪嗜血杆菌,并且针对副猪嗜血杆菌16SrRNA基因特异性进行PCR检测和基因测序同源性分析,通过GenBank联机比对分析,所分离的菌株与国内外菌株16SrRNA序列同源性在98.2%以上,分离菌株之间同源性在99.6%～100%之间,证明了所暴发的菌株是副猪嗜血杆菌。
- 章胜王文豪苏丹萍贺东生
- 关键词：副猪嗜血杆菌PCR同源性
