方钟燎 作品数:65 被引量:217 H指数:7 供职机构: 广西壮族自治区疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广西壮族自治区科学研究与技术开发计划 卫生部科学研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
基于丙型肝炎病毒NS5B区的巢式RT-PCR和基因分型的比较研究 被引量:6 2016年 目的研究不同引物组合和病毒载量对丙型肝炎病毒(HCV)RNA逆转录和NS5B区巢式PCR反应效率,以及由于逆转录引物不同对基因分型结果的影响。方法用荧光定量PCR检测病毒载量。分别用Oligo(dT)15和随机引物pd(N)6将HCV RNA逆转录合成cDNA,用针对5’-NTR区的巢式PCR进行检测;分别用针对NS5B区的简单引物和简并引物组合进行巢式PCR,比较各组扩增效率。对NS5B区第2轮PCR产物测序并比较基因分型结果的一致性。结果用Oligo(dT)15引物逆转录和随机引物逆转录合成cDNA,5’-NTR区扩增的阳性率分别为87.5%和98.4%,差异有统计学意义(χ2=17.6,P〈0.001)。用HCV1/HCV2-122S/123A简单引物组合和ENO2/ENO4-NS5S3/NS5A5简并引物组合对Oligo(dT)15逆转录cDNA产物进行NS5B区的巢式PCR扩增,阳性率分别为11.5%和35.4%,差异有统计学意义(χ2=30.7,P〈0.001);用上述两组引物组合对随机引物逆转录cDNA进行NS5B区巢式PCR扩增,其阳性率分别为45.3%和94.3%,差异有统计学意义(χ2=109.1,P〈0.001)。随机引物在不同载量病毒组中的逆转录反应阳性率差异无统计学意义(χ2=2.00,P〉0.05);随机引物配合简并引物组合在不同载量病毒组NS5B区扩增的阳性率差异无统计学意义(χ2=5.18,P〉0.05)。经Oligo(dT)15引物和随机引物合成cDNA,用简并引物组合对NS5B区进行巢式PCR扩增,通过核酸测序确定HCV基因型完全一致。结论使用pd(N)6随机引物进行逆转录,结合ENO2/ENO4-NS5S3/NS5A5简并引物组合可实现对不同载量HCV的基于NS5B区的高效巢式PCR扩增和基因分型。 尹琦 杨庆利 方钟燎 王学燕 李海 陈钦艳 谭超 罗洲关键词:丙型肝炎病毒 RT-PCR 病毒载量 乙肝病毒基因变异与肝癌存在因果关系 方钟燎 王学燕 杨进业 陈钦艳 方孔雄 韦少超 所属科学技术领域、简要背景、主要研究内容、发现点、科学价值、论文专著发表及同行引用评价情况。该研究属于预防医学领域。慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝癌的主要病因,但其致癌机理仍未清楚。横断而研究结果表明HBV核心基因启...关键词:关键词:肝癌防治 乙肝病毒 地理流行病学 广西2005—2014年戊型肝炎流行病学分析 被引量:10 2016年 目的了解广西戊型病毒性肝炎(戊肝)的发病趋势及流行病学特征,为制定防控措施提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法对广西2005—2014年戊肝疫情监测资料进行分析。结果广西2005—2014年戊肝发病率逐年上升,2005年发病率为0.35/10万,2014年上升至3.29/10万,平均发病率1.74/10万。发病率较高的地区为梧州市、玉林市、桂林市、南宁市、防城港市等市。病例主要集中于冬春季(1—5月)。40~60岁病例较多,男女性别比3.01∶1,病例职业构成主要为农民、离退人员、家务及待业、工人等。结论广西2005—2014年戊肝发病率逐年上升,南宁等市是高发区,中老年男性、农民是发病高危人群。应重视戊肝疫情形势,采取以切断传播途径为主的综合防控措施,有效遏制戊肝流行。 谭超 李海 方钟燎 王学燕 陈钦艳 杨庆利关键词:戊型肝炎 流行病学 发病趋势 乙型肝炎病毒基因组前-前-S和前-X区基因分布的研究 被引量:3 2005年 目的 研究不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)前前S和前 X区核苷酸和氨基酸序列分布。方法 应用DNAstar软件中的MegAlign程序分析GenBank登记的35株和3株由本室测定的不同基因型HBV全序列中前- 前-S和前 X区基因分布情况,并用Blast软件对GenBank中5 98株HBV全基因组序列进行前- 前- S和前X区的核苷酸和氨基酸相似性分析。结果 除D基因型外,在各型HBV基因组中均存在前- 前-S区核苷酸序列,但仅在C、F和H型HBV基因组中存在前 -前- S区开放读码框架(ORF)。但前X区核苷酸序列及其ORF仅见于C基因型HBV。在GenBank登记的5 98株不同基因型HBV中,与推导的前-前- S区相似氨基酸序列有36株,而与推导的前X区相似的氨基酸序列有4 7株。结论 前 -前- S区序列存在于除D基因型以外的所有HBV基因型,而前 X区基因仅存在于C基因型HBV基因组中。 段学章 庄辉 杜珩 方钟燎关键词:乙型肝炎病毒 基因组 基因分布 乙肝病毒核心基因启动子双突变(T1762A1764)筛选肝癌高危人群价值的研究 方钟燎 李国坚 董柏青 陈钦艳 王学燕 杨进业 庄辉 方孔雄 黄坚 广西是世界肝癌高发区,手术仍是肝癌主要治疗手段,其存活率取决于早期诊断。因肝癌早期症状隐蔽,大多数病例发现时已进入晚期、失去治疗机会。用AFP和B超对全人群进行肝癌监测可发现早期肝癌,但成本过高,无法实施。先找出肝癌高危...关键词:关键词:肝癌防治 手术治疗 广西乙型肝炎病毒感染及肝功能情况调查 被引量:18 2013年 目的:了解广西乙型肝炎病毒感染及肝功能损害情况,为乙型肝炎防治提供科学依据。方法按现况研究的原理,用三阶抽样法,在广西东、西、南、北、中各选定1个县,然后在每个县选择人口约1000人的自然村,对全人群采取静脉血,用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测HBsAg,用速率法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)。结果调查人群HBsAg阳性率为8.80%(400/4547),男性HBsAg阳性率高于女性(P<0.01),不同年龄组HBsAg阳性率差异有统计学意义(P<0.01),15岁以下年龄组HBsAg阳性率较低(4.79%),15~19岁明显上升,30~34岁达到最高峰(15.97%),35岁以上人群随年龄增加HBsAg阳性率呈下降趋势,但仍处在较高水平。 ALT异常率为9.83%(326/3318),男性ALT异常率高于女性(P<0.01),19岁以前ALT异常率较低,20~69岁一直维持在较高水平,70岁以后开始下降。 HBsAg阳性人群ALT异常率高于HBsAg阴性人群(P<0.01)。结论广西仍是乙型肝炎病毒高流行区,肝功能异常率偏高,应继续加强乙肝疫苗接种,做好肝病防治工作。 陈钦艳 方钟燎 杨益超 蒙晓宇 杨庆利 黎军 林康明关键词:乙型肝炎病毒 乙型肝炎表面抗原 肝功能 丙氨酸氨基转移酶 2011—2021年广西戊型病毒性肝炎流行病学特征分析 2024年 目的分析广西戊型病毒性肝炎(简称戊肝)的发病情况和流行趋势,为制定戊肝防控策略提供依据。方法通过中国疾病预防控制信息系统传染病监测系统,收集发病时间为2011—2021年、现住址为广西的戊肝病例资料,并采用描述流行病学方法对报告病例的时间、地区、人群等分布特征进行分析。结果2011—2021年广西累计报告戊肝病例14699例,年均报告发病率2.75/10万,2020年报告发病率最低,为1.73/10万,2016年报告发病率最高,为3.27/10万。年均报告发病率前5位的地区分别为玉林市(5.22/10万)、防城港市(4.23/10万)、梧州市(3.94/10万)、贵港市(3.93/10万)、桂林市(3.48/10万)。报告病例数最多的月份是3月(1854例,占12.61%),上半年报告病例数(8498例)稍多于下半年(6201例)。男性病例10309例,女性4390例,性别比为2.35∶1;男性、女性的年均报告发病率分别为3.76/10万、1.73/10万。各年龄段均有发病,发病率随年龄的升高呈上升趋势,发病数最多的是50~59岁组(3507例,占23.86%)。职业分布中,农民发病人数最多(9726例,占66.17%)。结论近年来广西戊肝发病率总体呈先上升后下降趋势,玉林等地是高发地区,男性、农民、中老年群体是高发人群。应进一步加强对重点地区和重点人群的监测,积极开展健康宣传,以降低戊肝对群众的危害。 胡莉萍 方钟燎 王学燕 陈钦艳 张陆娟 蒋智华关键词:戊型病毒性肝炎 流行病学特征 基于长期研究队列的广西隆安县乙型肝炎病毒准种研究 被引量:2 2023年 目的明确广西隆安县队列HBsAg无症状携带者感染的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)准种序列长期演化特征。方法收集9名广西隆安县队列HBsAg无症状携带者2004年、2007年、2013年、2019年或2020年4个不同时间点血清样本。酶联免疫吸附测定法检测HBV血清学标志物;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法检测HBV病毒载量;试剂盒提取HBV DNA;PCR法扩增HBV全基因组,进行二代测序;利用Mega等软件对所获得的序列进行生物信息学分析。结果共获得23份血清样本,309条全长基因准种序列,每份标本平均获得(0.18±0.07)G测序数据量。55.55%(5/9)的研究对象携带的HBV毒株基因型在长期进化过程中发生了基因型转换,PreS/S区系统进化树基因分型结果与全基因组分析结果完全一致;发现B/C、I/C重组体;各研究标本的Sn值范围为0~0.37,D值范围为0~0.11;共检出21种特殊单核苷酸/氨基酸突变位点(S区7种,X区2种,PreC区3种,BCP区9种)和6种缺失突变,发现多联突变组合形式,未发现任何耐药突变,77.8%(7/9)研究对象在2004年携带的HBV毒株发生了BCP区nt1762(A→T)/1764(G→A)双突变和PreC区1896位(G→A)点突变,HBV基因可在无抗病毒药物压力下由突变型可恢复为野生型和(或)野生型转变为突变型;HBV基因组进化率为2.03×10^(-5)~3.50×10^(-3)。结论在HBV自然感染进程中,HBV基因型和重组体、准种复杂性和多样性可随时间发生改变;HBV基因突变型和野生型可相互转换,一定程度上降低了利用基因型和相关突变来预测临床结局的价值;隆安县乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)无症状携带者HBV基因组进化率很高。 贾蕙华 陈钦艳 蒋智华 王学燕 张文嘉 TIM J Harrison J BROOKS Jackson LI Wu 方钟燎关键词:乙型肝炎病毒 基因型 准种 基因突变 一种检测乙型肝炎病毒9个基因型的试剂盒及其应用 本发明属于生物技术领域,特别涉及一种检测乙型肝炎病毒9个基因型的试剂盒及其应用,本发明的试剂盒包括:引物、探针、核酸释放试剂、PCR缓冲液、对照品、标准品和内标等物质。利用本试剂盒可以对乙型肝炎病毒9个基因型(A~I)进... 方钟燎 张伟尉 蒋智华乙型肝炎病毒基因突变及基因型与原发性肝细胞癌关系的研究 一、乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变与原发性肝细胞癌(HCC)关系HBV无症状携带者血清采自隆安县;急、慢性乙型肝炎、肝硬化和HCC患者血清采自南宁市各大医院;部分HBV无症状携带者及HCC患者血清采自桂林市各大医院... 方钟燎关键词:乙型肝炎病毒 基因突变 基因型 原发性肝细胞癌