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氨基酰化酶分子中并不存在二硫键被引量：7: 1995年; 用NR/R双向对角线SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明氨基酰化酶分子中并不存在二硫键.MNP滴定氨基酰化酶的结果表明,酶分子中的10个半胱氨酸巯基有8个是可反应基团,另外2个内埋巯基在7mol/L盐酸胍溶液中被暴露出来,并可与MNP反应.DTNB测定的结果表明,酶分子中的10个半胱氨酸巯基有4个可反应巯基,6个DTNB所不能接触的巯基经7mol/L盐酸胍变性后,可以与DTNB作用.两种巯基试剂测定的结果均表明氨基酰化酶分子中含总巯基数为10个.这一数据与氨基酰化酶序列分析所得到的半胱氨酸残基数是一致的.因此进一步证实了氨基酰化酶分子中确无二硫键的存在.; 王洪睿张彤张彤王希成周海梦; 关键词：氨基酰化酶二硫键双向电泳

氨基酰化酶在脲溶液中变性时构象变化速度与失活速度的比较被引量：2: 1994年; 应用了邹氏不可逆抑制动力学的方法,在变性剂存在的条件下,连续监测酶催化的底物反应过程,测定了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中失活的速度常数,并考察了底物的存在对酶失活的保护作用。同时,还比较了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中变性时失活和构象变化的速度。1mol/L,2mol/L脲变性时失活速度常数为为1.62×10^(-2)S^(-1)和2.05×10^(-2)S^(-1),但是酶分子的整体构象尚未发生明显变化。3mol/L脲变性时,失活速度常数为2.56×10^(-2)S^(-1),而变性速度常数为3.72×10^(-3)S^(-1)。失活速度比构象变化速度快大约一个数量级。在4mol/L,5mol/L,6mol/L脲溶液中变性时,酶分子快速失活,而其构象变化速度常数分别为5.27×10^(-3)S^(-1)。5.47×10^(-3)S^(-1),5.56×10^(-3)S^(-1)。可见,在相同浓度的脲溶液中,氨基酰化酶的失活速度明显快于酶分子整体构象变化的速度。上述结果表明,含有辅基金属离子Zn^(2+)的氨基酰化酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有一定的柔性。; 王洪睿王希成王希成张彤; 关键词：氨基酰化酶失活构象

兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质的测定被引量：2: 1999年; 本文提供了一个新开出的生物化学综合性教学大实验，完成本实验约需４天。实验中用到了多种重要的生化实验技术。; 周广业陈坚刚张彤王洪睿周海梦; 关键词：肌酸激酶纯化

氨基酰化酶在低浓度脲溶液中的失活并非解聚所致: 1994年; 氨基酰化酶(Aminoacylasc,EC3.5.1.14)是一个含金属锌离子的二聚体酶,亚基分子量约为43 000.Zn^(2+)位于每个亚基的活性部位上,且为酶的活性所必需,过去的研究结果表明锌离子对酶活性部位结构有一定的稳定作用,最近报道的氨基酸序列表明,该酶分子中有16个色氨酸残基和18个酪氨酸残基.; 王希成张彤王洪睿周海梦; 关键词：氨基酰化酶解聚失活

氨基酰化酶热变性时失活和去折叠的比较被引量：5: 1994年; 过去许多作者已经报道了几种酶在盐酸胍和脲变性时失活与构象变化的比较研究,结果表明,失活先于以常规物理化学方法所监测到的构象变化;在同浓度变性剂存在的条件下,失活速度快于构象变化的速度.在大量的实验事实的基础上,邹承鲁提出了酶的活性部位的柔性学说,并指出这种柔性是酶催化作用所必需的.最近,在肌酸激酶分子的活性部位标记了一个荧光探测基团,直接观察了在低浓度的盐酸胍溶液中,酶活性部位构象变化,为邹承鲁的理论提供了一个直接的证据.然而上述研究中所涉及的酶都是非金属酶。; 何飚严明张彤周海梦; 关键词：氨基酰化酶热变性失活去折叠

锌离子对氨基酰化酶构象及其稳定性的影响被引量：9: 1994年; 天然氨基酰化酶和脱谷氨基酰化酶无论在二级结构（用ＣＤ和ＦＴＩＲ监测）还是三级结构上（以荧光发射光谱监测）都有明显的差异，表明了脱锌后酶的有序度降低；当比较天然和脱锌氨基酸化酶对去圬剂的稳定性时，结果表明脱锌后酶的构象的稳定性明显降低．因此可以认为锌离子对维持酶分子活性部位的特定构象以及构象的稳定性具有重要的作用．; 张彤周海梦; 关键词：氨基酰化酶构象锌离子分子折叠

氨基酰化酶在LDS溶液中的失活与去折叠的比较研究被引量：2: 1995年; 氨基酰化酶在阴离子去圬剂十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ）溶液中的失活与去折叠的研究结果表明，在低浓度的ＬＤＳ溶液（０．６ｍｍｏｌ／Ｌ）中变性时，以荧光和紫外差吸收方法监测的酶分子构象尚未发生明显变化。而酶的活力已经大部分或几乎全部丧失。当ＬＤＳ浓度达１．６ｍｍｏｌ／Ｌ时，此时酶分子的构象变化才达到最大程度，在实验使用的ＬＤＳ的浓度范围内，用远紫外ＣＤ光谱监测的二级结构没有发生明显的变化。从上述研究结果，可以认为含锌氨基酰化酶的活性部位也具有相对的柔性。; 张彤周海梦; 关键词：氨基酰化酶失活去折叠

溴化+烷基三甲基铵滴定时氨基酰化酶的失活与构象变化的比较被引量：2: 1993年; 研究了阳离子去污剂-溴化+烷基三甲基铵变性时氨基酰酶的失活与构象变化.当用溴化+烷基三甲基铵滴定氨基酰化酶时,随着去污剂浓度增大,酶的活力逐渐丧失,至50mmolL时酶完全失活.用荧光发射光谱(295nm激发)的方法监测了氨基酰化酶的构象变化.发现氨基酰化酶失活先于构象变化.从这一结果看来.金属酶的活性部位构象可能也是比整个分子的构象具有较大的柔性或运动性.; 周海梦张彤; 关键词：氨基酰化酶

锰或镍离子取代的氨基酰化酶性质的研究被引量：3: 1993年; Ｎ－ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄａｍｉｄｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＥＣ３，５，１，１４）是含锌金属酶，每摩尔酶蛋白含两摩尔Ｚｎ２＋。本实验通过金属螯合剂ＥＤＴＡ对酶透析脱去酶中的锌离子，生成不含金属离子的ａｐｏ－酶，再分别以Ｍｎ２＋，Ｎｉ２＋离子对ａｐｏ－酶重组，生成相应的金属离子取代酶，研究了它们的活力与ｐＨ值的关系，热稳定性，游离的金属离子对酶活性的影响，并通过荧光发射光谱考察了相应构象的变化。; 张英侠胡凌云王希成张彤周海梦; 关键词：氨基酰化酶锰镍

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张彤