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重组人干扰素alpha1b注射液: 杨大军刘金毅吴美英刘永全牛晓霞任韧孙俭波程永庆; 重组人干扰素α1b是我国首创的新药。与进口或仿制的其他类型干扰素比较，其中和抗体发生率低，毒副作用小，疗效明显。除作为治疗乙肝和丙肝的首推药物外，α1b型干扰素还对尖锐湿疣、慢性宫颈炎、毛细胞白血病、黑色素瘤、肾癌、膀胱...; 关键词：; 关键词：注射液重组人干扰素Α1B

干扰素α-2bHis^89／His^159的分子获得及性能分析被引量：1: 2008年; 目的:通过结构分析和定点突变,构建干扰素α-2bHis89/His159(IFNα-2bHis89/His159),以期获得高性能干扰素突变体。方法:采用PCR体外定点突变技术,使干扰素α-2b基因的第89位密码子由编码酪氨酸的TAC突变为编码组氨酸的CAC,第159位密码子由编码谷氨酸的GAA突变为编码组氨酸的CAC。将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。表达的IFNα-2bHis89/His159经包涵体变性、复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。以SD大鼠进行初步药代动力学研究。结果:IFNα-2bHis89/His159主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上。纯化后,IFNα-2bHis89/His159的纯度大于95%,比活性大于2.8×108IU/mg。相对于IFNα-2b较短的消除半衰期,IFNα-2bHis89/His159的消除半衰期得到延长,为2.34±0.27h。结论:构建了IFNα-2bHis89/His159的重组表达载体,并成功地在大肠杆菌中实现了高效表达,建立了IFNα-2bHis89/His159的纯化工艺,获得了体外活性增高并且体内稳定性得到改善的新型干扰素α-2b突变体。; 王秀刘金毅牛晓霞孙玉军金颖彭秀娟王艳; 关键词：干扰素突变体蛋白质纯化药物代谢动力学

一种重组人可溶性凋亡素2配体的构建与纯化工艺: 本发明涉及一种重组人可溶性凋亡素2配体(rhsApo－2L)的制备方法。rhsApo－2L与hsApo－2L相比，其分子N端多了12个氨基酸，其中包括6个组氨酸，以方便利用镍离子柱进行纯化。本发明利用RT－PCR技术，扩...; 刘永全刘红燕牛晓霞; 文献传递

双抗体夹心ELISA定量检测重组人干扰素αlb方法的建立与评价被引量：1: 2012年; 目的建立双抗体夹心ELISA法定量检测重组人干扰素αlb的方法。方法筛选具有不同抗原结合位点的抗重组人干扰素αlb单克隆抗体，分别作为包被抗体和辣根过氧化酶标记抗体，建立双抗体夹心ELISA法定量检测不同批次重组人干扰索仅1b含量，评价该法的检出限、精确度、重复性、特异性。结果所建立的ELISA最低检出限为10ng／ml，检测线性范围10—100ng／ml，R2=0．992，测定值与实际值偏差〉5％，板间变异系数均小于10％。结论该方法灵敏度高，特异性强，准确性和重复性好，可用于重组人干扰素αlb成品的定量检测。; 吴美英艾艳萍曹艳吴双牛晓霞程永庆; 关键词：干扰素Α 酶联免疫吸附测定

生物制品用内包材微生物限度检测方法的验证: 2015年; 目的建立生物制品用内包材（中性硼硅玻璃管制注射剂瓶、药用卤化丁基橡胶塞和抗生素瓶用铝塑组合盖）微生物限度检查方法,并进行验证。方法采用薄膜过滤法检查上述3种内包材的微生物限度,并按照验证试验方法,在供试品中加入5种标准菌,测定其回收率。结果金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉5种标准菌在上述3种内包材供试品溶液中的平均回收率均为70%-110%,符合公示的2015年版药典中要求的50%-200%的标准。结论薄膜过滤法适用于上述3种内包材的微生物限度检验。; 牛晓霞崔艳文吴美英; 关键词：微生物限度

抗人凋亡素2配体的单克隆抗体: 本发明涉及抗人凋亡素2配体(human apoptosis 2ligand，简称hApo－2L)的单克隆抗体制备及其应用。经抗原免疫小鼠，收集致敏的小鼠B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤融合，利用ELISA方法判定阳性克隆，建立分泌...; 牛晓霞刘金毅孙俭波程永庆; 文献传递

集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯被引量：5: 2006年; 目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(PEG)修饰的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ(IFN-Con-m1)基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导后,表达的IFN-Con-m2经包涵体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果:IFN-Con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFN-Con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108IU/mg。结论:构建了IFN-Con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFN-Con-m2,建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。; 牛晓霞刘金毅杨轶吴晓东; 关键词：定点突变纯化

重组人淋巴毒素α缺失体的表达、纯化及鉴定被引量：3: 2004年; 目的 :构建重组人淋巴毒素α缺失体 (rhLT αΔN2 7)的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达 ,建立纯化rhLT αΔN2 7的工艺。方法 :从Jurkat细胞中提取总RNA ,用RT PCR扩增rhLT αΔN2 7基因 ,并插入原核表达载体 pET 2 3b中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,用IPTG诱导rhLT αΔN2 7表达。包涵体经洗涤和复性后 ,用DEAESepharoseFF和Phenyl SepharoseFF纯化。结果 :rhLT αΔN2 7以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 %以上。纯化后 ,rhLT αΔN2 7的纯度达 99% ,比活性高于 8× 10 7U/mg。纯化样品的相对分子质量 (Mr)、等电点 ,以及N端序列等其他理化性质均同预计的结果相符。结论 :构建了rhLT αΔN2 7的表达载体 ,并成功地在大肠杆菌中进行了表达 ,建立了rhLT αΔN2; 刘永全李道锋牛晓霞刘金毅; 关键词：纯化

重组人干扰素α_1b层析工艺中内毒素的去除被引量：1: 2015年; 目的通过检测评价重组人干扰素α1b各步层析工艺中内毒素的去除情况,为工艺验证提供参考。方法重组人干扰素α1b层析工艺采用DEAE Sepharose FF离子交换层析、单抗Sepharose-4B亲和层析和Sephacry-S100凝胶过滤层析。采用鲎试剂法检测层析各阶段产物中的内毒素含量,计算内毒素去除率。结果每步层析均有去除内毒素的作用,以亲和层析去除内毒素作用最强。最终所得蛋白的内毒素含量降至0.7EU/1mg以下,总去除率达到99.9999%。结论生产重组人干扰素α1b所用分离纯化层析技术在纯化蛋白的同时能有效去除产品中的内毒素,所得最终产品的内毒素含量远低于药典对注射剂的内毒素含量要求。; 牛晓霞曹艳吴美英; 关键词：重组人干扰素Α1B 柱层析内毒素

一种检测人凋亡素2配体生物活性的方法: 本发明涉及一种检测人凋亡素2配体(hApo－2L)生物活性的方法。本发明采用小鼠成纤维肉瘤细胞系L929进行测活，并在测活过程中加入放线菌素D或放线菌酮。利用本发明检测到的hApo－2L的半致死剂量在1－5ng/ml范围...; 牛晓霞刘永全刘红燕; 文献传递

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牛晓霞