重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学重点实验室
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
- 相关机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 骨组织金属种植体的临床应用反思与发展前景被引量：1
- 2015年
- 近年来,由于生物医学工程和组织工程学及其相关学科,如材料学、生物力学、表面化学、蛋白质组学、基因组学等的发展,以及激光烧结成形,计算机辅助设计与制造（CAD-CAM）等相关制备工艺和micro CT等检测技术的突飞猛进的发展,体内植入物也得到飞速的发展[1-2]。常用的体内植入物包括心脏瓣膜、假体眼球、骨组织植入物等,而骨组织植入物包括修复患者关节的人工节关,长骨和脊柱受伤的人工骨椎、骨科固定板和骨钉，修复牙列缺损、缺失的牙科种植体等。
- 吴晓绵胡小蕾邓锋
- 关键词：金属种植体聚醚醚酮钛
- 过表达SERPINB2上调RB1水平抑制白血病K562细胞的生长
- 2018年
- 慢性粒细胞白血病（慢粒）急变期的治疗是目前的重要问题,临床上亟需要找到新的分子治疗靶点。本研究使用基因集群富集分析软件（gene set enrichment analysis,GSEA）分析基因表达综合数据库（gene expression omnibus,GEO）中慢粒临床样本及小鼠细胞模型的基因表达谱数据,获得与慢粒急变期相关的基因集群,然后从中选择丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员B2（SERPINB2）作为研究对象。应用分子克隆技术在空载质粒p Adtrack-CMV的基础上构建p Adtrack-CMV-SERPINB2重组质粒,使用电穿孔方法将上述质粒分别转入慢粒细胞系K562细胞,运用细胞免疫荧光技术检测SERPINB2在细胞内的表达与分布,采用CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,使用流式细胞术检测细胞周期,通过Western blotting实验检测SERPINB2、BCR/ABL以及RB1的表达。结果表明,成功构建了p Adtrack-CMV-SERPINB2并转入K562细胞,细胞免疫荧光实验显示SERPINB2主要在细胞浆中分布。与对照组相比,在K562细胞中过表达SERPINB2可轻微抑制K562细胞的增殖（p〈0.001）,明显降低K562细胞的克隆形成能力（p〈0.01）并导致G0/G1期的细胞比例增多（p〈0.001）。Western blotting显示BCR/ABL表达无明显变化,SERPINB2、RB1表达水平增高。综上所述,SERPINB2可通过上调细胞内RB1的水平,使细胞周期更多的停留在G1期,从而对K562细胞的增殖与克隆形成能力产生抑制作用。
- 张晖黄峥兰黄宁姝王腾冯文莉
- 关键词：慢性粒细胞性白血病基因表达谱K562细胞
- 骨形成蛋白9对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响
- 2018年
- 目的：人骨形成蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响。方法：使用过表达BMP9基因的腺病毒（Ad BMP9）感染BIU-87细胞,采用定量PCR检测BMP9 mRNA的表达,Western blot检测BMP9蛋白及BMP9下游相关信号通路蛋白的表达;MTT及集落形成实验检测BIU-87细胞增殖能力;划痕愈合实验及TranswellTM小室迁移实验检测BIU-87细胞迁移能力。结果：感染Ad BMP9后,BIU-87细胞中BMP9的mRNA水平和蛋白质水平均显著增加;过表达BMP9后,BIU-87细胞的体外增殖和迁移能力明显增加;Western blot结果显示BMP9可明显激活AKT信号通路。结论：高表达BMP9可能通过激活AKT信号通路促进人膀胱癌BIU-87细胞的增殖和迁移。
- 苟理尧刘梦瑶夏菁万群孙恃雷唐敏张彦
- 关键词：膀胱癌BIU-87细胞细胞增殖细胞迁移
- BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化被引量：3
- 2019年
- 目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白质表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白质Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白质水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白质表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。
- 程瑜施琼安利钦范梦恬皇改改翁亚光
- 关键词：骨形态发生蛋白7成骨分化
- 肺炎链球菌ΔA146Ply蛋白抵抗鼻咽部感染的研究
- 2018年
- 本研究旨在研究无佐剂添加的肺炎链球菌ΔA146Ply蛋白的免疫保护作用。利用大肠杆菌原核表达系统成功表达ΔA146Ply后用Ni2＋柱纯化并去除内毒素。将ΔA146Ply蛋白刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）24 h后收集细胞上清,检测得细胞因子IL-6、TNF-α、IL-12p70分泌显著增加。以无佐剂添加的ΔA146Ply、加Al佐剂的ΔA146Ply及PBS分别免疫小鼠后,采用ELISA试剂盒检测血清特异性抗体效价,结果显示含ΔA146Ply的免疫组小鼠的抗体效价较PBS组显著升高,而加Al佐剂组与无Al佐剂组之间无显著差异;取脾细胞再刺激后收集细胞上清,测得含ΔA146Ply的免疫组小鼠的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A分泌量较PBS免疫组显著增高,加Al佐剂的ΔA146Ply免疫组的IFN-γ和IL-17A分泌量较无Al佐剂的ΔA146Ply免疫组显著增高,但IL-4的分泌二者无显著差异。末次免疫后鼻腔攻毒肺炎链球菌CMCC31693（19F）,3 d后铺板计细菌载量,结果显示无佐剂ΔA146Ply免疫组小鼠的鼻咽部及肺部定植细菌较PBS组显著减少,而加Al佐剂组只有肺部定植细菌的减少且与无佐剂ΔA146Ply免疫组无差异。HE染色和炎症细胞因子检测结果显示,含ΔA146Ply免疫组的小鼠肺部炎症反应都较PBS组显著减轻。这些结果显示ΔA146Ply无需Al佐剂辅助即可诱导小鼠产生较强的免疫效应,有效抵抗肺炎链球菌的鼻咽部感染。
- 吴静雯王箭王继超王晓芳张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌蛋白疫苗佐剂
- 聚醚醚酮种植材料TiO_2颗粒喷砂处理的生物活性研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨Ti O2颗粒喷砂处理聚醚醚酮(PEEK)的最佳粒度范围。方法用5种粒度范围的Ti O2颗粒(A^E组)对PEEK进行喷砂处理,进行表面粗糙度检测,观察细胞黏附、细胞增殖、细胞形貌,并检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果 PEEK的表面粗糙度随着喷砂Ti O2颗粒的粒度增大而增加。同时发现了多个峰值的存在,细胞黏附实验OD值的峰值出现在C组(180~212μm Ti O2颗粒进行喷砂),数值为0.566 2。经过14 d培养,成骨细胞ALP活性峰值出现在D组(>212~355μm Ti O2颗粒进行喷砂)。结论 PEEK表面喷砂的最佳Ti O2颗粒粒度范围为180~355μm,可为今后PEEK表面改性研究提供重要参考。
- 吴晓绵胡小蕾邓锋
- 关键词：生物力学生物相容性材料碱性磷酸酶聚醚醚酮
- HPLC-电化学法检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质
- ＜正＞嗜铬细胞瘤是一种主要存在于肾上腺的罕见肿瘤,以大量分泌儿茶酚胺为特点,可以造成严重的心、脑、肾血管损害,甚至死亡[1]。目前国内对嗜铬细胞瘤的生化诊断主要依赖于血浆和尿液中儿茶酚胺及其代谢产物香草扁桃酸（Vanil...
- 杨香春甄乾娜朱明松杨婷高洁莹丁敏
- 关键词：嗜铬细胞瘤
- 文献传递
- EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中表达被引量：1
- 2012年
- 目的研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控。方法氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达。生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点。并经染色质免疫共沉淀(ChIP)与双荧光报告基因实验验证EKLF与这些位点结合的生物学意义。结果 Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,miR-96表达显著升高,且在48 h表达最高(3.94±0.64,P<0.05)。生物信息学分析显示miR-96转录起始位点上游2.0 kb内含有多个EKLF结合位点。经ChIP验证这些位点有EKLF的结合,且EKLF与这些位点结合能募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)结合,起始转录。进一步的双荧光报告基因实验也证明EKLF对miR-96转录起始点上游序列具有转录激活作用。结论 EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中的表达。
- 蒋凤兵阎文婷朱勇王斌马艳妮余佳施琼
- 关键词：红系分化
- 石蒜碱通过调控MAPK/ERK信号通路抑制人结肠腺癌LoVo细胞生长被引量：6
- 2020年
- 目的:探讨石蒜碱(lycorine)对人结肠腺癌LoVo细胞活力、凋亡和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法:不同浓度(1~8μmol/L) lycorine处理LoVo细胞,CCK-8法检测细胞活力;划痕愈合和Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力;Hoechst染色及流式细胞术实验检测凋亡改变;萤光素酶报告基因系统检测MAPK/ERK信号通路活化情况;同时采用Western blot法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志物、凋亡相关蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白水平的变化。结果:与空白对照组相比,lycorine处理组LoVo细胞的活力和迁移侵袭能力受到显著抑制(P<0.05),同时EMT相关标志物基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7, MMP-7)和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调(P<0.05),而凋亡细胞数及cleaved caspase-3无显著差异(P>0.05)。此外,lycorine处理组Elk1/SRF转录活性降低,ERK1/2磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:石蒜碱可通过调控MAPK/ERK信号通路及抑制EMT过程LoVo细胞的活力及迁移侵袭能力,从而在体外主要发挥生长抑制的抗肿瘤作用。
- 张平袁晓慧喻婷婷黄华坤杨春梅张露露罗小辑罗进勇
- 关键词：石蒜碱LOVO细胞上皮-间充质转化MAPK/ERK信号通路细胞活力
- 终点平衡尿酸酶法与动力学尿酸酶法联用测定尿酸
- 2011年
- 目的：考察终点平衡尿酸酶法和动力学尿酸酶法联用测定尿酸的可行性和线性范围。方法：在25℃下1.2 ml硼酸钠缓冲液（0.20 mol/L,pH 9.2）中用293 nm吸收跟踪尿酸酶反应;测定加入5μl尿酸酶液前反应体系吸收,加入5μl苛求芽孢杆菌尿酸酶液后记录5.0 min内吸收变化。终点平衡法以尿酸酶反应前吸收为起点而尿酸完全氧化后吸收为本底,二者之差为尿酸净吸收且同尿酸浓度成正比;动力学法分析尿酸酶反应过程预测本底。分析模拟尿酸酶反应曲线,探索从终点平衡法转换为动力学法的尿酸浓度界限值;实验测定联用法的可行性和线性范围。结果：分析40 U/L苛求芽孢杆菌尿酸酶模拟反应曲线,发现两种方法转换的尿酸浓度界限值可为5.0μmol/L;分析实验反应曲线证实此界限值可行。在40 U/L尿酸酶时终点平衡法测量范围1.0~6.0μmol/L;联用法测量范围1.5~60μmol/L且对30μmol/L黄嘌呤有抗性;在5.0μmol/L以下变异系数小于10%而5.0μmol/L以上可小于5%。结论：这种联用法测定尿酸成本更低、线性范围更宽且效率高。
- 龙高波杨宪峰刘红博蒲军杨晓兰廖飞
- 关键词：尿酸联用法
