吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室
- 作品数：80 被引量：98H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 新城疫病毒样颗粒对树突状细胞活化的影响
- 新城疫病毒样颗粒(NDV VLPs)是由基质蛋白(M)为病毒骨架,装配血凝素-神经氨酸酶和/或融合蛋白等。已有研究表明,NDV VLPs 能诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答。然而,关于NDV VLPs 如何激活天然免...
- 钱晶欧阳伟王晶宇王晓丽夏兴霞诸玉梅王永山丁壮
- 关键词：新城疫病毒病毒样颗粒树突状细胞活化天然免疫
- 狂犬病病毒感染N2a细胞引起的转录体差异表达
- 2024年
- 狂犬病是一种人畜共患疾病,对全球公共卫生构成极大威胁。狂犬病病毒(RABV)呈嗜神经性传播,会引发宿主严重的神经功能紊乱,致死率几乎100%。为鉴定RABV影响神经细胞功能的重要基因,本研究采用RNA测序(RNA-seq)方法建立并分析了固定毒株CVS-11感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a,N2a)的mRNA表达谱,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析确定差异表达基因(DEGs)。结果显示,在CVS-11毒株感染的N2a中,共有415个差异表达基因,其中89个为上调基因,326个为下调基因。差异表达基因涉及多种生物学过程,包括轴突传导信号通路、胆固醇代谢通路、氮代谢信号通路、鞘糖脂生物合成信号通路等,其中多种DEGs已被证明与RABV感染密切相关,从中挑选出12个与轴突传导、抗原处理与呈递等通路相关的差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,其变化趋势与RNA-seq结果一致。本研究检测了神经细胞在RABV感染条件下基因转录组变化,为探究RABV感染对神经细胞功能的影响机制提供了新的线索。
- 刘晓敏郭艺迪果鑫张艳楠王重阳汪滋辰张丹玮张茂林
- 关键词：狂犬病病毒N2A细胞神经系统转录组
- 一株产气荚膜梭菌烈性噬菌体的分离鉴定及特性分析
- 2024年
- 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种常见的革兰阳性厌氧条件致病菌,在自然界中广泛存在,可引起腹泻、气性坏疽等疾病。临床上采用抗生素治疗产气荚膜梭菌感染,但细菌会通过突变、耐药质粒传播等方式产生耐药性,使产气荚膜梭菌在抗生素的环境压力下得以存活。因此寻找和开发新制剂来替代抗生素或作为饲料添加剂以定向清除机体携带的产气荚膜梭菌或预防感染是十分重要的。本研究从污水中分离得到了一株产气荚膜梭菌烈性噬菌体vB_CPP_AT。利用透射电镜观察噬菌体形态,通过裂解谱、MOI、酸碱及温度耐受性等分析该产气荚膜梭菌噬菌体基本生物学特性。研究发现vB_CPP_AT噬菌体为短尾噬菌体,在60 min时呈暴发式增长,最佳MOI为0.1,专一性裂解产气荚膜梭菌,裂解率为40%(8/20),与参试的其他细菌不发生裂解反应,具有良好的热稳定及酸碱耐受性。vB_CPP_AT噬菌体基因组为双链DNA,全长16 790 bp,具有20个开放阅读框。基因组分析vB_CPP_AT噬菌体为1株新的产气荚膜梭菌烈性噬菌体。该结果为噬菌体vB_CPP_AT应用于产气荚膜梭菌的临床治疗奠定了基础。
- 李梦娇宋战昀刘博许智强刘月王秋霖冯新
- 关键词：产气荚膜梭菌基因组
- 蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2022年
- 利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)E蛋白第三结构域(Domain Ⅲ,D Ⅲ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-D Ⅲ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白TBEV E-D Ⅲ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h;TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10%。结果表明,成功表达并纯化了TBEV E-D Ⅲ重组蛋白,以其为包被抗原建立的TBEV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。
- 张梦瑶焦翠翠黄培金宏丽白玉洁龚志远宋雨濛李媛媛张海丽王化磊
- 关键词：蜱传脑炎病毒E蛋白间接ELISA
- 吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达
- 2017年
- 为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。
- 冯嘉轩杨莹莹李俊姣阎慧
- 关键词：莱姆病伯氏疏螺旋体流行病学
- 新城疫病毒mRNA疫苗的构建及鉴定
- 2023年
- 信使RNA(messenger RNA,mRNA)的核酸疫苗是近年来兴起的一种新型疫苗技术。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的血凝素-神经氨酸酶(HN)是NDV的主要保护性抗原,可诱导机体产生中和抗体,是新城疫(Newcastle disease,ND)新型疫苗研发的重要靶点。本研究将NDV HN基因连接到含有T7启动子的载体中,并在其5′UTR和3′UTR分别引入人-β球蛋白的非编码区域以增强转录的mRNA稳定性,经质粒线性化、体外转录、cap加帽处理、mRNA纯化制备NDV HN-mRNA,将其转染至HEK-293T细胞中验证NDV HN-mRNA的表达效果,Western blot和免疫荧光试验结果表明构建mRNA候选疫苗可在HEK-293T细胞中高效表达抗原蛋白,为ND新型疫苗的研发提供新的思路。
- 崔苗苗陈凯楠李金斗丁佳欣陈铭桦冯嘉轩周铁忠舒秀伟刘晓雷丁壮
- 关键词：新城疫病毒HN蛋白体外转录
- 传染性法氏囊病毒VP2蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建和鉴定被引量：1
- 2022年
- 将传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)强毒株的保护性蛋白VP2替换新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白胞外域部分,利用杆状病毒表达系统,构建了含有IBDV候选抗原表位VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-VP2,并通过间接免疫荧光试验鉴定杆状病毒蛋白表达正确。rBV-VP2与NDV-HN、NDV-F、NDV-M组装成病毒样颗粒(cVLPs),形成含有IBDV候选抗原表位的IBD-ND二联病毒样颗粒(IBD-ND cVLPs),利用Western blot鉴定cVLPs各组分蛋白,证明IBD-ND cVLPs各组分组装正确。IBD-ND cVLPs的构建可为我国养禽业提供一种绿色、安全且可一针多防的IBD-ND二联病毒样颗粒疫苗候选株。
- 邵亚男冯嘉轩李金斗郭春红丁佳欣陈铭桦丁伟单春晖张頔丁壮
- 关键词：新城疫病毒传染性法氏囊病毒VP2蛋白病毒样颗粒
- 羊传染性脓疱病毒ORF120蛋白以剂量依赖性方式抑制宿主细胞非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)的表达被引量：1
- 2023年
- 羊传染性脓疱病毒(ORFV)是重要的人兽共患病病原,能够通过劫持宿主蛋白等多种策略逃避机体的抗病毒免疫反应,导致重复感染的发生。非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)是一种多功能核蛋白,参与mRNA剪切、DNA损伤修复、肿瘤发生以及炎症反应等多种生物学过程。本研究首先利用酵母双杂交、免疫共沉淀(Co-IP)等技术证实ORF120蛋白与宿主蛋白NONO存在相互作用。借助于激光共聚焦显微镜观察病毒ORF120蛋白和宿主NONO蛋白的定位分布,发现ORF120蛋白与NONO蛋白在细胞核内存在共定位,进一步证实ORF120蛋白和NONO蛋白存在互作。此外,利用Western blot方法证实ORF120蛋白和NONO蛋白之间存在相互抑制作用,且呈剂量依赖性。上述结果表明,ORF120蛋白与宿主NONO蛋白存在剂量依赖性的相互抑制作用,该结果将为更好地理解ORFV免疫逃逸分子机制及开发新的抗病毒手段提供重要依据。
- 于昭辉周艳龙吕丽君刘兴源徐梦实方梓煜李卓梅关继羽高丰赵魁
- 关键词：羊传染性脓疱病毒
- 基因Ⅱ、Ⅶ型二价新城疫病毒样颗粒的制备和鉴定被引量：6
- 2018年
- 将基因Ⅶ型新城疫NA-1株F、HN基因的胞外域与基因Ⅱ型新城疫Lasota株F、HN基因的胞内域及跨膜域进行融合,并命名为rNA-1 F/HN。利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有新城疫LaSota株M、F、HN等3个结构基因及rNA-1F、rNA-1 HN基因的重组杆状病毒rBV-LaSota M、rBV-LaSota F、rBV-rNA-1 F、rBV-LaSota HN、rBV-rNA-1 HN。将几种重组杆状病毒共感染Sf9细胞96h后收取上清,经超速离心及蔗糖密度离心纯化病毒样粒子（virus-like particles,VLPs）,并利用Western blot方法和透射电子显微镜技术检测,结果显示目的蛋白均正确表达且组装成与野生型NDV形态大小相似的VLPs。结果表明：成功制备了新城疫标准疫苗株（LaSota株）及流行强毒株（NA-1株）二价NDV VLPs,为当前新城疫的防控提供新策略。
- 丁佳欣李金斗刘亚林张国军姜翠翠徐小洪钱晶于喜冰吴金尹仁福丁壮
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统
- 鸡毒支原体TM-1蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建及鉴定被引量：2
- 2021年
- 鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染引起的禽类的慢性呼吸道病(chronicrespiratory disease,CRD)与新城疫(Newcastle disease,ND)是严重危害禽类的两种重要疾病,可呈并发或继发感染,给养禽业造成巨大的经济损失。因此,研制安全有效、免疫程序简便的ND-CRD二联疫苗显得极为重要。本研究将MG国际参考株MG R(low)株的保护性蛋白TM-1采取以替换新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)NDV-HN胞外域的方式与我国NDV流行株(基因Ⅶ型)的HN、F蛋白共同嵌合至病毒样颗粒(VLPs)表面,使其表面展示3种结构蛋白MG-TM-1、NDV-HN和NDV-F。经鉴定,间接免疫荧光显示该cVLPs各组分蛋白均正确表达;Western blot结果显示,该cVLPs可与NDV M、NDV F、NDV HN、MG TM-1的特异性阳性血清发生反应;透射电镜观察可见大小约为100nm的粒子,表面展示纤突结构,呈现典型的病毒形态,与野生型NDV形态相似,最终成功构建嵌合型病毒样颗粒MG-ND cVLPs。本试验成功制备的MG-ND cVLPs为研制新型ND与CRD二联疫苗提供候选疫苗,并为当前NDV与MG共感染的防控提供新策略。
- 辛梅张頔李金斗丁佳欣于喜冰徐小洪丁伟邵亚男单春辉丁壮
- 关键词：新城疫病毒鸡毒支原体病毒样颗粒
