- 人血小板生成素在CHO细胞中的稳定表达及其产物鉴定
- 1998年
- 目前，血小板生成素（ＴＰＯ）的基因工程研究是继促红细胞生成素（ＥＰＯ）之后的又一个热点。由于对ＴＰＯ结构与功能的关系了解不够，其基因工程方面的研究在表达系统的选择和分子结构的设计上均存在很大的盲目性。针对这一问题，作者欲对ＴＰＯ的糖基化程度与其生物学...
- 刘丽田生礼芦兴武谢宝树刘立忠王颖
- 关键词：血小板生成素CHO细胞基因表达
- PSP94-TNFα D11a融合基因直接注射的抗肿瘤作用被引量：1
- 2000年
- 目的 探讨人PSP94和肿瘤坏死因子α衍生物 11a(TNFαD11a)融合基因 (PSP94 TNFαD11a)直接注射的抗肿瘤作用。 方法 人前列腺癌裸鼠模型肌肉注射含PSP94 TNFαD11a融合基因的pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA ,剂量为 5 0 μg/只 ,同时设 pcDNA PSP94、pcDNA3 .0空载体、生理盐水和环磷酰胺对照组。注射后第 2 0d处死动物 ,称瘤重计算抑瘤率。 结果 pcD NA PSP94 TNFαD11a组抑瘤率为 2 3% ,为 pcDNA PSP94组的 1.4倍。以同样方式给药 ,pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA对小鼠Lewis肺癌的抑制率为 31% ,为pcDNA TNFαD11a组的 2 .1倍。结论 pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA的直接注射具有抗肿瘤作用。
- 刘丽刘立忠石缨谢宝树王烨冷爱军曹颖
- 关键词：前列腺肿瘤融合基因
- 正常人前列腺组织PSP mRNA的表达
- 1999年
- 用ＲＴ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ序列测定法分析５名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在这５名正常前列腺组织中均同时存在ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｃＤＮＡ，且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致。这可能对ＰＳＰ进一步的基础研究和应用有一定的意义。
- 刘丽刘建香刘庆鑫刘立忠王颖孟岩谢宝树冷爱军苏旭刘树铮
- 关键词：MRNA前列腺组织
- SAPGTP和PG为接头的5'IL6-TNFα衍生物融合蛋白被引量：10
- 1999年
- 通过计算机模拟比较十种理论上柔性较好的接头在 ５′ Ｉ Ｌ６ Ｔ Ｎ ＦΔ融合蛋白中对 Ｉ Ｌ６ 和 Ｔ Ｎ ＦΔ空间结构的影响情况，从中选择了 Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ接头．以 Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ 作为接头的 ５′ Ｉ Ｌ６ Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ Ｔ Ｎ ＦΔ和以 Ｐ Ｇ 为接头的５′ Ｉ Ｌ６ Ｐ Ｇ Ｔ Ｎ ＦΔ空间结构预测结果相似． Ｄ Ｎ Ａ 序列分析两种蛋白的接头序列均与设计的一致．５′ Ｉ Ｌ６ Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ Ｔ Ｎ ＦΔ和 ５′ Ｉ Ｌ６ Ｐ Ｇ Ｔ Ｎ ＦΔ蛋白的大肠杆菌表达产物经初步分离、纯化及鉴定后，生物学活性及对高表达 Ｉ Ｌ６ 受体肿瘤细胞的杀伤作用比较结果显示：在 Ｌ９２９细胞上，前者的生物学活性是后者的 ２７ 倍；在 Ｕ９３７ 细胞上，前者对肿瘤细胞的抑制率是后者的１３ 倍．它们对高表达 Ｉ Ｌ６ 受体的 Ｕ９３７ 细胞杀伤作用分别是同样突变位点的人 Ｔ Ｎ Ｆα衍生物的３７ 和 ２９ 倍．实验表明， Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ作为接头构建的 ５′ Ｉ Ｌ６ Ｓ Ａ Ｐ Ｇ Ｔ Ｐ Ｔ Ｎ ＦΔ融合蛋白优于以 Ｐ Ｇ 作为接头构建的 ５′ Ｉ Ｌ６ Ｐ Ｇ Ｔ Ｎ ＦΔ融合蛋白．
- 刘丽徐琪胡晓冥刘立忠王颖谢宝树冷爱军
- 关键词：融合蛋白接头白细胞介素6TNF
- PSP94融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗前列腺癌活性分析
- 2000年
- 在从成年人正常前列腺组织中获得人９４ 个氨基酸的前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）ｃＤＮＡ 基础上，利用ＰＬ 表达系统，实现了人ＰＳＰ９４ 成熟肽Ｎ末端带有１９ 个外源氨基酸的融合蛋白在大肠杆菌中的表达。目的蛋白在细胞中主要以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的３０ ％ ，分子量约为１６－５ｋＤ。表达产物在人前列腺癌细胞ＰＣ３ 上活性分析表明，该融合蛋白能明显抑制前列腺癌细胞的生长。
- 刘建香刘丽刘立忠王颖谢宝树冷爱军苏旭刘树铮
- 关键词：融合蛋白抗前列腺癌
- 大肠杆菌中表达的rhTNFαD11a的分离纯化被引量：1
- 1998年
- 在大肠杆菌中表达的重组人ＴＮＦα衍生物（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）以可溶性形式存在，诱导后的菌体超声破碎后，依次经阶段盐析、离子交换层析及凝胶过滤，最终获得的ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ纯度达９９％。
- 刘丽刘立忠谢宝树王颖冷爱军
- 关键词：大肠杆菌肿瘤坏死因子纯化
- 酵母系统表达TPO与E.coli表达TPO N端结构域生物半衰期比较
- 1998年
- 为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系，首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后，两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Ｗｉｓｔｅｒ大鼠尾静脉注射，利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）和ＴＦ１细胞测定不同时间点实验动物血浆中ＴＰＯ浓度或生物学活性，求出两种ＴＰＯ的生物半衰期（ｔ１／２）值．结果显示，以相同浓度和相同活性单位给药，ＴＰＯ成熟肽的ｔ１／２均比其Ｎ端结构域的长，前者分别是后者的１．６５倍和１．２７倍．
- 刘丽田生礼王颖王颖孟岩芦兴武孟岩冷爱军
- 关键词：血小板生成素糖基化生物半衰期
- 血小板生成素糖基化与其体内生物学活性关系的研究被引量：3
- 1999年
- 为探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其体内生物学活性的关系，给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系统表达的人ＴＰＯ成熟肽或大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ－端结构域蛋白，连续给药５ｄ，每天一次，末次给药后３ｄ，比较两种ＴＰＯ组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）、骨髓有核细胞ＤＮＡ含量。结果高、中、低剂量的ＴＰＯ成熟肽组动物的血小板数、巨核细胞集落数和骨髓ＤＮＡ含量均明显高于ＴＰＯＮ－端结构域蛋白的相应组（Ｐ＜０．０１）。显示酵母系统表达的ＴＰＯ成熟肽比大肠杆菌表达的ＴＰＯＮ－端结构域有明显的生物学活性，这可能与它们的糖基化程度及半衰期有关。
- 刘丽王颖王颖田生礼孟岩芦兴武孟岩冷爱军
- 关键词：血小板生成素糖基化生物学活性
- 原位杂交检测增生和癌变前列腺组织中前列腺分泌蛋白94mRNA的表达
- 2000年
- 根据前列腺分泌蛋白 94(PSP94)和PSP5 7的基因结构特点 ,设计并合成了以地高辛标记的两条探针 ,利用组织原位杂交的方法 ,对增生和癌变前列腺组织中PSP94mRNA的表达量进行了比较。结果显示 ,2 0例增生前列腺组织 ,有 1 0例PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号比PSP94特异探针杂交信号强 ,1 0例相反。它们的共同点是均以腺体增生为主。而 7例前列腺癌组织中除 1例外 ,其余 6例PSP94特异探针的杂交信号均比PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号强。增生和癌变前列腺组织杂交结果比较 ,癌变前列腺组织PSP94特异探针杂交信号均比增生前列腺组织强。
- 刘立忠刘丽谢宝树冷爱军曹颖
- 关键词：原位杂交前列腺肿瘤
- PSP94抗血清制备及正常、增生和癌变前列腺人外周血PSP94分析被引量：1
- 2001年
- 构建了GST PSP94融合蛋白表达质粒 pGEX PSP94,并使其在大肠杆菌中表达了GST PSP94融合蛋白。该融合蛋白经亲合层析纯化后 ,免疫家兔获得了PSP94抗血清。经Wensternblot分析 ,该PSP94抗血清可与重组PSP94蛋白发生特异性结合。用它对正常人和前列腺增生病人各 10例、前列腺癌病人 5例的外周血PSP94浓度进行了分析。结果显示 ,PSP94在这三种人外周血中的浓度无明显差异。提示PSP94不能作为前列腺癌的血清标志物。
- 刘建香刘丽刘立忠苏旭刘树铮冷爱军曹颖
- 关键词：前列腺肿瘤
