毕利军
- 作品数：49 被引量：105H指数：6
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 错配修复蛋白MutS的新功能位点被引量：2
- 2011年
- MutS蛋白是DNA错配修复系统的关键成份,其突变会使细胞失去正常的错配修复功能,导致基因组不稳定和细胞异常.本研究利用易错PCR随机突变和利福平筛选,建立了研究MutS蛋白的新方法,发现影响MutS错配修复功能的新位点,并利用表面等离子共振、分子筛、farwestern等方法对错配修复功能缺陷的突变体进行了活性测定和分析;通过揭示MutS与错配修复功能相关的新信息,为MutS同源物多态性的研究及人源MutS同源物突变与癌症相关的研究提供新的线索.
- 钟天映毕利军张先恩
- 关键词：DNA错配修复MUTS随机突变
- 一种基于大肠杆菌碱性磷酸酶的蛋白激酶检测的方法
- 本发明公开了一种基于大肠杆菌碱性磷酸酶的蛋白激酶检测的方法。根据大肠杆菌碱性磷酸酶活性中心的结构特征，设计并构建大肠杆菌碱性磷酸酶突变体，屏蔽其催化能力，保留和磷酸化底物结合的能力，使其成为一种磷酸化蛋白(短肽)通用结合...
- 张先恩周亚凤李永进李炜毕利军张治平
- 文献传递
- MutL融合蛋白的高效表达及其伴侣功能研究(英文)被引量：1
- 2004年
- DNA错配修复蛋白MutL和其它的修复蛋白相互作用来共同完成大肠杆菌甲基介导的错配修复过程 .为研究修复蛋白MutL的体外生物功能构建了融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutL(THLL)的表达载体并使其高效表达及易于纯化 .mutL基因片段是以E .coliK 12基因组为模板经PCR扩增获得 ,并通过基因的体外拼接成功构建了融合蛋白THLL表达载体pET32a linkerpeptide mutL .重组菌株E .coliAD4 94 (DE3) pET32a linkerpeptide mutL经过IPTG的诱导表达了融合蛋白THLL .收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS PAGE分析 ,结果表明有一与预期分子量(84kD)相应的诱导表达条带出现 ,其表达量约占全细胞蛋白的 30 %且以可溶形式存在 .利用固定化金属离子 (Ni2 +)配体亲和层析柱纯化融合蛋白THLL ,其纯度达到 90 % .通过非变性凝胶电泳分析 ,对融合蛋白THLL在DNA错配修复过程中的分子伴侣生物功能进行了系统研究 .结果表明 ,THLL能增加融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutS (THLS)与含有错配碱基DNA双链的结合 。
- 毕利军周亚凤张先恩张治平张成刚Anthony E.G.CASS
- 关键词：基因PCR连接肽
- 融合标签技术及其应用被引量：23
- 2006年
- 融合标签最初是作为一种有效的工具用于纯化重组蛋白质,近几年的研究表明,融合标签的作用并不局限于此。本文综述了融合标签技术的发展及在生命科学研究中的各种应用,包括重组蛋白质的纯化;目的蛋白质的检测、定向固定;体内生物事件的可视化;提高重组蛋白质的产量;增强重组蛋白质的可溶性及稳定性。
- 李永进陈媛媛毕利军
- 关键词：融合标签重组蛋白质可视化可溶性
- 链霉亲和素包被芯片表面的配基的可逆固定
- 针对于BIAcore生物传感器中链霉亲和素包被的芯片表面(SA－芯片)，本技术公开了一种新的配基固定模式。传统的用于SA－芯片的配基是利用了生物素与链霉亲和素之间的特异的相互作用，由于两者之间非常强的作用力，使得SA－芯...
- 张先恩李永进毕利军周亚凤张吉斌陈媛媛李炜张治平
- 文献传递
- 基于表面等离子共振的新型生物传感技术及其在生命科学中的应用被引量：13
- 2006年
- 生物分子的活性功能是通过分子之间的相互作用来体现的,了解这种相互作用的过程对于生命科学领域的研究及揭示生命发生发展的基本机制具有重要的意义。基于表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)的新型生物传感技术——BIAcore(biomolecular interaction analysis)是研究生物分子相互作用的理想工具。它可以实时跟踪检测生物分子间结合、解离的整个过程,已被广泛应用于蛋白质组学、信号转导、新药开发、遗传学分析和食品检测等领域,并且显示出广阔的应用前景。
- 陈媛媛李永进毕利军
- 关键词：生物分子相互作用表面等离子共振信号转导新药开发
- DNA错配修复与癌症的发生及治疗被引量：9
- 2006年
- DNA错配修复是细胞复制后的一种修复机制,具有维持DNA复制保真度,控制基因变异的作用。DNA错配修复缺陷使整个基因组不稳定,最终会导致肿瘤和癌症的发生。DNA错配修复系统不仅通过矫正在DNA重组和复制过程中产生的碱基错配而保持基因组的稳定,而且通过诱导DNA损伤细胞的凋亡而消除由突变细胞生长形成的癌变。错配修复缺陷细胞的抗药性也引起了癌症化疗研究方面的关注。大多数情况下,错配修复健全型细胞对肿瘤化疗药物敏感,而错配修复缺陷细胞却有较高的抗性。DNA错配修复系统通过修复和诱导细胞凋亡维护基因组稳定的功能,显示了错配修复途径在癌症生物学和分子医学中的重要性。
- 毕利军周亚凤张先恩
- 关键词：DNA错配修复基因变异癌症细胞凋亡抗药性
- 利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白
- 2015年
- Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxo G)外,Mut M在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与Mut M相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、Rps C、Uvr A与Mut M的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现Mut M相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究Mut M在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点.
- 范尚华周盈张泓泰Joy Fleming喻子牛张先恩毕利军
- 关键词：耻垢分枝杆菌碱基切除修复串联亲和纯化
- DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定被引量：2
- 2002年
- 将DNA错配修复基因mutS(2 5 6kb)克隆于分泌型原核表达载体pET32a(+)上 ,以N端融合 6个组氨酸的形式在E .coliAD494(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDS PAGE分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条带 ,其表达量占全菌蛋白质的 35 %左右 ,且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子 (Ni2 +)配体亲和层析柱纯化目的蛋白 ,其纯度为 90 %以上。与含有错配碱基DNA双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别。
- 毕利军周亚凤邓教宇张先恩张成刚AnthonyE.G.Cass
- 关键词：DNA错配修复基因MUTS活性鉴定纯化
- DNA错配修复与癌症
- ＜正＞ 大量研究表明,癌症是由基因突变引起的,基因突变可由致癌剂引起,也可由DNA代谢过程中产生的碱基错配引起。为确保遗传物质的完整和稳定,细胞有许多防止基因突变的系统,其中包括切除修复、损伤碱基的直接修复、重组修复和错...
- 毕利军张先恩周亚凤
- 文献传递
