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重庆医科大学基础医学院免疫学教研室: 作品数：50 被引量：73H指数：4; 相关作者：王灿蔚齐杰玉李念虹何云燕舒燕更多>>; 相关机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所哈尔滨医科大学基础医学院免疫学教研室哈尔滨医科大学基础医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学历史地理更多>>

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结直肠癌类器官的反应性T细胞受体筛选及功能鉴定: 2024年; 目的本研究通过建立基于结直肠癌(colorectal cancer,CRC)类器官模型以及CRC反应性肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)扩增和分离,筛选肿瘤特异性T细胞受体(T cell receptor,TCR)并进行功能验证,为结直肠癌个体化过继性T细胞免疫治疗的临床转化提供技术平台和研究基础。方法通过体外3D培养技术构建结肠癌患者组织来源的类器官模型,并利用HE染色和免疫组化进行形态学和特征分子表达检测。随后,将CRC类器官与TIL共培养,通过流式细胞技术分选反应性TIL,通过单个T细胞受体基因克隆技术分析反应性TCR克隆特征。进一步通过细胞毒性实验对TCR功能进行验证。结果通过形态学、代表性分子(CK20和CDX2)表达水平验证了结直肠癌类器官与患者肿瘤具有高度相似性。成功筛选到CD137表达上调和IFN-γ分泌增加的结直肠癌反应性T细胞,其中TCR2-T展现出较好的肿瘤反应性和体外肿瘤杀伤功能。结论建立了基于CRC-Org的反应性TCR筛选和功能验证平台,为结直肠癌个体化T细胞治疗转化应用提供技术平台。; 梅瑶瑶王应明韩晓建申美莹李娅魏正强金艾顺; 关键词：T细胞受体抗肿瘤

冠蛋白-1通过调控CD14的表达影响巨噬细胞极化: 2021年; 目的探讨冠蛋白-1(Coronin-1)与巨噬细胞极化的相关性及可能机制。方法建立M1、M2型RAW264.7鼠巨噬细胞模型,通过Real-time PCR和Western blot检测Coronin-1的表达;构建过表达(Coronin-1 Plus)、敲除(Coronin-1 KO)细胞系,通过Real-time PCR和Western blot检测过表达、敲除和正常表达Coronin-1细胞组的一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)水平;利用蛋白质互作网络(PPI)和GO分析Coronin-1和CD14相关蛋白的互作与富集,再通过Real-time PCR和Western blot检测过表达、敲除和正常表达Coronin-1细胞组的CD14水平以及经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/mL)处理后的iNOS水平;构建CD14敲减的细胞系(Control-CD14 KD)、CD14敲减的Coronin-1 Plus细胞系(Coronin-1 Plus-CD14 KD),经LPS(100 ng/mL)处理后,通过Real-time PCR和Western blot检测iNOS的表达。结果成功构建M1、M2型巨噬细胞模型,M1型Coronin-1表达显著高于对照组(P<0.05);Coronin-1 Plus组iNOS mRNA的表达显著低于对照组(P<0.01),Coronin-1 Plus组CD14的表达显著高于对照组(P<0.05);经LPS处理后,Coronin-1 Plus组iNOS的表达显著高于对照组(P<0.01);经LPS处理的Control-CD14 KD、Coronin-1 Plus-CD14 KD组细胞的iNOS水平与对照组比较,差异无统计学意义。结论巨噬细胞向M1型极化导致了Coronin-1的高表达,而Coronin-1过表达并不能直接导致细胞向M1型极化,但Coronin-1过表达可导致CD14表达上调,Coronin-1可通过CD14途径促进LPS诱导巨噬细胞向M1型极化。; 范晓霞陈全孙雪花田若源; 关键词：巨噬细胞一氧化氮合酶 CD14 脂多糖

ILK对LPS诱导肺癌A549细胞分泌免疫逃逸相关因子的影响被引量：2: 2013年; 目的探讨内源性过表达人整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)及外源性脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对肺癌A549细胞分泌VEGF、TGF-β、IL-6的相关性。方法分别设置空白对照组、过表达ILK组、LPS诱导组、LPS诱导过表达ILK组,通过ELISA双抗夹心法,分别检测各组细胞分泌VEGF、TGF-β、IL-6的水平;应用RT-PCR法检测各组细胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)p85α的相对转录水平。结果过表达ILK组、空白细胞的培养上清液和细胞裂解液相比较,各因子水平无显著差异(P>0.05);与对照组相比较,过表达ILK组和LPS诱导组细胞所分泌的VEGF、TGF-β、IL-6因子的水平均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05),且LPS诱导的ILK过表达组的各因子升高更为显著(P<0.05);LPS诱导组细胞的PI3Kp85α的相对转录水平显著高于过表达ILK组和空白对照组(P<0.05)。结论内源性过表达ILK基因和外源性LPS诱导均可促进A549细胞产生免疫逃逸相关因子,LPS促瘤效应机制可能与ILK相关,LPS可能通过PI3K信号分子促进了ILK的生物学效应。; 刘璟陈全陈炎胡海艳刘革力张路渝; 关键词：肺癌 ILK LPS 免疫逃逸

肿瘤特异性hTERT启动子与Survivin启动子在肺癌A549细胞中的转录活性研究被引量：5: 2009年; 目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。; 李奕璇陈全朱大冕; 关键词：人端粒酶逆转录酶肺癌

人颗粒溶素活性肽和小鼠白细胞介素-12基因真核穿梭共表达质粒的构建与真核表达: 2009年; 目的构建含分枝杆菌复制子Orim,可分泌表达人颗粒溶素相对分子质量为9000的活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核穿梭共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段测序对质粒进行鉴定。同时,将mIL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE41-S9K/mlL-12。然后,将分支杆菌复制子Orim亚克隆入真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mlL-12,形成穿梭共表达质粒。采用RT-PCR、免疫细胞化学法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论成功构建穿梭共表达质粒pBM9,并能体外表达。; 张黎王瑜伟何永林帖儒修; 关键词：颗粒溶素白细胞介素12 真核表达

RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应被引量：3: 2014年; 通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。; 王灿蔚陶崑齐杰玉邓一平; 关键词：BCR ABL K562细胞

miR-30a的高表达促进K562细胞的凋亡被引量：1: 2019年; 目的:探讨miR-30a的高表达对慢性髓系白血病K562细胞株的促凋亡作用及其机制。方法:构建pEGFP-pre-miR-30a重组质粒并转染K562细胞,采用实时定量PCR法检测miR-30a和BCR/ABL mRNA的表达水平,应用annexinV-FITC/PI双集流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析K562细胞凋亡百分率,应用蛋白印迹法(Western blot)分析BCR/ABL融合蛋白、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX及PTEN、AKT、p-AKT的变化。结果:测序与酶切图谱证实成功构建重组质粒。与pEGFP-C1-K562阴性对照组和K562空白对照组比,重组质粒pEGFP-pre-miR-30a转染组miR-30a表达水平显著升高,BCR/ABL mRNA与蛋白表达明显下调,凋亡细胞所占比例明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白BCL-2水平降低,促凋亡蛋白BAX表达增加,抑癌蛋白PTEN表达明显上升,AKT无明显变化,但活性形式的p-AKT显著降低,差异均有统计学意义。结论:高表达的miR-30a能抑制K562细胞癌基因BCR/ABL mRNA及蛋白的表达并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制BCR/ABL-PTEN/AKT信号通路的活性有关。; 徐敏高雯琬雒钰杰王毅陶崑; 关键词：BCR/ABL

在法医学专业开设学科整合型PBL课程的实践与探索被引量：5: 2016年; 法医学是实践性和应用性较强的学科,在法医学本科专业学生中,开设多学科整合型PBL课程,让学生早期接触法医实例,建立基础与法医的联系,提高学生学习兴趣、自主学习和逻辑思维能力、分析和解决问题能力,渐进性培养了学生的法医逻辑思维模式,并且丰富学生在法律、人文及伦理等方面的知识。; 陈全邓世雄唐仁宽李剑波刘云志王娅兰余华荣; 关键词：PBL 整合课程法医学

TLR7/8激动剂R848体外诱导记忆B细胞分化抗原特异性浆细胞的方法研究: 2020年; 目的为了从PBMCs获得病原体特异性浆细胞,我们建立了TLR7/8激动剂R848体外诱导记忆B淋巴细胞分化浆细胞的方法。方法使用TLR7/8激动剂R848联合细胞因子组合,诱导接种乙肝疫苗(3年及以上)的健康志愿者来源的PBMCs,进行体外活化和分化浆细胞。分别利用ELISA和ELISPOT检测培养液上清中总IgG、HBsAg特异性IgG以及总抗体分泌细胞(ASCs)和HBsAg抗原特异性ASCs。结果成功建立R848体外诱导PBMCs中记忆B淋巴细胞分化浆细胞的方法。R848(使用质量浓度在1~2.5μg/ml)仅与IL-2联合使用,最早在第5天即可检测到特异性ASCs。结论通过该方法可以从患者恢复期少量(仅需5~10 ml)的外周血中获得抗原特异性抗体分泌细胞用于分析和分选,为中和抗体的制备提供方法。; 程婕刘晔孙欣黄晶晶金艾顺; 关键词：体外活化外周血单个核细胞浆细胞

含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖: 2015年; 目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。; 舒燕齐杰玉王灿蔚于淑静陶崑; 关键词：腺病毒 K562细胞

重庆医科大学基础医学院免疫学教研室

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