王宁宁
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响
- 目的:观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法:构建针对Bcl-2基因的干扰质粒PGPH 1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞...
- 沈方臻王宁宁林明刚
- 靶向bcl-2基因短发卡RNA干扰真核质粒表达稳定株筛选和建立被引量：3
- 2010年
- 目的构建针对bcl-2基因的短发卡RNA(shRNA)干扰真核质粒表达载体,转染到bcl-2基因高表达的胃癌细胞株SGC-7901中,并筛选出稳定低表达bcl-2基因的细胞株。方法针对bcl-2基因的mRNA序列设计、合成4对寡核苷酸序列,插入质粒载体pGPH1/GFP/Neo中,经脂质体介导转染SGC-7901细胞。RT-PCR检测bcl-2基因在mRNA水平的变化,MTT法检测bcl-2基因沉默后胃癌SGC-7901细胞的增殖情况。基因沉默效果最好的一组,经G418筛选以得到稳定表达株。结果与对照组相比,转染成功后的细胞bcl-2基因在mRNA水平均显著下降,细胞增殖速度明显降低(t=2.41,P<0.05);并筛选出稳定表达shRNA2质粒的阳性克隆。结论本研究成功利用针对bcl-2基因的shRNA质粒载体筛选出稳定低表达bcl-2基因的SGC-7901细胞,为胃癌的基因治疗研究奠定了基础。
- 沈方臻林明刚肖文静王宁宁
- 关键词：基因BCL-2RNA干扰质粒
- Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响。方法构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl-2shRNA/SGC-7901(C组)、照射/Bcl-2shRNA/SGC-7901(D组)。CCK-8检测细胞增殖,AO/PE观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot测定Bcl-2蛋白表达量的改变。结果 Bcl-2shRNA、照射均可抑制Bcl-2蛋白表达,且二者有协同作用,差异有统计学意义(P<0.05);D组细胞生长慢于B组、C组细胞,B、C、D组细胞增殖抑制率分别为(27.00±5.27)%、(30.10±6.49)%、(98.40±11.35)%。A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(3.80±0.22)%、(20.80±4.15)%、(23.20±4.34)%、(92.90±25.90)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Bcl-2基因siRNA干扰联合γ线照射可协同抑制SGC-7901细胞中Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡。
- 王宁宁沈方臻林明刚于丽姚如永
- 关键词：B细胞淋巴瘤/白血病-2细胞凋亡
- 稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响。方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照。RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P<0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P<0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P<0.05。结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性。
- 沈方臻朱静娟林明刚肖文静王宁宁
- 关键词：转染基因,BCL-2药物耐受性
