彭程 作品数:22 被引量:71 H指数:6 供职机构: 华中科技大学同济医学院附属协和医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 经济管理 更多>>
阻断Wnt/β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响 被引量:7 2007年 目的:探讨活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法:免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子(T-cellfactor,TCF)依赖的荧光素酶报告质粒(pTOPFLASH)测定HSC-T6细胞内的Wnt/β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Westernblot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原表达变化。结果:HSC-T6细胞的核内有β-catenin的表达,转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达均显著下降(P<0.05)。结论:活化的HSC中存在Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制HSC的活化。 翁志宏 雷延昌 彭程 张淑玲关键词:肝硬化 肝星状细胞 信号通路 APOBEC3G在慢性乙型肝炎、肝癌组织中的表达及与HBsAg、HBcAg的关系 被引量:1 2008年 目的探讨APOBEC3G在正常对照、慢性乙肝患者肝脏组织及肝癌组织中的表达情况,以及在慢性肝炎组织中与HBsAg、HBcAg表达的关系。方法收集正常对照肝组织9例、慢性肝炎肝脏组织37例,以及肝癌组织13例,运用免疫组织化学染色的方法检测APOBEC3G、HBsAg、HBcAg的表达。结果与正常肝脏相比,慢性乙肝肝炎患者肝脏组织中APOBEC3G的表达增强,差异具有显著性(P<0.05),主要定位于HBV感染的肝细胞及汇管区的炎性细胞胞浆中,但与同时在肝细胞内高度表达的HBsAg、HBcAg强度无明显相关性,r分别为0.04和-0.15,P>0.05。肝癌组织中APOBEC3G也有表达,但未明显强于癌旁组织(P>0.05)。结论HBV慢性感染肝细胞中表达增高的APOBEC3G未能有效控制病毒的活动,并可能与肝癌的发生无直接关系。 彭程 贺永文 童巧霞 郭春霞关键词:APOBEC3G APOBEC3蛋白抗乙肝病毒的研究进展 2007年 APOBEC3是近年发现的具有抗病毒活性的一个蛋白家族,被认为是固有免疫系统(inhate immune system)的重要组成部分。本文就APOBEC3家族蛋白抗HBV的研究进展进行综述。 彭程 贺永文关键词:乙肝病毒 A549和MDCK细胞外源性表达人APOBEC-3F和APOBEC-3G对流感病毒复制和突变的影响 2010年 目的:研究人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响。方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western blotting和间接免疫荧光鉴定后,用流感病毒进行感染,通过检测半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)和空斑实验确定病毒滴度;使用不同初始感染剂量,绘制动态的病毒生长曲线,以确认hA3F和hA3G对流感病毒复制的影响。Western blotting检测流感病毒感染后转染细胞表达外源性hA3F和hA3G的情况。病毒在转染细胞和对照细胞中连续传代,RT-PCR和测序分析其血凝素HA基因的突变频率。结果:TCID50检测和空斑实验结果表明在hA3F和hA3G表达细胞中,流感病毒的滴度与对照细胞间差异无统计学意义(P>0.05);病毒生长曲线表明,不同初始感染剂量、不同感染时相,转染hA3F和hA3G的细胞对人流感病毒的抑制作用与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果表明感染后48h仍能够在MDCK细胞中检测到hA3F和hA3G的重组蛋白。病毒HA片段的测序分析表明,转染hA3F和hA3G的细胞对流感病毒基因组的致突变频率与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究表明hA3F和hA3G这两个重要的APOBEC成员,对人流感病毒的复制效率及突变频率无明显作用。 王革非 彭程 曾祥兴 张驰 李康生关键词:流感病毒 突变 A549 发热伴血小板减少综合征凝血功能异常的临床特征及意义 被引量:6 2022年 分析发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)患者凝血功能的临床变化特点及其与血小板减少的关系,探索其作为早期预测SFTS患者重症化趋势的价值。分析2014年1月至2020年7月华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科收治的428例SFTS患者(其中死亡组70例,存活组358例)的临床资料,统计分析两组患者凝血相关指标以及弥散性血管内凝血(DIC)评分的差异。结果显示,SFTS患者凝血功能异常常见,死亡组较存活组更易出现出血症状(出血发生率41.4%比26.5%);死亡组D-二聚体水平显著高于正常水平,活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)均显著延长。死亡组与存活组患者凝血酶原时间(PT)、TT、APTT、国际标准化比值(INR)、D-二聚体在第5~6天开始出现统计学差异;纤维蛋白原(FIB)水平在第7~8天开始出现统计学差异,均早于血小板计数水平在两组患者中出现差异的时间(第9~10天)。SFTS病死率随基线DIC评分升高而升高,当DIC评分达到6时,病死率达到66.67%。疾病过程中显著的凝血异常介导血小板消耗过多,凝血相关指标较血小板计数对早期识别SFTS重症化更有帮助。 徐玲 王华 梁博云 王桐 郑昕 彭程关键词:发热 血小板减少 出血 弥散性血管内凝血 阻断Wnt-β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响 2007年 目的探讨活化的肝星状细胞(HSC)内是否存在功能性的Wnt-β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子(T-cell factor,TCF)依赖的荧光素酶报告质粒(pTOPFLASH)测定HSC-T6细胞内的Wnt-β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体dnTCF表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt-β-catenin信号的转导,用Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原表达变化。结果HSC-T6细胞核内有β-catenin的表达;转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于转染pFOPFLASH的对照组(P<0.01);与转染空质粒的对照组相比,转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达分别下降52.9%和37.5%(P<0.05)。结论活化的HSC中存在Wntβ-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制活化HSC的功能。 翁志宏 雷延昌 彭程 张淑玲关键词:星形细胞 肝硬化 难治性并殖吸虫病二例 被引量:1 2014年 例1 男,12岁,湖北恩施人.2012年9月因消瘦、乏力、纳差1周到当地医院就诊.既往身体健康,于2012年7月在恩施山区游玩时食用两只烤溪蟹.实验室检查:白细胞计数18.38&#215;109/L,嗜酸粒细胞0.082,并殖吸虫抗体阳性,胸部CT平扫提示右肺感染性病变,右侧液气胸并叶间积液,左侧少量胸腔积液,腹部B型超声提示少量腹腔积液. 胡韵 郑昕 揭盛华 彭程 杨东亮关键词:并殖吸虫病 胸部CT平扫 少量胸腔积液 嗜酸粒细胞 感染性病变 一种重组腺病毒载体产生及操作的新方法 被引量:12 2003年 目的 建立一种快速、高效的产生腺病毒的实验方法。方法 将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)装在穿梭质粒 ,线性化后与腺病毒骨架载体一起电穿孔转染大肠杆菌 ,使之同源重组 ,产生病毒基因组质粒。后Pac酶切 ,脂质体介导转入 2 93细胞以包装出病毒。扩增后收获病毒 ,氯化铯密度梯度离心纯化 ,空斑试验测滴度。结果 5 2个大肠杆菌克隆 ,其中有 1个发生同源重组 ,产生腺病毒基因组质粒pAdEGFP ,转染 2 93细胞 ,荧光显微镜下产生绿色荧光。病毒纯化后达 10 11pfu/ml。 结论 大肠杆菌内质粒间同源重组的方法可以高效、简便、快捷地产生重组腺病毒载体 。 胡中波 仲照东 张友山 彭程 卢运萍 邹萍关键词:绿色荧光蛋白 同源重组 腺病毒载体 大肠杆菌 血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用 被引量:9 2003年 血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )是肾素 血管紧张素系统的一种主要生物活性物质。为了研究它在造血系统中的影响 ,本实验通过体外细胞培养的方法 ,探讨AngⅡ与不同的细胞因子联合刺激脐血CD34+ 细胞生长和分化的作用。研究结果发现 ,悬浮培养体系中的AngⅡ可同时刺激BFU E和CFU GM的扩增 ,BFU E和CFU GM的数量在一定范围内随AngⅡ浓度 (0 0 1- 0 1μmol/L)的升高而增多 ;在半固体培养基中的AngⅡ则仅刺激CFU GM的形成 ,却不影响BFU E ;悬浮培养体系中AngⅡ与细胞因子SCF +G CSF +GM CSF +IL 3联合可使CFU GM的扩增倍数由 2 3± 0 8升高到 7 8± 1 9倍 ,与SCF +EPO +TPO +IL 3联合 ,BFU E的扩增倍数由 3 1± 1 8提高到 9 2± 2 3倍。结论 :AngⅡ与其他细胞因子联合可刺激脐血造血干 /祖细胞体外扩增。 彭程 黎纬民 马艳萍 胡中波 程范军 刘凌波 邹萍关键词:脐血 体外扩增 人APOBEC-3F和-3G的克隆表达、亚细胞定位及其抑制HBV的研究 被引量:2 2009年 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide,APOBEC)家族成员,是近年来发现的具有抗病毒作用的天然免疫分子,对HIV和HBV等多种病毒具有抑制作用,为研究APOBEC的抗病毒作用,对APOBEC-3F和-3G进行克隆、表达及亚细胞定位分析.HBV主要的生物合成发生于细胞核中,利用核定位信号(NLS)及二联核定位信号(B-NLS)与APOBEC-3F和-3G融合表达,以进一步了解APOBEC-3F和-3G的亚细胞定位及功能.利用RT-PCR从植物凝集素(PHA)刺激的人外周血淋巴细胞RNA中,对APOBEC-3F和-3G进行克隆,利用HindⅢ和KpnⅠ双酶切插入到pcFlag载体中,脂质体转染MDCK细胞后利用免疫荧光检测APOBEC重组蛋白的亚细胞定位.电泳结果表明,RT-PCR扩增得到APOBEC-3F和-3G基因,双酶切鉴定结果表明,APOBEC真核表达载体构建成功,基因序列经DNA测序证实.免疫荧光结果表明,转染表达后的APOBEC-3F和-3G均定位于细胞胞浆中.APOBEC-3F和-3G可以在HepG2.2.15细胞中显著抑制HBV的复制.可以有效转运绿色荧光蛋白(GFP)入核的NLS及B-NLS,不能将APOBEC-3F和-3G有效地转运至核中.成功地对APOBEC家族中的两个重要成员APOBEC-3F和-3G进行了克隆、表达及亚细胞定位研究,为进一步利用APOBEC家族蛋白开发抗HIV及HBV药物提供基础. 王革非 彭程 李卫中 辛岗 苏芸 陈幼莹 林桂梅 李康生关键词:载脂蛋白B 亚细胞定位 HBV 核定位信号