沈海涛
- 作品数：51 被引量：83H指数：5
- 供职机构：石河子大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 海岛棉CAD和CAD-Like基因家族的鉴定、表达及其对大丽轮枝菌的响应被引量：1
- 2023年
- 【目的】肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素合成途径中的关键酶,在增强植物机械强度、抵御病原菌入侵等方面发挥重要作用。鉴定海岛棉GbCAD、GbCAD-LIKE(GbCADL)基因家族成员,并对其表达特征及其在黄萎病抗性中的作用进行分析,为棉花抗黄萎病机制的解析及抗病育种提供参考。【方法】利用生物信息学方法对海岛棉GbCAD、GbCADL基因家族成员进行鉴定,并对其染色体定位、系统发育关系、基因结构、启动子顺式元件的预测进行系统分析。通过获得公开释放的转录组数据和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析GbCAD基因及GbCADL基因的表达特征。利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术对GbCAD基因及GbCADL基因进行功能分析。【结果】从海岛棉中鉴定到25个GbCAD基因(分布在10条染色体)和34个GbCADL基因(分布在17条染色体)。GbCAD基因分为3个亚组,GbCADL基因分为4个亚组,同一个组内基因含有相似的外显子-内含子结构和保守结构域。GbCAD基因和GbCADL基因具有不同的转录表达特征,其启动子中含有多种激素和胁迫响应元件。转录组数据和qRT-PCR显示,GbCAD10A/D、GbCADL4A/D、GbCADL5A/D、GbCADL6A/D、GbCADL7A/D的表达受大丽轮枝菌诱导,尤其是GbCAD10A/D、GbCADL4A/D、GbCADL6A/D、GbCADL7A/D的表达在大丽轮枝菌处理后显著增加。利用VIGS技术,将显著受大丽轮枝菌诱导表达的GbCAD10A/D、GbCADL4A/D、GbCADL6A/D、GbCADL7A/D分别在棉花中沉默,分析VIGS株系对大丽轮枝菌抗性的变化。结果显示,与对照植株相比,VIGS株系对大丽轮枝菌的抗性显著降低。二氨基联苯胺(DAB)染色结果显示,在未受到黄萎病侵染时,VIGS植株和对照植株的染色程度无显著差异;在大丽轮枝菌处理6 h后,与对照植株相比,沉默株系GbCAD10A/D、GbCADL4A/D、GbCADL6A/D、GbCADL7A/D均表现出较深的着色,表明在沉默株系中有较高的活性氧累积。茎的切片结果显示,大丽�
- 张钰佳崔凯文段力升曹爱萍谢全亮沈海涛沈海涛李鸿彬
- 关键词：海岛棉肉桂醇脱氢酶基因家族基因沉默大丽轮枝菌
- 甘蓝型油菜下胚轴和带柄子叶再生体系研究被引量：2
- 2013年
- 以甘蓝型油菜野油19号的下胚轴和带柄子叶为外植体,研究其下胚轴和带柄子叶在不同浓度激素配比下的分化率及再生频率的变化。该品系的油菜下胚轴和带柄子叶在1.5 mg/L的2,4-D中预培养4 d后,转入分化培养基中,其愈伤组织形成早,发生快,再生频率和分化频率均较高。其中,下胚轴转入MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中的分化率和再生频率最高,再生频率达到86.67%;带柄子叶外植体的再生频率要比下胚轴的再生频率低,在MS+4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA的分化培养基中芽的再生频率为46.67%。本研究初步建立了甘蓝型油菜野油19号的高频率再生体系。
- 郝晓云沈海涛李鸿彬
- 关键词：甘蓝型油菜下胚轴带柄子叶
- 通过pR1aS导肽提高植物中绿色荧光蛋白的激发强度
- 2010年
- 绿色荧光蛋白在植物细胞胞质表达中对转化植物细胞的再生存在不利的影响,为增强绿色荧光蛋白在植物细胞中的表达,在mgfp的5'端连接了pR1aS信号肽序列,同时在3'末端引入滞留在内质网中的特异序列KDEL,成功构建了植物表达载体pBLG-pR1aS-gfp,经转基因烟草表达分析,结果表明:转化体植株显著增加了绿色荧光蛋白在烟草中的表达,同时消除了绿色荧光蛋白对植物潜在的光毒害。这为植物转基因转化频率的研究和转基因植物安全性评价提供了一种有利的工具。
- 王辉李小红王爱英沈海涛祝建波
- 关键词：绿色荧光蛋白烟草
- 拟南芥AtSuc3和AtSuc4基因的克隆及双价植物表达载体的构建
- 2010年
- 蔗糖转运蛋白在调节同化产物的分配过程中起重要作用。为了分析拟南芥蔗糖转运蛋白基因AtSuc3、At-Suc4的功能和协同作用,以哥伦比亚型拟南芥为材料,通过RT-PCR技术克隆了蔗糖转运蛋白基因(sucrose/H+cotransporters,SUCs)AtSuc3和AtSuc4的cDNA,利用甘薯贮藏蛋白基因(sporamin)的根部特异性启动子,构建了含有含有AtSuc3和AtSuc4 cDNA的单价植物表达载体pBI2301-q3-s3、pBI2301-q4-s4和双价植物表达载体pBI2301-q3-s3-q4-s4,为进一步分析该植物表达载体在调控库源关系中的作用以及在经济作物中的应用奠定基础。
- 张彦伟祝建波沈海涛王爱英向本春
- 关键词：蔗糖转运蛋白植物表达载体
- 苗期乌拉尔甘草GuHMGR基因表达特性与甘草酸合成和积累关系的研究被引量：4
- 2021年
- 甘草酸是药用甘草(Glycyrrhiza uralensis)最主要的活性成分之一,其含量也是评价甘草品质的主要指标。通过分析苗期乌拉尔甘草不同部位的甘草酸含量及其合成途径中关键基因GuHMGR表达特性和结构信息,了解其在甘草酸合成和积累作用。结果显示,甘草酸主要在苗期乌拉尔甘草地下部分中积累,而甘草酸合成前体甘草次酸并不会大量积累,说明乌拉尔甘草中甘草次酸合成后迅速转化为甘草酸。GuHMGR启动子调控元件分析显示GuHMGR1、GuHMGR3、GuHMGR4基因主要受逆境胁迫和光诱导调控,而GuHMGR2基因的启动子可能因缺少光响应调控元件导致其主要在地下部分表达。GuHMGR基因家族中GuHMGR1在地下部分中的表达量显著高于其他三个基因, GuHMGR1基因可能是甘草酸地下部分中合成的主效基因;而且,不同的GuHMGR基因在地上和地下部分中表达量差异较大,其蛋白结构、启动子的调控元件也并不相同,故推测不同GuHMGR基因在乌拉尔甘草中承担不同的功能。
- 毕权姚华何大俊李国治沈海涛
- 关键词：乌拉尔甘草甘草酸启动子
- 一种利用蜜源植物防止转基因棉花基因漂移的方法
- 本方法涉及一种简单、易行、可操作性强的测试转基因棉花花粉基因漂移距离的一种有效方法。采用生产上用的棉花不育系种植于转基因棉花四周的不同位置，作为转基因棉花的花粉漂移区。如果不育系棉花正常座铃结籽，就可基本确认是异交，然后...
- 王爱英祝建波宋丽娟冯玉杰沈海涛刘红玲
- 文献传递
- 甜叶菊叶片高频再生体系的建立被引量：5
- 2013年
- 以"守田3号"甜叶菊叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、不定芽继代培养和生根的影响。结果表明:用0.1%的升汞处理3min为最佳消毒方法,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L IAA+300mg/L水解酪蛋白,平均诱导率为80%;最佳不定芽继代培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+0.2mg/L GA3+4.0mg/L KT;最佳生根培养基为1/2MS+0.2mg/L IAA,生根率为100%,所获得的再生苗生长健壮且移栽后成活率高,最终建立了甜叶菊最佳的再生体系。
- 蔡永智王爱英沈海涛祝建波
- 关键词：甜叶菊叶片
- 新疆甜瓜高效再生体系的建立及NPR1/HRP双价抗病基因转化被引量：3
- 2011年
- 以厚皮甜瓜5d龄无菌苗子叶为外植体,MS和1/2MS为基本培养基,研究了添加6-BA、IAA和卡那霉素不同浓度,进行甜瓜再生体系与根癌农杆菌介导的转化体系的建立。结果表明:甜瓜子叶最适宜的不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.3mg/L,芽伸长培养基为MS+6-BA 0.75mg/L+IAA 0.3mg/L,生根培养基为1/2MS+IAA 0.3mg/L,适宜的转化条件为外植体预培养48h,农杆菌菌液浓度为OD_(600)=0.3～0.4,侵染时间为15min,22℃暗培养48～55h。经75mg/L的卡那霉素筛选,共获得再生甜瓜幼苗21株,其中8棵经PCR鉴定证明NPR1/HRP双价抗病基因已经整合到甜瓜基因组中,即转化率为38%。
- 冯玉杰王爱英沈海涛祝建波
- 关键词：甜瓜农杆菌介导
- 一种乌拉尔甘草高效种植方法
- 本发明提供了一种乌拉尔甘草种植方法，所述方法包括播种前管理、苗期管理、产量形成期管理和品质提升期管理，其中所述苗期管理包括蹲苗处理，以提升甘草根部植土深度，所述蹲苗处理为进行水分胁迫，使土壤中的相对含水量自然降低至30‑...
- 沈海涛姚华李鸿彬冯江华李国治
- 天山茶藨茎黄酮苷元提取工艺优化及其生物活性被引量：2
- 2021年
- 为了优化天山茶藨茎5种黄酮苷元(木犀草素、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、芹菜素)的酸水解提取工艺,评价其体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性,本文利用UPLC-MS/MS法测定天山茶藨茎5种黄酮苷元的提取率,通过单因素实验和正交试验优化天山茶藨茎黄酮苷元酸水解提取工艺。利用DPPH、ABTS自由基清除实验测定天山茶藨茎提取物及5种黄酮苷元的抗氧化活性,并测定了其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,5种黄酮苷元的检出限、定量限分别在0.8~1.6、2.9~5.4μg/L,在3.2~207.0μg/L范围内具有良好的线性关系(R 2≥0.9962),方法的稳定性、精密度和重复性良好(RSD≤4.4%)。确定最佳酸水解提取工艺为:90%甲醇溶液(含5%盐酸)、提取温度:70℃、提取时间:100 min,该条件下,总黄酮苷元提取率为4.06 mg/g,RSD<5%,表明正交试验优化的提取条件稳定可行。天山茶藨茎提取物及5种黄酮苷元均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性,其中甲醇盐酸提取物与5种黄酮苷元的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照阿卡波糖(IC 50:53.84±2.41 mg/L),槲皮素对DPPH自由基的清除活性最好(IC 50:(2.94±0.18)mg/L),木犀草素、山奈酚对ABTS自由基清除活性较好(IC 50分别为(5.34±0.10)、(5.55±0.17)mg/L),它们的抗氧化活性高于阳性对照V C。本研究建立的UPLC-MS/MS方法灵敏、精确、高效,可以对天山茶藨茎5种黄酮苷元化合物同时进行定量分析。优化的酸水解提取工艺能有效提高天山茶藨茎黄酮苷元的提取率。
- 逯红林赵亚芸王强沈海涛徐文斌何大俊
- 关键词：Α-葡萄糖苷酶抗氧化
