中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室 作品数:51 被引量:98 H指数:6 相关作者: 乔洪宾 韩愉 孙焕 邢荣鹤 王素娟 更多>> 相关机构: 新疆农业大学动物医学学院 上海师范大学生命与环境科学学院 扬州大学兽医学院 更多>> 发文基金: 上海市科学技术委员会科研基金 国家科技基础条件平台建设计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因筛选 被引量:14 2008年 目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因。方法利用东方田鼠血清以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,将所得阳性克隆进行测序及生物信息学分析,确定目的基因。结果经3轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(857倍),随机挑取58个克隆进行序列测定,获得了10条表达序列标签(EST)序列,其中7条与GenBank中登陆的日本血吸虫基因序列具有99%~100%同源性,1条与类人猿锌指蛋白基因有82%同源性。功能预测结果表明,大部分EST编码蛋白或多肽的功能主要是参与血吸虫基因表达调控。结论发现了多个可能与东方田鼠抗血吸虫抗性相关的靶基因,为进一步阐述东方田鼠抗血吸虫病的分子机理奠定了基础。 孙毅 孙焕 贾人初 刘金明 苑纯秀 石耀军 陆珂 李浩 金亚美 林矫矫关键词:日本血吸虫 东方田鼠 靶基因 日本血吸虫Sjzfp1基因的克隆表达及其表达产物的免疫效果 被引量:1 2010年 以PCR技术从日本血吸虫成虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆日本血吸虫锌指蛋白编码基因Sjzfp1以及181~786bp的DNA片段,分别以pGEX-4T和pET-28a(+)为表达载体制备重组抗原rSjzfp1/GST和rSjzfp1-1/His。将重组抗原与206佐剂混合后免疫小鼠,观察免疫预防效果。利用实时荧光定量PCR法检测Sjzfp1在不同发育期虫体中的表达情况。结果显示,获得了日本血吸虫Sjzfp1基因全长序列,其ORF为1017bp,编码338个氨基酸,推导的理论分子质量为38.5ku。生物信息学分析显示Sjzfp1为日本血吸虫环形锌指蛋白或PHD型锌指蛋白。以rSjzfp1/GST和rSjzfp1-1/His免疫小鼠,诱导的减虫率分别为50.43%和17.85%,肝虫卵减少率分别为72.64%和15.96%。实时荧光定量PCR分析表明Sjzfp1基因在各发育期虫体中均有表达,其中在尾蚴和毛蚴中表达量较高,在终末宿主体内各发育期虫体中,以42d成虫表达量最高。结果表明,Sjzfp1基因在抗血吸虫疫苗研究中具有进一步研究的潜力。 邢荣鹤 宋震宇 刘金明 王素娟 石耀军 李浩 林矫矫 岳城关键词:日本血吸虫 克隆 免疫保护 日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因的表达及诊断应用 目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制... 孙帅 刘金明 宋震宇 王素娟 邢荣鹤 石耀军 李浩 陆珂 林矫矫关键词:日本血吸虫 重组抗原 酶联免疫吸附试验 文献传递 噬菌体展示技术及其在抗血吸虫疫苗研究中的应用 被引量:1 2008年 噬菌体展示技术是新近发展起来的将外源肽或蛋白与特定噬菌体衣壳蛋白融合,并展示于噬菌体表面的一项新技术。展示系统主要包括丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统及T7噬菌体展示系统等。该技术在抗血吸虫疫苗研究上的应用主要集中在模拟血吸虫抗原位点和直接作为疫苗载体方面,而在分析血吸虫保护性抗原位点、发现新的功能蛋白或抗原基因方面的应用研究还有待加强。本文就噬菌体展示技术及其在抗血吸虫疫苗研制中的应用进行了简要概述,为抗血吸虫疫苗的研究提供。 孙毅 刘金明关键词:噬菌体展示技术 抗原表位 疫苗载体 日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因表达及诊断应用 2009年 目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原(rSj32);应用ELISA方法检测待检血清,并比较rSj32、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)以及重组诊断抗原rSj23对人工感染兔、小鼠及水牛血吸虫病的检测效果。结果成功表达了Sj32成熟体,表达产物rSj32的分子量为41 kDa,可用H is柱纯化,得率约为68.8 mg/L培养物。用rSj32检测人工感染兔、小鼠和水牛血清以及对照兔、小鼠和水牛血清,特异性分别为100.0%、96.7%和96.9%,敏感性分别为88.9%、85.0%和71.8%,该抗原对牛血清的敏感性略低于SEA和rSj23,其余检测结果三者相比无显著差异。结论rSj32在诊断动物血吸虫病方面具有研究和应用价值。 孙帅 刘金明 宋震宇 王素娟 邢荣鹤 石耀军 李浩 陆珂 林矫矫关键词:日本血吸虫 重组抗原 酶联免疫吸附试验 山丘型疫区牛血吸虫病疫情动态调查 山丘型疫区是在我国分布最广的血吸虫病流行区,通过对这类地区牛血吸虫病流行动态调查,摸清流行特点和规律,正确评估防治效果,为制订防控对策提供依据;为此在这类地区选择两个有代表性的试点进行调查观测,并记录统计各类数据,结果显... 石耀军 刘金明 李浩 董国栋 毛光琼 郭莉 马坤 高建新 杨俊凯 陆珂关键词:牛血吸虫病 疫情调查 洲垸型地区牛血吸虫病流行动态分析 被引量:3 2008年 目的分析1993~2007年两个洲垸型血吸虫病流行病学观测点调查数据,评估各种防治措施实施的效果,为策划和调整防治对策提供科学依据。方法根据"观测点方案"要求开展人、畜血吸虫病疫情、螺情、野粪等调查,统计分析各项指标。结果2个洲垸型观测点耕牛血吸虫病感染率分别由设点时(1993年)的28.5%和11.99%下降至2007年的6.13%和2.83%,人群血吸虫病血检阳性率仍在高水平上徘徊,垸内残存螺点极少且找不到感染性钉螺,垸外螺情变化不大。结论调查表明洲垸型地区仍是我国血吸虫病流行最严重的地区,垸外钉螺面积大,密度高,难以实施有效的药物灭螺,耕牛常年在湖洲上放牧感染血吸虫病并传播病原,这类地区是以畜源性为主的血吸虫病流行区,只有加强对放牧家畜的管理,才能有效地控制血吸虫病疫情。 石耀军 陆珂 王兰平 李浩 朱春霞 刘金明 刘竹清 曾少才 康赛娥关键词:血吸虫病 流行病学调查 东方田鼠IgG和IgG_3对日本血吸虫抗原反应特性的研究 被引量:1 2012年 本文对东方田鼠(Microtus fortis)总IgG和IgG3对日本血吸虫抗原的反应特性进行了研究。纯化东方田鼠IgG,用间接ELISA法检测不同浓度东方田鼠总IgG和IgG3对日本血吸虫童虫可溶性抗原(soluble schistosomula antigen,SSA)、成虫可溶性抗原(soluble adult worm antigen,SWA)、虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)、童虫不可溶性抗原(insoluble schistosomula antigen,ISSA)、雄虫不可溶性抗原(insoluble male worm antigen,ISMA)、雌虫不可溶性抗原(insoluble female worm antigen,ISFA),以及基因工程抗原rSj14、rSj23-HLD、rSJ28GST、rSjPP的反应情况。结果显示,HRP标记免抗东方田鼠IgG抗体和羊抗小鼠IgG3抗体作为二抗,A值变化规律一致。该结果显示东方田鼠总IgG和IgG3与日本血吸虫抗原可能存在非特异性反应。 李浩 刘金明 傅志强 石耀军 金亚美 陆珂 姚利晓 杨健美 林矫矫 苑纯秀 朱传刚 洪炀关键词:东方田鼠 日本血吸虫 IGG ELISA 酵母双杂交诱饵蛋白日本血吸虫抱雌沟蛋白重组质粒的构建及鉴定 被引量:3 2010年 为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein ofSchistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒。根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒。随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况。结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长。可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质。 吴启进 金亚美 李勉 刘金明 王小波 石火英 林矫矫关键词:酵母双杂交技术 自激活 日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt10a基因的克隆及其在童虫和成虫中mRNA表达量的变化 被引量:3 2007年 利用RACE技术从19日龄的日本血吸虫童虫中扩增了1个Wnt家族基因,并对其进行了生物信息学分析。同源性分析表明,该基因为日本血吸虫新基因,完整开放阅读框(ORF)长1896 bp,编码631个氨基酸,理论分子质量为73.3 ku。该基因编码的氨基酸序列具有Wnt家族蛋白的典型特征,与人、鼠Wnt10a的氨基酸序列同源性均为26%,推测为血吸虫的Wnt10a基因,命名为Sjwnt10a(Gen BanK登录号DQ643829)。利用实时荧光定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达情况,结果显示该基因在19日龄的日本血吸虫童虫中表达量最高,在14日龄童虫和44日龄雄虫中也有表达,但分别仅为19日龄童虫表达量的8.8%和5.0%,而在31日龄成虫和44日龄雌虫中没有检测到该基因。结果提示,童虫差异表达的Sjwnt10a基因可能对童虫的生长、发育至关重要。 陶丽红 姚丽晓 苑纯秀 傅志强 冯新港 刘金明 石耀军 蔡幼民 林矫矫关键词:日本血吸虫 信号转导