温州医科大学检验医学院、生命科学学院检验医学教育部重点实验室 作品数:13 被引量:28 H指数:4 相关作者: 刘丹慧 陈静怡 更多>> 相关机构: 云南农业大学动物医学院 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 衢州市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
具核梭杆菌通过调节肠道代谢产物丁酸钠上调Cdk1促进结直肠癌发展 被引量:4 2021年 该文探讨了肠道微生物具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)通过调节代谢产物丁酸钠(NaB)对结直肠癌(CRC)发生发展的影响及其分子机制。提取临床组织RNA和蛋白,RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织与正常/癌旁组织Cdk1的mRNA及蛋白表达,同时检测具核梭杆菌的mRNA的相对水平,并分析其与Cdk1的相关性。具核梭杆菌处理结直肠癌细胞24 h后检测周期相关蛋白Cdk1和P21的表达水平,核磁共振检测培养基上清差异代谢物。不同浓度差异代谢物NaB处理结直肠癌细胞DLD-1、SW480、HCT116,使用MTT和克隆形成实验检测DLD-1、SW480、HCT116增殖能力。流式细胞术检测NaB对结直肠癌细胞SW480周期阻滞位点,Western blot检测周期相关蛋白Cdk1、P21、C-myc的表达水平。流式细胞术检测NaB处理后结直肠癌细胞SW480凋亡率变化情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Casepase3、Cleaved-PARP、Bcl-2的表达水平。采用MTT实验检测不同MOI具核梭杆菌作用结直肠癌细胞4、8、24 h后对其增殖能力的影响。将结直肠癌细胞与具核梭杆菌共培养24 h,Western blot检测相关蛋白Cdk1、c-myc、Cleaved-Caspase3的表达情况。结果显示,在肿瘤组织中Cdk1蛋白水平和mRNA水平均明显高于正常/癌旁组织(P<0.05),并且Cdk1与具核梭杆菌mRNA表达水平存在一定相关性。具核梭杆菌处理结直肠癌细胞DLD-1和HCT116后,Western blot结果显示Cdk1和P21蛋白水平上升。核磁共振结果表明,菌处理组代谢模式与未处理组存在明显差异,主要代谢物NaB相对含量明显低于未处理组(P<0.01)。使用1 mmol/L NaB处理结直肠癌细胞系DLD-1、SW480、HCT11624 h后,细胞生存率分别为(89.18±1.92)%、(85.07±0.61)%、(83.59±2.18)%,且随着药物浓度升高,药物对细胞活性的抑制率逐步上升。同时,经1 mmol/L NaB处理后,DLD-1、HCT116和SW480细胞的克隆形成率相比于对照分别下降了(20.07±4.85)%、(36.47±5.31)%、(31.13±5.22)%。� 方晓婷 吴依依 余婷婷 忻诗君 娄利琴 李晨 高洪昌 周燕 楼永良 李祥关键词:具核梭杆菌 结直肠癌 CDK1 miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路对狼疮性肾炎患者肾小球系膜细胞增殖及炎性因子分泌的影响 被引量:6 2021年 目的:探讨miR-21靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖及炎性因子分泌的影响。方法:选取在我院经肾穿刺活检诊断为LN的30例患者的肾组织标本,qRT-PCR和western blot检测狼疮性肾炎肾组织中miR-21和PTEN的表达水平;HMCs随机分为5组:NC mimics组、miR-21 mimics组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-PTEN组和miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组;TargetScan预测miR-21与PTEN的结合位点;双荧光素酶报告基因验证miR-21与PTEN的靶向关系;细胞克隆形成实验检测miR-21靶向PTEN对HMCs增殖能力的影响;细胞流式术检测miR-21靶向PTEN对HMCs凋亡率的影响;ELISA检测miR-21靶向PTEN对HMCs炎性因子生成的影响;Western blot检测miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路相关蛋白的表达。结果:miR-21在狼疮性肾炎肾组织中高表达(P=0.043),PTEN在狼疮性肾炎肾组织中低表达(P=0.037);miR-21与PTEN存在靶向关系,且miR-21靶向下调PTEN的表达(P=0.003);与NC mimics组比较,miR-21 mimics组细胞集落数目增加(P=0.003),凋亡率下降(P=0.003),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(均P=0.000),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.025,P=0.004);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.032),凋亡率上升(P=0.035),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.037,P=0.029),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.002)、PI3K和AKT蛋白表达水平明显下调(均P=0.003);与miR-21 mimics组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.003),凋亡率上升(P=0.000),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.004,P=0.004),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平下调(P=0.031,P=0.039);与pcDNA3.1-PTEN组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目增加(P=0.029),凋亡率下降(P=0.031),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(P=0.000,P=0.003,P=0.003),PTEN蛋白表达水平下 刘春雅 金晶 李玉芳 喻敏 姜毅 徐利鸳关键词:MIR-21 PTEN PI3K/AKT通路 人肾小球系膜细胞 增殖 炎性因子 RAP1在肝细胞癌中的表达及其功能机制研究 被引量:2 2021年 RAS相关蛋白1(RAS-associated protein 1,RAP1)是属于RAS家族的一种小分子G蛋白,被报道与多种癌症有关。然而,RAP1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用及机制尚不清楚。TCGA和GTEx联合分析显示,HCC组织中RAP1A和RAP1B的mRNA水平显著高于正常肝组织。免疫组织化学技术和蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)分析均证实,HCC患者癌组织中的RAP1蛋白水平高于其癌旁正常组织。体外研究表明,与对照细胞相比,下调RAP1表达可以减弱HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。从机制上说,下调RAP1表达可以促进线粒体氧化磷酸化,抑制糖酵解,并激活p38 MAPK通路,而抑制p38 MAPK通路可以抑制HCC线粒体功能,提示RAP1可以通过抑制p38 MAPK通路促使细胞代谢从氧化磷酸化转为糖酵解,从而促进HCC进程。尽管还需要进一步的研究来阐明RAP1是如何调节p38 MAPK通路及其下游能量代谢重编程的,但该研究结果为HCC的治疗提供了新的潜在靶点。 杨月 张琨 高静 沈丽君 方合志 董杰影关键词:肝细胞癌 线粒体功能 铜对线粒体中铁硫蛋白功能的毒性机制研究 被引量:1 2016年 该文探讨了铜对线粒体内铁硫蛋白的毒性机理。通过包装慢病毒将Hep G2细胞中铜转运蛋白ATP7B(ATPase copper transporting beta)基因敲低,并用铜离子处理构建高铜细胞模型。通过免疫印迹、胶内酶活、紫外–可见光分光光度法检测细胞线粒体内铁硫蛋白、非铁硫蛋白及铁硫簇组装蛋白量和活性的改变;用电镜观察高铜模型中线粒体的形态改变;用海马能量代谢分析仪检测铜离子对细胞能量代谢的影响。结果发现,高铜细胞模型线粒体内铁硫簇组装蛋白ISCA2(ironsulfur cluster assembly 2)及ISCU(iron-sulfur cluster assembly enzyme)水平下降,抑制了铁硫簇的组装,并进一步影响了线粒体内[2Fe-2S]型及[4Fe-4S]型铁硫蛋白功能,但并不影响非铁硫蛋白。高铜状态也影响了呼吸链复合体活性及线粒体能量代谢,并导致线粒体形态发生改变。这些结果表明,异常累积的铜离子也会通过抑制线粒体中铁硫簇的组装,影响线粒体内铁硫蛋白的功能。 李艳纯 杜璟 刘若兰 任雪营 林楚贤 李江辉 谭国强 吕建新关键词:铁硫簇 铁硫蛋白 能量代谢 规范病原学诊断路径促进感染性眼病精准医疗 2021年 感染性眼病是临床常见的眼部疾病,尤其是在发展中国家,其发病率较高。在我国,由角膜感染引起的角膜盲发病率仅次于白内障。因感染原因和部位的不同,其临床表现和预后也不一。轻微的眼部感染仅引起眼部不适症状,如眼红、眼痒和异物感等,而严重感染会引起角膜溃疡、化脓、穿孔以及眼内炎等,从而影响患者视力,严重者甚至有失明和眼球摘除的风险。因此,对眼部感染性疾病进行规范化诊治尤为重要。临床上需要临床医师和检验医师运用各种检查方法和检测技术对眼部感染性疾病进行快速的病原学诊断,同时结合特征性的临床体征,才能实现对疾病的精准治疗。然而,由于眼部组织结构的特殊性,综合医院检验科技术人员对眼部标本特点不熟悉,眼科医师缺少实验室基本技能的培训等原因,导致感染性眼病的病原学诊断成为难点,尤其是眼部样本的采集和预处理成为最大的困扰。随着各种眼部特殊检查设备以及实验室新技术的引入,加快了病原学诊断的发展步伐,从而更好地为感染性眼病的诊疗提供客观依据。 郑美琴 郑钦象 楼永良 陈蔚关键词:眼感染 病原学 基因组测序 US31介导人巨细胞病毒调控系统性红斑狼疮发生的机制研究 2021年 目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)基因US31调控系统性红斑狼疮(SLE)发生发展的机制。方法:征集临床60例SLE患者和111例健康志愿者,检测SLE患者与健康志愿者血清中抗HCMV-IgG及IgM抗体滴度,检测外周血白细胞中HCMV UL55基因表达,聚类分析SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HCMV病毒基因表达谱,鉴定在SLE患者中相对特异性高表达的病毒基因。另外,构建过表达US31基因的重组腺病毒(AdUS31),感染THP1单核细胞和THP1源性的巨噬细胞,分析US31基因对单核-巨噬细胞功能的影响。其次,筛选与US31相互作用的蛋白,细胞水平检测NF-κB相关通路蛋白变化,炎症相关基因TNF-α、IL-8、CCL2、ICAM1变化。分离细胞核和细胞质中的蛋白质,检测US31蛋白细胞定位,细胞水平感染过表达US31蛋白的重组腺病毒后抑制MG132蛋白酶表达,检测NF-κB相关通路蛋白变化。结果:SLE患者的抗HCMV-IgG及IgM抗体滴度均明显高于对照组(P<0.05),SLE患者外周血白细胞HCMV检测阳性率明显高于健康志愿者(P<0.001),全转录组测序和mRNA测序显示US31是SLE患者相对特异高表达的病毒基因,进一步研究显示,SLE患者PBMC中US31表达水平明显高于健康对照人群(P<0.001)。炎症相关基因TNF-α、IL-8、CCL2、ICAM1表达量升高(P<0.001)。NF-κB非经典途径的NF-κB2及前体p100可与US31直接相互作用,US31表达可明显促激活状态的NF-κB2(p52)表达。结论:HCMV诱导US31的表达通过与NF-κB通路相互联系直接改变炎症相关基因的表达,进而调控SLE发生。 刘春雅 金晶 李玉芳 喻敏 姜毅 徐利鸳关键词:人巨细胞病毒 系统性红斑狼疮 聚异丁烯及其热塑性弹性体:怎样从工业走向医疗 被引量:4 2020年 背景:聚异丁烯嵌段共聚物及其交联产物是一类新型的热塑性弹性体,具有独特性质和优异的生物相容性,有望作为医用生物材料得到广泛应用。目的:综述聚异丁烯及其热塑性弹性体的研究进展及应用,讨论聚异丁烯类材料作为可植入医疗器材的应用前景。方法:应用计算机检索1958至2019年PubMed数据库、Web of science数据库、中国知网和万方平台收录的与聚异丁烯生物材料相关的文献。英文检索词为"polyisobutylene and block copolymer,polyisobutylene and thermoplastic elastomer,polyisobutylene and biomaterials,polyisobutylene and modification,polyisobutylene and medical application",中文检索词为"聚异丁烯,嵌段共聚物;聚异丁烯,热塑性弹性体;聚异丁烯,生物材料;聚异丁烯,修饰;聚异丁烯,医学应用",按纳入、排除标准最后共纳入文献65篇进行综述。结果与结论:聚异丁烯嵌段共聚物及其交联产物具有良好的生物相容性和稳定性。在充分利用聚异丁烯类材料自身优势的基础上,通过与不同材料的结合,利用新技术对其进行改性和修饰,未来在诸如眼科植入材料、软生物材料和药物控释载体等医用植入材料方面将展现出更强的竞争力。 姜力 方小娟 潘邦伦 林翰超 李伟关键词:聚异丁烯 嵌段共聚物 表面改性 生物医用材料 热塑性弹性体 生物材料 氧化磷酸化复合体功能缺陷与线粒体病 线粒体是细胞有氧代谢的中心,氧化磷酸化复合体通过组成氧化呼吸链并参与和影响有氧代谢。组成氧化磷酸化复合体的蛋白质由细胞核基因组和线粒体基因组共同编码,且复合体的组装还需要细胞核基因组编码的组装因子,因此氧化磷酸化复合体的... 吕建新HINT2在甲状腺乳头状癌中的表达和功能研究 2021年 HINT2与多种肿瘤发生发展密切相关,在甲状腺癌中的功能还不清楚。该文使用组织芯片检测甲状腺乳头状癌组织中HINT2的表达,发现12例癌组织中HINT2蛋白表达水平显著高于正常组织(86%,P<0.05)。该文构建高表达和低表达HINT2的甲状腺乳头状癌细胞系K1稳定克隆后,使用CCK8和克隆形成实验检测HINT2对细胞增殖能力的影响,采用Transwell和划痕法检测细胞迁移能力,使用Matrigel Transwell法检测细胞侵袭能力。结果发现,高表达HINT2促进了K1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而干扰HINT2则抑制了细胞的这些恶性表型。最后,该文用Western blot方法检测AKT和ERK的活化情况,发现高表达HINT2促进AKT和ERK的磷酸化,而干扰HINT2则抑制AKT和ERK的磷酸化。这些结果说明,HINT2可能是甲状腺乳头状癌的原癌基因,通过调控PI3K/AKT和MAPK/ERK通路影响甲状腺肉头状癌的恶性表型。 张泸娇 李慧 高维 李豪 刘丹慧关键词:甲状腺乳头状癌 弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能研究进展 被引量:2 2022年 刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种重要的人兽共患寄生原虫,具有中间宿主广泛、生活史复杂、传播方式多样、呈全球性分布等特点,可感染几乎所有的恒温动物,导致人兽共患的弓形虫病。弓形虫慢性感染约1/3的世界人口,对免疫缺陷患者、孕妇、孕畜的健康更是造成严重威胁。致密颗粒蛋白是由致密颗粒(弓形虫的一种亚细胞分泌器官)分泌的蛋白质,它们可通过操控宿主(细胞)基因表达、信号通路进而调控宿主细胞的免疫反应和细胞周期,并在蛋白质的转运和定位、营养物质的摄取、纳米管网络(IVN)的形成与稳定性的维持、逸出、慢性感染等生理过程中发挥重要作用。本文综述弓形虫致密颗粒蛋白基本生物学功能的最新研究进展,旨在为深入研究弓形虫的致病机制、鉴定新的抗弓形虫潜在药物靶点和疫苗候选分子提供借鉴。 郑晓楠 李婷婷 李婷婷 王金磊 朱兴全关键词:弓形虫 弓形虫病 致密颗粒蛋白 生物学功能