任皎
- 作品数：65 被引量：117H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HPV 16型E7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、细胞和用途
- 本发明提供一种编码HPV 16型E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、细胞和用途。本发明利用重组腺病毒，将经修饰失去转化活性的E6、E7蛋白基因融合，并根据融合蛋白的氨基酸序列进行哺乳细胞密码子优化改造，使之在哺乳细胞...
- 田厚文任皎赵莉高见冯靖庞正吴小兵阮力
- 文献传递
- HPV6型L2N120E7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、菌株和用途
- 本发明提供一种编码HPV 6型L2N120E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、菌株和用途。本发明利用原核表达载体，将人乳头瘤病毒(HPV)6型L2N端120个氨基酸、E7蛋白、E6蛋白融合，并根据融合蛋白的氨基酸序列...
- 田厚文赵莉任皎庞正冯靖张忠献阮力谭文杰
- HPV18型L2NE7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、菌株和用途
- 本发明提供一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒(HPV)18型L2NE7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、菌株和用途。本发明将HPV18型L2蛋白第11-200位氨基酸的L2N蛋白、E7蛋白、E6蛋白氨基酸序列融合，...
- 田厚文赵莉任皎冯靖庞正阮力谭文杰
- 文献传递
- 基于CRISPR-Cas9的痘苗病毒高效重组体系的建立被引量：1
- 2021年
- 目的利用规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)-CRISPR相关蛋白9(CRISPR associated protein 9,Cas9)技术对痘苗病毒(vaccinia virus, VACV)胸腺激酶(thymidine kinase,TK)区进行定向重组,建立高效的痘苗病毒靶基因插入重组技术。方法设计合成靶向TK区的引导RNA(guide RNA, gRNA)对应的2条互补寡核苷酸,磷酸化修饰后变性退火,克隆到去除核定位信号的PX458载体上,同时改造原有TK区重组质粒。将gRNA及Cas9共表达质粒转染293T细胞,介导VACV与TK区重组质粒进行同源重组,然后通过蓝白斑的出现率评估病毒重组率。结果本研究中设计并合成的gRNA序列介导的重组效率大于1%,高于经典的同源重组方法10倍以上。结论本研究利用CRISPR/Cas9技术建立了高效痘苗病毒TK区重组体系,为新发突发传染病的疫苗或多价研究以及肿瘤治疗等提供临床前研究技术支持。
- 吴雅彬赵莉任皎袁航张鹏叶飞田厚文王文玲谭文杰
- 关键词：痘苗病毒
- 人乳头瘤病毒16型结构蛋白在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2001年
- 目的 在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白 ,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础。方法 将目的基因克隆至杆状病毒转移载体 ,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9,通过同源重组获得重组杆状病毒 ,用SDS PAGE凝胶电泳和Westernblot法检测重组子在昆虫细胞中表达的目的蛋白。结果 获得了稳定高效表达HPV16结构蛋白的重组杆状病毒 ,L1和L2蛋白的相对分子质量分别为 5 70 0 0和970 0 0 ,L1蛋白的表达产量约占昆虫细胞总体蛋白的 2 5 %～ 30 %。结论 人乳头瘤病毒
- 魏兰兰韩立群任皎田厚文骆卫锋陆振华谷鸿喜阮力
- 关键词：人乳头状瘤病毒病毒蛋白质类病毒体
- 表达中东呼吸综合征冠状病毒S蛋白的重组痘苗病毒的构建及免疫效果初步评价被引量：1
- 2015年
- 目的:以痘苗病毒天坛株为载体,构建表达中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)S蛋白的重组病毒疫苗,并进行免疫效果评价。方法:通过PCR扩增获得去除跨膜区的S蛋白基因片段SQ,并构建重组痘苗病毒载体质粒p JSC11Lac Z7.5SQ,将重组质粒与痘苗病毒同源重组并单斑纯化获得重组病毒毒株RVVMERS-SQ,重组病毒免疫小鼠后用酶联免疫吸附实验(ELISA)和假病毒微量中和实验检测其诱发的S蛋白体液免疫反应水平。结果:构建了表达MERS-Co V去跨膜区S蛋白的重组病毒RVVMERS-SQ,其免疫小鼠后诱发了强的S蛋白体液免疫反应,血清Ig G抗体滴度为1∶3200,中和抗体滴度达到1∶1000。结论:重组痘苗病毒RVVMERS-SQ可在BALB/c小鼠体内诱发强的免疫反应,为MERS-Co V疫苗的研发提供了实验基础。
- 王平兴任皎赵莉邓瑶阳静李善琴阮力谭文杰田厚文
- 关键词：病毒载体
- 人乳头瘤病毒58型L1壳蛋白在原核细胞中的高效表达及抗体制备被引量：4
- 2001年
- 目的 人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)是重要的高度致瘤性病毒之一 ,用原核细胞表达HPV5 8L1主要壳蛋白 (McP) ,并制备相应抗体血清 ,为基因工程疫苗研制打下基础。方法 用聚合酶链反应 (PCR)扩增HPV5 8L1完整编码区基因 ,并克隆、测序。构建原核表达载体pRSETB 5 8L1,表达的L1蛋白经SDS PAGE纯化 ,免疫BALB c小鼠。结果 在原核细胞中表达了HPV5 8L1壳蛋白 ,该壳蛋白的相对分子质量为 6 0 0 0 0 ,此蛋白与HPV16L1抗体有交叉反应。获得抗HPV5 8L1壳蛋白特异性抗体 ,抗体滴度为 1∶80 ,并用该抗体鉴定了昆虫细胞中表达的HPV5 8L1壳蛋白。结论 HPV5 8壳蛋白在原核细胞中获得有效表达 ,纯化免疫小鼠后能产生抗HPV5 8L1特异性抗体 ,此抗体可用于鉴定真核细胞表达的HPV5
- 田厚文韩立群任皎骆卫峰阮力
- 关键词：人乳头状瘤病毒病毒包膜蛋白质类抗体
- 猴痘病毒感染血清抗体ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2018年
- 目的建立猴痘病毒感染血清IgG抗体检测方法。方法采用合成的猴痘病毒B21R蛋白上的2条混合多肽作为包被抗原,建立猴痘病毒感染人血清IgG抗体间接ELISA检测方法。选取正常成人血清、无关病毒感染血清和猴痘病毒感染者血清标本对多肽抗原特异性进行评价,并优化反应参数。结果猴痘病毒B21R蛋白上的二肽混合抗原与正常血清和无关病毒感染血清均无明显交叉反应,具有较好的抗原特异性。经优化后,混合二肽抗原的最佳包被浓度均为50ng/孔,二抗稀释度为1∶20000。在此条件下塞拉利昂猴痘患者血清在12d和55d的猴痘病毒IgG抗体滴度均为1∶6400。结论初步建立了猴痘病毒感染血清IgG抗体间接ELISA检测方法,为我国应对可能出现的猴痘输入病例提供技术储备。
- 任皎叶飞赵莉管茜茜赵颖宋敬东田厚文谭文杰
- 关键词：猴痘病毒IGG抗体
- 非复制型痘苗病毒NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的构建及免疫效果评价
- 2024年
- 目的对我国非复制型痘苗病毒NTV进行基因改造,以提高其免疫原性。方法通过基于CRISPR-Cas9技术的痘苗病毒同源重组方法,在痘苗病毒F1L基因缺失的同时回插C7L基因,构建NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L。然后将该重组病毒以10^(7) PFU免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISpot方法分别检测修饰株NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的体液免疫和细胞免疫水平,并采用噬斑减少中和实验测定中和抗体水平。结果经PCR和western blot鉴定证明构建的NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的F1L基因缺失,同时C7L基因回插在该区域,且C7L基因能正常表达,说明重组病毒构建正确。NTV-ΔF1L-C7L免疫小鼠后,ELISA结果表明重组病毒NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的IgG抗体水平高于NTV;ELISpot结果亦能够表明该重组病毒能够诱导产生水平更高的IFN-γ;噬斑减少中和实验结果表明,该重组病毒比NTV能够诱导产生水平更高的中和抗体。结论正确构建了NTV基因修饰株NTV-ΔF1L-C7L,相比于NTV,其能诱导更强的体液免疫和细胞免疫,为我国天花或猴痘疫苗的换代产品研发提供参考数据。
- 任皎袁航赵莉豆亚美刘士元孟昕田厚文王文玲谭文杰
- 关键词：痘苗病毒重组病毒免疫原性
- 六株不同地区分离的H7N9流感病毒假病毒制备与生物学特性研究被引量：1
- 2017年
- 目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素（Hemagglutinin,HA）的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感病毒代表株病毒;采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,以HA与神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）作为包膜质粒,包装获得6株带有荧光素酶报告基因的假病毒;通过电镜负染、Western blot检测、感染MDCK后的荧光素酶读值和血凝试验等了解6株假病毒的生物学特性,通过血清交叉中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果 筛选获得6株不同地区分离的H7N9流感病毒代表株并制备了相应的假病毒颗粒,电镜下可观察到典型的流感病毒形态,Western blot可检测到HA、NA和P24的表达;滴度测定结果显示6株假病毒对MDCK细胞的感染力为104- 105TCID50/50μl,血凝活性可达64- 512;SH1上海株H7N9 HA疫苗免疫血清针对6株流感假病毒100TCID50剂量的中和效力不同,提示6株假病毒可用于疫苗的交叉免疫效果评价.结论 成功获得6株H7N9不同地区代表株流感假病毒,为疫苗的免疫效果评价奠定了基础.
- 黄保英李善琴齐香荣任皎宋敬东谭文杰田厚文阮力
- 关键词：假病毒血凝素抗原特性
