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口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因主要表位区的表达及活性检测: 2008年; 根据测定的口蹄疫病毒(FMDV)2C基因序列,设计了一对特异性的表达引物,用于扩增2C基因5′-端174bp和3′-端279 bp连接片段,该区含有较丰富的B细胞表位编码序列。扩增片段通过NcoⅠ和SalⅠ酶切位点插入表达载体pET-30a。序列测定表明,目的基因片段连接正确,按正确的读码框插入表达载体中。重组表达质粒转化BL21(DE3)pLys,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,2C基因主要表位区成功地在大肠杆菌表达,表达产物为约23 ku的融合蛋白,能够与FMDV感染动物血清发生特异性反应,而不与健康和灭活疫苗免疫动物血清反应。该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫转印(EITB)方法提供了所需的材料。; 付元芳卢曾军田美娜张小丽刘在新才学鹏; 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白

口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法: 本发明公开了口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法，包括五种NSP印迹膜条、血清稀释液、25×浓缩PBST洗涤液、膜显色底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、阳性对照血清和阴性对照血清以及20孔血清稀释板；同...; 卢曾军刘在新付元芳曹轶梅孙普包慧芳李平花白兴文陈应理李冬谢宝霞刘湘涛; 文献传递

一种敲降HS3ST5基因的sgRNA及其敲降载体和应用: 本发明提供了一种敲降HS3ST5基因的sgRNA及其敲降载体和应用，本发明属于基因敲除技术领域。本发明利用靶向HS3ST5基因的sgRNA构建敲降HS3ST5的重组载体，经过慢病毒包装后，感染BHK‑21细胞系，得到敲降...; 袁红白兴文卢曾军黄磊宫晓华刘在新孙普李平花包慧芳李冬马雪青陈应理曹轶梅付元芳赵志荀张婧王健

三种大肠杆菌表达的口蹄疫病毒A型多表位蛋白对猪的免疫原性比较被引量：1: 2019年; 【目的】研制猪口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)A型多表位蛋白疫苗,为猪FMDV A型的防控提供安全有效的疫苗。【方法】根据前期试验结果及国内外FMDVA型流行病学信息,设计并合成了3种多表位免疫原基因A10、IA10和FA10。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白纯化复性后,制苗免疫猪。分别于免疫前和免疫后14和28d采血分离血清,用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法检测血清IgG抗体滴度。免疫28d后用FMDV强毒攻毒,以评估免疫保护效果。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果证实A10、IA10和FA10三种蛋白均获得表达,分子量分别为35、57和64 kDa,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV感染阳性血清所识别。LPB-ELISA结果表明,A10+201免疫组IgG滴度低于灭活疫苗组,但高于其他免疫组。攻毒后A10+201免疫组和灭活疫苗免疫组全部猪(5/5)获得保护,IA10+201和FA10+201免疫组80%(4/5)猪保护,A10和FA10免疫组只有20%(1/5)猪保护,而PBS+201组所有猪均未保护。【结论】A10+201免疫保护效果较好,可作为候选疫苗进行进一步评价。; 曹轶梅王兴凯王省李坤付元芳李冬卢曾军刘在新; 关键词：口蹄疫病毒

3B蛋白优势表位缺失的口蹄疫标记疫苗株及其构建方法和应用: 本发明提供一种3B蛋白优势表位缺失的口蹄疫标记疫苗株及其构建方法和应用，该标记疫苗株3B1和3B2非结构蛋白编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.8所示。本发明构建的疫苗株具有3B1和3B2非结构蛋白氨基酸的突变修...; 李平花刘在新卢曾军寻广谨孙普白兴文包慧芳曹轶梅付元芳陈应理李冬马雪青张婧; 文献传递

口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型广谱中和性猪源单克隆抗体及其应用: 本发明公开了口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型广谱中和性猪源单克隆抗体pOA‑6、pOA‑13和pOA‑20。pOA‑6重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；pOA‑...; 李坤卢曾军李凤娟包慧芳曹轶梅李平花孙普白兴文马雪青付元芳袁红赵志荀张婧王健李冬张强

A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2022年; 为了研究A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western-blot与间接免疫荧光试验鉴定其特异性。结果表明,重组SVA VP3蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)以包涵体形式表达,分子质量约为44 ku;制备的家兔多克隆抗体能与SVA表达的VP3蛋白特异性结合,而不与口蹄疫病毒抗原反应,表明制备的SVA VP3蛋白家兔多抗血清具有良好的反应原性和特异性。重组SVA VP3蛋白及其多克隆抗体的成功制备为SVA血清学检测方法的建立、SVA致病机制及VP3蛋白功能的研究提供了材料支撑。; 马雪青孙婕妤李平花付元芳朵瑞锦杨林张婧白兴文刘在新卢曾军孙普; 关键词：VP3蛋白原核表达多克隆抗体

一种口蹄疫病毒广谱非中和抗体及其在制备增强诱导产生中和抗体的试剂中的应用: 本发明提供了一种口蹄疫病毒广谱非中和抗体及其在制备增强诱导产生中和抗体的试剂中的应用，属于抗体技术领域。一种口蹄疫病毒广谱非中和抗体，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ I...; 曹轶梅李坤卢曾军包慧芳孙普付元芳李平花张婧马雪青赵志荀袁红王健白兴文李冬刘在新

一种口蹄疫基因工程混合表位疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种口蹄疫病毒混合表位疫苗及其制备方法，该疫苗由四部分组成，由中国型、泛亚、缅甸98三个谱系O型口蹄疫病毒主要中和性抗原表位组成的串联B细胞表位重组蛋白BI，其基因序列为SEQ ID NO：1，氨基酸序列为S...; 卢曾军刘在新曹轶梅孙普李冬包慧芳李平花付元芳陈白兴文应理谢宝霞; 文献传递

针对境外口蹄疫疫情的疫苗储备毒株的构建和生物学特性分析: 2017年; 针对亚洲区域内O/PanasiaⅡ和A/Iran05口蹄疫流行毒给我国养殖业造成的严重威胁,以O/HN/93和A/GDMM/2013感染性克隆为骨架,替换了完整的结构蛋白编码基因P1,构建嵌合病毒作为疫苗储备毒株。分别用间接免疫荧光、RT-PCR、基因测序、电子显微镜、蚀斑表型及一步生长曲线鉴定和分析重组病毒。结果显示,成功拯救到含O/PanasiaⅡ和A/Iran05型毒株P1基因的嵌合口蹄疫病毒,且嵌合基因可以随病毒在细胞上稳定传代,但P1基因的替换在一定程度上影响了两嵌合病毒在BHK21细胞上的复制能力,使得嵌合病毒在BHK21上完全CPE时间长达19 h左右。2株嵌合病毒的成功拯救可为未来我国边境地区口蹄疫的有效防控提供坚实的技术储备。; 寻广谨李平花孙普马雪青白兴文卢曾军陈应理包慧芳李冬曹轶梅付元芳张婧刘在新; 关键词：口蹄疫病毒 P1基因

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付元芳