林烨
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中华眼镜蛇α-神经毒的纯化及其在烟碱型乙酰胆碱受体纯化上的应用被引量：1
- 2012年
- 目的从中华眼镜蛇粗毒中分离纯化其α-神经毒组分,并将此α-神经毒作为亲和层析的配基纯化烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)。方法采用凝胶过滤层析、阳离子交换层析逐步分离纯化中华眼镜蛇粗毒,通过125I-α-银环蛇毒素(αBtx)-nAChR结合抑制实验检测蛋白活性,SDS-PAGE检测蛋白的相对分子质量和纯度;亲和层析纯化nAChR,放射免疫沉淀法测nAChR活性。结果从5g中华眼镜蛇粗毒中共纯化得到约20mg眼镜蛇α-神经毒,该眼镜蛇α-神经毒有一定的125I-αBtx-nAChR结合抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)约为αBtx的28倍。以纯化的α-神经毒制备的亲和介质,可吸附大鼠骨骼肌肌膜提取物中约84%的125I-αBtx结合活性,且此活性可以被0.2mol/L卡巴胆碱洗脱。结论用简单的液相色谱方法可从中华眼镜蛇毒中分离纯化α-神经毒,并且可以以其为配体从大鼠骨骼肌中纯化nAChR。
- 李佳徐江林烨沈佑晓刘毅张芳琳吴兴安徐志凯李柱一
- 关键词：受体
- Th22细胞及相关因子在重症肌无力患者外周血中的表达被引量：6
- 2017年
- 目的研究重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血辅助性T细胞22(T helper 22cells,Th22)和白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)的表达以及两者间的相关性。方法收集25例MG患者和24例健康对照者,其中眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者14例,全身型重症肌无力(general myasthenia gravis,GMG)患者11例。采用流式细胞仪检测MG患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th22细胞的比例,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆IL-22的表达。比较各组间Th22细胞比例和IL-22表达水平差异,以及Th22细胞比例和IL-22表达间的相关性。结果 MG患者PBMC中Th22细胞比例、血浆IL-22表达水平均显著低于健康对照组[(0.60±0.07)%比(0.92±0.09)%,P<0.01;(18.65±1.38)pg/mL比(24.54±1.85)pg/mL,P<0.05];OMG与GMG患者间Th22细胞比例、IL-22表达水平均无统计学差异(均P>0.05);MG患者PBMC中Th22细胞比例与IL-22表达水平间呈中度正相关(r=0.59,P<0.01)。结论 MG患者体内Th22细胞比例及血浆IL-22表达水平减低可能导致免疫功能紊乱进而影响MG的发病。
- 秦航林烨常婷郭鹏李柱一
- 关键词：重症肌无力T淋巴细胞亚群白细胞介素22
- 重组人乙酰胆碱受体α亚单位胞外域在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的获得具有生物学活性的重组人烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α1亚基胞外域(ECD)蛋白。方法从TE761细胞中提取人nAChRα1亚单位全长基因,以PCR法扩增nAChRα1亚基ECD1-216,酶切后装入pcDNA3.1表达载体中,脂质体转染入CHO细胞,分别在转染后6～72 h的7个时间点进行荧光实时定量PCR鉴定ECD基因的表达水平,利用125I标记的银环蛇毒素测定细胞培养上清中ECD蛋白的表达。结果 Hα1-216 PCR后所得708 bp片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与GenBank中人AChRα1序列完全一致。所构建的新载体经酶切鉴定目的基因正确插入,载体构建成功。随着细胞培养时间的延长ECD基因mRNA表达水平逐渐增加,且ECD蛋白表达水平也不断提高。结论在CHO细胞成功表达了具有生物学活性的重组人nAChRα1胞外域蛋白。
- 林烨常婷徐江沈佑晓李佳吴兴安张芳琳徐志凯李柱一
- 关键词：重症肌无力乙酰胆碱受体CHO细胞
