嘉兴学院医学院基础医学部
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 相关机构：石河子大学医学院浙江工业大学药学院药物制剂研究所浙江中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金高层次人才科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在肝细胞癌转移中的作用与机制研究
- 2024年
- 肝细胞癌(HCC)是一种炎症相关癌症,肿瘤免疫微环境在HCC的发生和发展中起关键作用。该文旨在研究中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在HCC转移中的作用及相关机制。ELISA和免疫组化方法检测HCC患者血清和肿瘤组织中的NETs水平以检测NETs与肝癌转移的相关性。在体外实验中,建立NETs与肝癌细胞系Hep3B和CSQT-2体外共培养模型,通过划痕实验和Transwell等实验,研究NETs对肝癌细胞迁移的影响。在体内实验中,建立尾静脉注射转移瘤模型并使用脂多糖诱导小鼠体内NETs形成,通过检测肝脏病理变化和肝脏Ki67蛋白水平等指标,研究NETs对肿瘤转移的作用。最后,为了探讨NETs影响HCC转移的机制,通过质谱的方法检测了NETs对细胞外基质的修饰,并检测了修饰的细胞外基质蛋白对整合素/FAK信号通路的影响。结果发现:高转移HCC患者肿瘤组织中髓过氧化物酶蛋白水平较高,且与早期HCC患者相比,晚期HCC患者血清中的MPO和中性粒细胞弹性蛋白酶水平升高。体外实验中,NETs与Hep3B和CSQT-2细胞共培养,可以促进Hep3B和CSQT-2细胞的迁移能力。体内实验中,NETs可以促进C57BL/6小鼠炎性细胞浸润肝脏。尾静脉注射转移瘤后,体内诱导NETs引起肝脏组织中Ki67蛋白水平升高,表明NETs促进肝癌细胞的肝转移。使用ATRA抑制NETs的释放缓解了NETs介导的促转移和促增殖作用。而使用ATRA抑制NETs的释放缓解了NETs介导的促转移和促增殖作用。机制研究发现,NETs形成和释放过程中会产生次氯酸,从而导致细胞外基质中层黏连蛋白肽段中LKDYEDLR的酪氨酸氯化修饰,且次氯酸处理的LAMC1会导致整合素/FAK信号通路的激活。因此,该研究证实,NETs可以促进HCC的转移,其作用机制与诱导ECM重塑,调控整合素/FAK信号通路有关。
- 王金丽马建兵王文喜肖思嘉王晓敏仲经亚潘巍巍程树群郑永霞
- 关键词：细胞外基质蛋白质翻译后修饰
- 顺铂诱导氧化应激引起耳蜗血管纹周细胞线粒体途径的细胞凋亡
- 2023年
- 目的探讨顺铂是否通过诱导氧化应激水平升高引起耳蜗血管纹毛细血管周细胞线粒体途径的细胞凋亡。方法将20只6~8周的雄性C57BL/6J小鼠分为对照组和顺铂组;同时原代培养小鼠耳蜗血管纹周细胞并鉴定,分为对照组、顺铂组和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)+顺铂组。听性脑干反应(ABR)检测小鼠听力变化,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠耳蜗血管纹形态学变化,总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法分别检测SOD活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,DCFH-DA荧光探针检测周细胞上活性氧的含量,Hoechst 33342和流式细胞术检测周细胞的凋亡率,免疫荧光技术检测耳蜗血管纹上周细胞的凋亡相关蛋白分布表达,免疫组化和蛋白免疫印迹法(WB)检测凋亡相关蛋白、线粒体相关蛋白的表达,Mito SOXTM-red和JC-1检测周细胞线粒体功能,伊文思蓝染色观察血迷路屏障(blood labyrinth barrier,BLB)的通透性。采用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果与对照组相比,顺铂组可升高小鼠听力阈值和Ⅰ波潜伏期(t值为4.72和12.25,P值均<0.05),升高耳蜗和周细胞内氧化应激水平(t=38.34,P<0.01),使耳蜗血管纹结构紊乱皱缩,BLB通透性增加[伊文思蓝渗漏(1.08±0.42)AU比(0.55±0.23)AU,t=4.64,P<0.05],差异均有统计学意义。顺铂组小鼠耳蜗血管纹细胞凋亡蛋白c-Caspase-3和Bax的表达增加(t值为5.01和6.33,P值均<0.01),且顺铂可使原代培养的周细胞凋亡并上调c-Caspase-3、Bax的表达(P值均<0.05),NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的周细胞凋亡(P<0.05)。顺铂使周细胞线粒体功能损伤,诱导线粒体向胞浆释放凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-c),NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的线粒体损伤(P值均<0.05)。结论顺铂可升高耳蜗内氧化应激水平引起C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹周细胞
- 黄天兰柴荣奎施添凤马靖雯余蒙余苗司军强李丽
- 关键词：耳毒性周细胞氧化应激细胞凋亡线粒体
- 老年C57BL/6J小鼠内皮细胞上S1PR1对血迷路屏障通透性的影响
- 2023年
- 该研究通过检测不同月龄C57BL/6J小鼠血管纹上S1PR1的表达情况,进一步探究老年耳蜗血管纹内皮细胞上S1PR1变化对血迷路屏障通透性的影响。用听性脑干反应(auditory brain response,ABR)检测听觉功能;伊文思蓝染色检测耳蜗血迷路屏障的通透性;免疫荧光检测耳蜗血管纹上S1PR1和紧密连接蛋白表达水平;ELISA检测S1P的释放量;Transwell小室检测内皮细胞通透性;Western blot检测EC上S1PR1和紧密连接蛋白的表达水平。结果显示,12m组小鼠听力阈值明显增高且高频听力损失明显,耳蜗血迷路屏障通透性升高,S1PR1和紧密连接蛋白表达水平均降低。在细胞水平,D-gal+EC组中S1P的释放量降低,S1PR1表达水平下降,加入外源S1P后,S1PR1表达水平增加;D-gal+EC组紧密连接蛋白表达水平降低,内皮细胞通透性增加,加入外源S1P后,紧密连接蛋白表达水平增加,内皮细胞通透性降低,给予S1PR1抑制剂干预后,紧密连接蛋白表达水平降低,内皮细胞通透性增加。在衰老状态下,耳蜗血管纹内皮细胞上S1PR1表达下降,这可能会下调紧密连接蛋白的表达,进而影响血迷路屏障通透性。
- 余蒙余苗孙诗恒王皓阳曾宪思刘志丹姜文君李丽
- 关键词：衰老紧密连接蛋白血迷路屏障老年性聋
- 丹参酮ⅡA激活PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导小鼠耳蜗血管纹周细胞凋亡的研究
- 2023年
- 目的探讨丹参酮ⅡA是否能抑制高糖诱导的小鼠耳蜗血管纹周细胞的凋亡及可能机制,为治疗糖尿病性听力损失提供参考。方法C57BL/6J雄性小鼠40只,分为对照组、糖尿病(DM)组、糖尿病+丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA组,每组10只。制备2型糖尿病模型。将原代周细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+丹参酮ⅡA(1、3、5μmol/L)组、HG+丹参酮ⅡA+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组、LY294002组、丹参酮ⅡA组、二甲基亚砜(DMSO)组。ABR检测听力阈值;硫代巴比妥酸试验(thiobarbituric acid,TBA)检测耳蜗氧化应激水平;苏木精-伊红染色(HE)观察耳蜗血管纹形态变化;Evans blue检测耳蜗血管纹血迷路屏障通透性;免疫荧光观察耳蜗血管纹周细胞凋亡蛋白的表达;流式细胞术检测周细胞凋亡率;DCFH-DA结合流式细胞术检测周细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,免疫蛋白印记(Western Blot,WB)法检测周细胞凋亡蛋白(Cleaved-caspase3、Bax)、抗凋亡蛋白(BCL-2)以及通路蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)的表达。采用SPSS软件进行统计分析,行独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果动物实验:丹参酮ⅡA可降低DM组[(35.0±3.5)dB SPL比(55.3±8.1)dB SPL]听力阈值(t=4.899,P<0.01),降低耳蜗内氧化应激水平(t=4.384,P<0.05),改善耳蜗血管纹结构紊乱、萎缩,空泡增多的现象。丹参酮ⅡA可缓解DM小鼠耳蜗血管纹血迷路屏障通透性[Evans blue渗漏(6.84±0.27)AU比(8.59±0.85)AU]增加的现象(t=2.770,P<0.05),可逆转周细胞凋亡蛋白Cleaved-caspase3(t=4.956,P<0.01)和Bax(t=4.388,P<0.05)的表达。细胞实验:丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞内ROS含量,且呈浓度依赖性(t=3.569,P<0.05;t=4.772,P<0.01;t=7.494,P<0.01);丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞凋亡率和凋亡蛋白,增加抗凋亡蛋白、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的表达,且均呈浓度依赖性(P值均<0.05);LY294002可逆转丹参酮ⅡA对周细胞凋亡的�
- 施添凤贾金婧黄天兰马靖雯司军强马克涛李丽
- 关键词：高血糖症耳蜗血管纹周细胞细胞凋亡PI3K/AKT通路
- BK(Ca)通道对衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞迁移的作用被引量：1
- 2021年
- 目的探讨大电导钙激活钾离子通道[large conductance calcium-activated potassium channel,BK(Ca)]是否参与衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞(pericytes,PC)的迁移。方法将C57BL/6J小鼠分为3月龄(n=10)组和12月龄组(n=10),听性脑干反应(ABR)检测各组听力阈值;免疫荧光检测各组耳蜗血管纹毛细血管PC上β-BK(Ca)通道和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达变化;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察各组耳蜗血管纹PC的形态改变。细胞实验:原代培养耳蜗血管纹PC并鉴定;D-半乳糖(D-gal)制备细胞衰老模型,CCK8确定D-gal干预浓度;β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估细胞衰老水平;全细胞膜片钳技术记录PC上BK(Ca)通道激活电流变化;免疫荧光技术检测PC上β-BK(Ca)通道蛋白表达变化;划痕实验和Transwell实验检测2组细胞迁移侵袭能力;Western blot技术检测β-BK(Ca)通道和OPN蛋白表达水平。采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。结果动物实验:12月龄组小鼠较3月龄组ABR阈值升高(t=12.66,P<0.01);12月龄组小鼠耳蜗血管纹PC上β-BK(Ca)通道表达水平较3月龄组降低(t=14.64,P<0.01),OPN表达升高(t=20.73,P<0.01);TEM中3月龄组PC与内皮细胞紧密相连,12月龄组PC与内皮细胞连接疏松或PC胞体从毛细血管壁分离。细胞实验:耳蜗血管纹原代培养的耳蜗血管纹PC阳性率在95%以上,15 mg/ml D-gal干预的PC较对照组的SA-β-gal染色细胞阳性率高,差异有统计学意义(t=36.90,P<0.01)。与对照组PC相比,D-gal干预组全细胞膜片钳BK(Ca)通道电流减小(t=12.18,P<0.05),β-BK(Ca)通道蛋白和荧光表达水平降低(t=11.98,P<0.01;t=15.72,P<0.05),OPN蛋白表达升高(t=18.53,P<0.01),PC迁移能力增加(t=7.91,P<0.01;t=7.59,P<0.01)。D-gal干预后给予BK(Ca)通道特异性阻断剂Iberiotoxin(IBTX)可使OPN表达明显升高(t=4.26,P<0.05),PC迁移能力增加(t=5.88,P<0.01;t=21.97,P<0.01)。结论衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管PC迁移能力增加,β
- 徐少然夏满莉邓双李雪蕊司军强李丽
- 关键词：血管纹衰老周细胞大电导钙激活钾通道
- Cav1.2在顺铂诱导C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经元凋亡中的作用被引量：1
- 2022年
- 目的:探究顺铂(CDDP)诱导C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经元(SGNs)凋亡过程中Cav1.2的作用及其可能的机制。方法:动物实验:选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠分为以下两组(10只/组):生理盐水组(Control组)和顺铂给药组(Cisplatin组)。Control组每天腹腔注射生理盐水,Cisplatin组每周期前4 d以3 mg/kg的剂量进行顺铂腹腔注射,后10 d每日注射生理盐水,重复三个周期。给药结束后,听性脑干反应(ABR)检测小鼠听力阈值变化;小鼠内眦采血,并断颈取耳蜗,超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)试剂盒检测血清及耳蜗组织的SOD活性和MDA含量;免疫印迹法(Western blot)检测耳蜗组织相关凋亡蛋白表达;苏木精-伊红HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节形态学变化;TUNEL染色观察小鼠耳蜗SGNs凋亡情况;免疫荧光观察耳蜗SGNs上Cav1.2的分布和表达。细胞实验:原代培养SGNs,根据CCK8选择顺铂5μmol/L干预12 h并随机分为:对照组(Control)、溶剂组(DMSO)、Cav1.2阻断剂组(N)、顺铂组(Cisplatin)、顺铂与Cav1.2阻断剂共同孵育组(Cisplatin+N)。Western blot检测Cav1.2蛋白表达;Hoechst33342染色观察各组SGNs凋亡情况,流式细胞术检测各组SGNs凋亡率,Western blot检测相关凋亡蛋白的表达,CA探针检测细胞内钙离子浓度变化,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测膜电位变化,线粒体超氧化物指示剂(MitoSOX-red)检测线粒体释放ROS情况。结果:动物实验:与Control组相比,Cisplatin组小鼠听力阈值升高(P<0.01),血清及耳蜗组织MDA含量、耳蜗组织凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平和TUNEL阳性率、Cav1.2蛋白表达水平等均明显升高(P<0.05,P<0.01);血清及耳蜗组织SOD活性、耳蜗组织抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白水平和SGCs密度均明显降低(P<0.05,P<0.01)。细胞实验:与Control组相比,Cisplatin组的Cav1.2表达、细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平、细胞内钙离子浓度以及ROS释放均明显增加(P<0.05,P<0.01);�
- 马靖雯王艳萍王敏黄天兰施添凤余苗司军强李丽
- 关键词：顺铂小鼠细胞培养凋亡
- 玫瑰花总黄酮对脑缺血/再灌注损伤大鼠PI3K/AKT通路和内质网应激凋亡的影响被引量：4
- 2023年
- 目的研究玫瑰花总黄酮(total flavonoids from Rosa rugosa,TFR)对大鼠脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的影响,探讨TFR是否通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径调控神经细胞凋亡。方法将SD大鼠随机分成假手术组、模型组、TFR低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,灌胃7 d,末次给药1 h后线栓法制备大脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型。24 h后检测大鼠神经行为学变化、脑梗死面积、脑组织含水量;HE和尼氏染色观察病理相关指标;TUNEL染色观察神经细胞凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、GRP78、CHOP和Caspase-12的蛋白表达水平。结果与MCAO/R组比,中、高剂量TFR给药组大鼠神经行为学功能改善,脑梗死面积下降,脑水肿程度降低,脑皮质区病理损伤减轻,神经细胞凋亡率明显减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高,促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase-3表达降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT表达升高。ERS相关蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12表达降低。结论TFR可通过调控PI3K/AKT信号通路和ERS途径抑制神经细胞凋亡,从而发挥对CIRI大鼠的保护作用。
- 张景荣于秀石高瑞娟孔良靖元孙攀喜张重阳李丽魏丽丽司军强
- 关键词：内质网应激凋亡
- C57BL/6J小鼠衰老耳蜗血管纹微血管周细胞对内皮细胞通透性影响的研究被引量：6
- 2021年
- 目的研究小鼠衰老耳蜗血迷路屏障通透性的变化, 并通过建立内皮细胞(endothelial cells, EC)系和周细胞(pericytes, PC)系非接触式共培养模型, 进一步探讨耳蜗血管纹微血管PC对EC通透性的影响。方法 C57BL/6J小鼠分为2组:3月龄为年轻组, 12月龄为衰老组;细胞实验分为4组:EC组、EC+PC共培养组、D-半乳糖(D-gal)+EC组和D-gal+EC+PC共培养组。听性脑干反应(auditory brain response, ABR)检测2组小鼠听觉功能;伊文思蓝(evans blue)染色检测2组小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性;透射电镜观察2组小鼠血迷路屏障EC、PC和紧密连接结构;免疫荧光检测2组小鼠耳蜗血管纹上紧密连接蛋白表达水平;Transwell小室检测EC通透性;Western blot及免疫荧光技术检测EC上紧密连接蛋白的表达水平。以SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果与年轻组相比, 衰老组小鼠ABR阈值明显升高且Ⅰ波潜伏期延长(t=10.25, P<0.01;t=5.61, P<0.05)、耳蜗血迷路屏障通透性升高且血管纹上紧密连接蛋白的表达降低(P值均<0.05);耳蜗超微结构显示衰老小鼠耳蜗血管纹微血管管腔变形、基底膜增厚、内皮间紧密连接间隙增大;原代培养的EC和PC阳性率达95%以上;并确定15 g/L D-gal诱导的细胞为衰老细胞;与EC组相比, D-gal+EC组EC的紧密连接蛋白表达降低(t=7.42, P<0.01;t=13.19, P<0.05), 通透性增加(t=11.17, P<0.01);在共培养组中, EC+PC共培养组和D-gal+EC+PC共培养组EC间紧密连接蛋白表达均增加, 通透性均降低。结论衰老小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性升高, 紧密连接蛋白水平降低;衰老状态下, 耳蜗血管纹微血管PC可能通过调节紧密连接蛋白的表达进而影响EC通透性。
- 邓双董波徐少然黄天兰马静雯司军强马克涛李丽
- 关键词：衰老血迷路屏障老年性聋
