孙辉
- 作品数：13 被引量：71H指数：6
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项兵团博士基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 啤酒花茎尖的组织培养和规模化生产被引量：2
- 2008年
- 1植物名称 啤酒花（Humulus Iupulus Linn．），品种‘余乐比特’。
2材料类 别茎尖。
3培养条件 以MS为基本培养基。（1）增殖培养基：MS＋6-BA0．01mg．L。（单位下同）＋IAA0．1；（2）茎尖生长培养基：MS＋6-BA3．0＋NAA0．2；（3）生根培养基：1／2MS＋IAA1．5。
- 王重陈尚珂刘升学孙辉毛晓云祝建波
- 关键词：啤酒花规模化生产茎尖基本培养基增殖培养基植物名称
- 棉花GhACO1基因植物表达载体构建及拟南芥遗传转化被引量：6
- 2011年
- 乙烯参与植物生长发育等许多生理过程,在许多植物细胞中,ACO基因通过促进乙烯合成调控着植物器官的形成发育。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆得到1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶1(GhACO1)基因,并将该基因构建到植物表达载体PBI121中,其中GhACO1基因位于CaMV35S启动子和GUS报告基因之间。通过花滴法将GhACO1基因转化拟南芥,利用卡那霉素对转化植株进行初步筛选,对卡那霉素阳性植株进行进一步的PCR检测和GUS组织化学分析。结果表明:GhACO1基因已经整合到拟南芥基因组中;GUS组织化学分析显示,在转基因拟南芥叶、茎和根中都表现出GUS活性。研究结果为进一步探讨GhACO1的生物学功能和基因工程改良棉花纤维品质奠定了基础。
- 张萍王斐孙辉李鸿彬
- 关键词：棉花表达载体构建乙烯
- 利用简并引物克隆天山雪莲sikPIP基因片段及RNAi载体的构建被引量：6
- 2010年
- 利用NCBI、Bloekmaker、CODEHOP、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计简并引物并利用简并引物RT-PCR,首次从天山雪莲中克隆到474bp的PIP基因cDNA片段,命名为sikPIP,其与GenBank中非洲杂交菊PIP基因氨基酸序列的同源性高达93.0%。从上述序列中选取200bp的序列,利用2对同尾酶将正义片段和反义片段插入到植物表达载体CAM2300-35S-Ocs中,成功构建天山雪莲RNAi载体CAM2300-35S-Ocs-sikPIP。为接下来的遗传转化,进一步探明sikPIP基因在天山雪莲中的功能奠定了基础。
- 孙辉祝建波
- 关键词：天山雪莲RNAI
- 雪莲SikCDPK1基因的表达特征和蛋白激酶活性分析被引量：1
- 2023年
- 极端生境草本植物天山雪莲中的Sik CDPK1基因可明显提高转基因烟草的低温、干旱耐受性。为探究Sik CDPK1基因的表达特征和蛋白激酶活性,本研究利用实时荧光定量PCR技术检测了Sik CDPK1基因在雪莲不同组织器官的表达水平以及对信号分子CaCl_(2)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA_(3))、水杨酸(SA)、H_(2)O_(2)的诱导响应模式,采用Kinase-GloTM技术检测了SIKCDPK1蛋白激酶活性,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因融合蛋白表达法进行了SIKCDPK1蛋白的亚细胞定位。结果显示:Sik CDPK1基因在雪莲根、茎、叶、种子、幼茎、幼叶中均表达,Sik CDPK1基因受CaCl_(2)、ABA、GA_(3)、SA、H_(2)O_(2)的诱导表达但响应模式有差异;激酶活性分析发现Ca^(2+)存在时,SIKCDPK1具有激酶催化活性,加入Ca^(2+)螯合剂EGTA后,SIKCDPK1几乎没有激酶活性。SIKCDPK1激酶活性随Ca^(2+)浓度增加而增加,Ca^(2+)浓度(K0.5)为48.7 nmol·L^(-1)时,SIKCDPK1激酶活性可达到最大活性的1/2;以HisⅢ为底物时,SIKCDPK1的Km值可达到43.8μg·m L^(-1),SIKCDPK1蛋白定位于细胞核。上述结果表明Sik CDPK1基因表达无明显组织特异性,可响应信号分子Ca^(2+)、ABA、GA_(3)、SA、H_(2)O_(2)的诱导;SIKCDPK1发挥蛋白激酶活性需要Ca^(2+),SIKCDPK1主要在细胞核里发挥作用。
- 刘玉玲朱新霞吕新华孙辉
- 关键词：蛋白激酶活性
- 面向21世纪生命科学类实践教学的改革与管理被引量：17
- 2007年
- 生命科学是建立在科学实验和实践上的一门学科,实践教学贯穿于生命科学本科教育的始终。分析了实践教学在高校创新人才培养中的重要作用和意义,从3个阶段探讨了实践教学改革的方法,最后提出要构建和完善实践教学的质量监控和保障体系。
- 李桂芳杨晓献孙辉
- 关键词：实践教学教学质量
- 过量表达棉花GhACO2基因增强拟南芥抗逆性研究被引量：4
- 2011年
- 乙烯在植物生长发育过程中起到非常重要的作用,ACO基因对于细胞内乙烯的合成起到关键的作用,然而乙烯在植物响应非生物胁迫方面的功能有很大的未知性。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆获得GhACO2基因,构建了植物过量表达载体p35S::GhACO2,通过花序侵染法转化拟南芥,用卡那霉素对转化植株进行初步筛选,进一步对阳性植株进行PCR和GUS组织化学分析检测,结果表明,在转基因拟南芥叶片中有很强的GUS活性,茎和根有微量表达;GhACO2基因已经整合到拟南芥基因组中,成功获得转基因拟南芥。经过纯合筛选后获得转基因T2代拟南芥植株,利用NaCl和PEG6000对T2代植株进行盐胁迫和干旱胁迫处理,结果显示,与野生型拟南芥相比,转GhACO2基因拟南芥对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性显著性的增强。研究结果为进一步探讨GhACO2的生物学功能和利用基因工程技术进行转基因育种质奠定了基础。
- 张萍王斐孙辉李鸿彬
- 关键词：乙烯
- 转天山雪莲sikPIP_3基因烟草的获得及抗逆性鉴定被引量：7
- 2012年
- 利用PCR技术从实验室建立的天山雪莲DNA文库中克隆了天山雪莲质膜水孔蛋白基因sikPIP3,构建了植物表达载体pBI121-sikPIP3,通过农杆菌介导法转化烟草品种NC89,经PCR和RT-PCR检测证明目的基因成功导入并得到了表达,采用水分胁迫进行抗旱分析和采用冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果显示:(1)克隆出具有水孔蛋白基因特性的sikPIP3基因。(2)经断水干旱处理,转基因烟草的生长表型优于野生型烟草,特别是在断水9d的情况下,野生型烟草已经完全萎蔫,转基因烟草萎蔫症状较轻;生理指标测量结果显示,转基因烟草的相对电导率和MDA的含量低于野生型烟草,相对含水量和CAT活性高于野生型烟草。试验表明转sikPIP3烟草的抗旱性高于野生型烟草。(3)经不同温度胁迫处理,转基因烟草的生长表型优于野生型烟草,特别是在-4℃冷处理6h情况下,野生型烟草已经完全萎蔫,转基因烟草只出现少量伤斑;生理指标分析结果表明,转基因烟草的相对电导率和MDA的含量低于野生型烟草,CAT活性高于野生型烟草。试验表明转sikPIP3烟草的抗寒性高于野生型烟草。综合结果表明:sikPIP3基因在抗逆基因工程方面具有较高的应用前景。
- 焦天奇孙辉刘瑞娜王爱英祝建波
- 关键词：天山雪莲烟草抗寒性抗旱性
- 不同启动子调控转GhCDPK1基因烟草的抗逆性研究
- 2017年
- 为探究不同启动子对陆地棉GhCDPK1基因抗逆功能的影响,该研究克隆了长度为824bp和1 524bp的2个拟南芥RD29A的启动子序列,分别构建了35S启动子和2个RD29A启动子驱动的GhCDPK1融合表达载体,并利用农杆菌介导法转化烟草,分析了其驱动的转GhCDPK1基因烟草,在逆境胁迫处理后的表型变化,叶绿素、丙二醛(MDA)和脯氨酸含量,过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及细胞膜透性的生理变化。结果显示:RD29A启动子驱动的转GhCDPK1基因烟草,比35S启动子驱动表现出更强的耐逆性,其叶绿素含量、脯氨酸含量以及POD、SOD活性都高于35S启动子,而MDA含量与细胞膜的通透性低于35S启动子,且1 524bp的RD29A2启动子片段驱动转GhCDPK1基因烟草的耐胁迫能力比824bp启动子片段更强。
- 刘玉玲朱新霞孙辉艾尼江冯国礼
- 关键词：启动子转基因逆境胁迫
- 转铜绿假单胞杆菌KatB基因烟草获得及其抗逆性鉴定
- 2011年
- 以NC 89烟草(Nicotiana tabacum)为材料,通过农杆菌介导法获得转铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aerugi-nosa)KatB基因植株,利用PCR和RT-PCR对转化烟草进行鉴定,最后通过水分胁迫、盐胁迫、过氧化氢胁迫进行抗逆性分析。结果表明:与野生型植株相比,在缺水条件下的第13 d,300 mmol/L的NaCl胁迫条件下第20 d和0.3mmol/L的H2 O2胁迫条件下第33 d,转KatB基因烟草的叶片相对含水量、伤害率、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MAD)、光系统Ⅱ(PSII)相对量子产率各种生理指标都显著优于野生型(WT)烟草,转KatB基因烟草表现出了较强的抗逆性,说明KatB基因在抗逆基因工程方面具有较好的应用前景。
- 喻娜程晨孙辉徐登献祝建波
- 关键词：铜绿假单胞杆菌烟草抗逆性
- 棉花乙烯合成基因促进拟南芥和烟草不定根发生的研究被引量：6
- 2011年
- 从棉花纤维cDNA中克隆获得乙烯合成基因GhACO3,构建了植物过量表达载体p35S∷GhACO3。通过花序侵染法和叶盘法分别转化拟南芥和烟草,利用卡那霉素筛选及分子检测获得转基因阳性拟南芥和烟草植株。结果表明,GhACO3基因已整合到拟南芥和烟草基因组中;经过纯合筛选后获得转基因T2代拟南芥植株;与野生型拟南芥相比,GhACO3基因对拟南芥不定根发生具有显著促进作用;与野生型烟草植株相比,转GhACO3基因烟草不定根发生得到了显著的促进。研究表明,GhACO3基因的过量表达能够促进拟南芥和烟草不定根的形成发育,为进一步探讨GhACO3的生物学功能和进行转基因育种奠定了基础。
- 张萍王斐徐登献孙辉李鸿彬
- 关键词：不定根发生拟南芥烟草
