孟宇
- 作品数：21 被引量：24H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)过表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 为构建携带冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRP)的过表达载体,首先从4℃条件下冷处理8 h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP基因的c DNA序列,然后扩增CIRP基因的编码区,将其克隆到真核表达载体p Lenti6/V5中,酶切鉴定并测序.将克隆成功的质粒转染HEK293T细胞,用Western blot检测CIRP的表达水平.成功扩增CIRP编码区,并将其克隆至载体p Lenti6/V5中;当将CIRP过表达载体转染HEK293T细胞后,Western blot检测结果显示CIRP蛋白表达水平明显增加(P<0.01).本研究成功构建了CIRP过表达载体,为进一步研究CIRP的作用机制提供了基础工具.
- 李静辉孟宇李玉恒李昌盛杨焕民李士泽
- 关键词：过表达质粒冷应激
- CIRP干扰在亚低温处理下对海马神经元Casp-3及相关氧化还原指标的影响
- 引言冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRP)是在冷应激过程当中高效表达的蛋白,已经被证明具有细胞保护作用,但确切的作用机制还有待阐明,为此揭示CIRP细胞保护...
- 刘鹏孟宇姚睿智史宏昭刘洋刘宏睿计红郭静茹甄莉李士泽
- 亚低温状态下冷诱导RNA结合蛋白调节氧化还原系统对海马神经元的保护作用被引量：5
- 2015年
- 本文旨在探讨冷诱导RNA结合蛋白(cold inducible RNA-binding protein,CIRP)是否通过抑制氧自由基的生成而起到抑制神经元凋亡的作用。采用体外分离培养的原代大鼠海马神经元,随机分为5组:常温对照组(37℃)、空病毒感染组、CIRP过表达组、CIRP干扰组、亚低温32℃处理组。将后四组移入32℃含有5%CO2培养箱内培养。采用Annexin V-FITC/PI标记后用流式细胞术对海马神经元进行细胞凋亡检测、Western blot检测CIRP的表达,同时采用ELISA方法进行相关氧化还原指标(T-AOC,GSH-Px,SOD,MDA)检测。Western blot及流式凋亡检测结果显示:与常温对照组相比,单纯亚低温处理组及CIRP过表达组海马神经元中CIRP的表达量明显增加(P<0.01),神经元的凋亡率明显下降;而干扰CIRP的表达后,与单纯亚低温处理组相比,细胞凋亡的数目则明显增加(P<0.05)。相关氧化还原指标检测结果显示:亚低温32℃处理组、CIRP过表达组与常温对照组、CIRP干扰组、空病毒感染组相比均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。以上结果表明:亚低温处理通过上调CIRP的表达,抑制细胞内氧自由基的生成,从而直接或间接地抑制了氧自由基诱导的神经元凋亡,进而起到海马神经元的保护作用。
- 李静辉张雪孟宇李昌盛计红杨焕民李士泽
- 关键词：亚低温
- 慢病毒载体介导的CIRP过表达体系的构建
- 2012年
- 慢病毒既可以感染分裂期细胞,又可以感染分裂缓慢或非分裂期的细胞,并且慢病毒携带的基因可整合入宿主基因组,目的基因可以在宿主细胞中得到长期稳定的表达,免疫反应很小。因此,为了得到有效的基因过表达效果,本实验中应用慢病毒载体的介导构建CIRP过表达体系。利用Invitrogen公司的Gateway Lentiviral载体系统。
- 李玉恒李静林增孟宇孙智峰李俭刘从李鹏沈冰蕾李士泽
- 关键词：慢病毒载体病毒载体介导免疫反应目的基因
- 冷应激条件下猪睾丸细胞中RNA结合基序蛋白3过表达对Caspase 3表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨冷应激(32℃)条件下,猪睾丸(ST)细胞系中RNA结合基序蛋白3(RBM3)过表达时凋亡蛋白半胱天冬酶3(Caspase 3)表达量变化情况。方法:利用本实验室成功构建的携带绿色荧光蛋白(GFP)的RBM3过表达慢病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-RBM3和空病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-DEST分别感染ST细胞,作为过表达病毒(OEV)组和空载体病毒(EVV)组,此外还设立野生型细胞(WTC)组作对照,利用实时荧光定量RCR(qPCR)法和Western blot分析法检测各组中RBM3 mRNA和蛋白的表达情况。然后对各组细胞进行37℃以及32℃(2 h、4 h,8 h)的冷应激处理,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组Caspase 3表达量的变化。结果:OEV组RBM3基因和蛋白相对表达量高于EVV组和WTC组。在37℃以及32℃冷应激实验(2 h、4 h,8 h)中,OEV组Caspase 3表达量显著低于EVV组和WTC组。结论:冷应激ST细胞中RBM3过表达能够显著地降低Caspase 3的表达程度,为RBM3基因具有抵抗低温诱导ST细胞凋亡作用提供实验依据。
- 李云龙李俭李昌盛李静辉孟宇杨焕民李士泽
- 关键词：冷应激过表达半胱天冬酶3
- 长白猪RBM3基因及其重组慢病毒载体的构建和应用
- 本发明涉及一种长白猪RBM3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了含有该基因的重组慢病毒载体和构建方法以及在提高猪的抗寒能力中的应用。本发明成功的构建了含RBM3基因的慢病毒载体plenti6/v...
- 李士泽李俭杨玉英杨焕民计红李玉恒孟宇李静辉张雪李云龙
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的CIRP过表达体系的构建
- 慢病毒既可以感染分裂期细胞,又可以感染分裂缓慢或非分裂期的细胞,并且慢病毒携带的基因可整合入宿主基因组,目的基因可以在宿主细胞中得到长期稳定的表达,免疫反应很小。因此,为了得到有效的基因过表达效果,本实验中应用慢病毒载体...
- 李玉恒李静林增孟宇孙智峰李俭刘从李鹏沈冰蕾李士泽
- 文献传递
- CIRP对冷应激小鼠血清生化指标、相关细胞免疫因子及能量代谢的影响被引量：6
- 2016年
- 将45只6周龄体质量(18±2)g SPF级雄性SD小鼠随机分为5组(n=5),常温对照组5只(A组);低温对照组冷刺激4、8h各5只(B组);冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA binding protein,CIRP)过表达组冷刺激4、8h各5只(C组),注射CIRP过表达慢病毒液0.1mL;CIRP干扰组冷刺激4、8h各5只(D组),注射CIRP干扰病毒液0.1mL;阴性对照组冷刺激4、8h各5只(E组),注射空载体病毒液0.1mL。A组置于常温(21±0.1)℃条件下饲养,后4组置于低温(4±0.1)℃环境饲养,分别在4h及8h后通过摘除眼球的方法采取血液。采用ELISA法检测血清中IL-1、IL-2、IL-6、GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA、丙酮酸、PFK-1、LDH的含量。结果显示:(1)冷应激处理后,小鼠血清中相关细胞因子水平出现明显变化,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关细胞因子的影响差异显著(P<0.05);(2)冷应激处理后,小鼠血清中氧化还原指标GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA变化非常明显,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关氧化还原指标的影响差异极显著(P<0.01);(3)冷应激处理后,血清当中能量代谢相关指标无明显变化,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关能量代谢指标的影响差异不显著(P>0.05)。结果表明:在不影响动物机体能量代谢的情况下,CIRP可以有效地抑制细胞内氧自由基的生成,从而提高小鼠抗氧化能力,以及调节动物机体的相关免疫因子,对小鼠抵抗低温应激起到积极地保护作用。
- 李静辉张雪孟宇李昌盛计红杨焕民李士泽
- 关键词：小鼠
- 应用2-DE技术对冷应激前后雏鸡血清蛋白质表达谱的差异分析被引量：1
- 2015年
- 为了比较冷应激前后雏鸡血清蛋白质组的差异,试验采取冷应激处理前后的雏鸡血清,经双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE),考马斯亮蓝染色后用PDQuest凝胶图像分析软件测定分析了雏鸡冷应激前后的血清蛋白质组。结果表明:冷应激前后雏鸡血清蛋白质组具有明显的差异表达;成功建立了雏鸡血清蛋白质双向电泳技术。
- 贺军李士泽张雪李云龙李静辉孟宇
- 关键词：冷应激双向电泳雏鸡血清蛋白质表达谱
- 基于CIRP基因有效干扰靶点的筛选
- 2015年
- 为了研究冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)更深入的功能及意义,试验通过Lipo FiterTM将黑龙江八一农垦大学动物生理生化实验室之前已构建好的5组RNA干扰重组载体及空载体分别瞬时转染到大鼠肝细胞中,提取细胞RNA经反转录后进行荧光定量PCR试验,获得各组干扰载体对CIRP基因干扰后CIRP基因mRNA的相对表达量,确定效果最佳的干扰靶点。结果表明:在5组干扰试验组CIRP基因mRNA的表达量中,264组与空白对照组的表达量差异显著(P<0.05),并且干扰效率达到70%以上;阴性对照组(空载体组)与空白对照组的表达量基本相同,差异不显著(P>0.05)。说明试验成功筛选出有效干扰靶点。
- 孟宇李静辉张雪李云龙贺军李士泽
- 关键词：冷休克蛋白RNA干扰荧光定量冷应激
