郑州大学细胞生物学研究室
- 作品数：70 被引量：300H指数：10
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- 杜氏盐藻中的核基质与核基质结合区(英文)被引量：1
- 2005年
- 真核生物细胞核DNA通过核基质结合区(Matrixattachmentregion,MAR)附着到核基质上。为了进一步探索染色体DNA与核基质之间的相互作用,从单细胞真核藻类杜氏盐藻中克隆出了MAR片段。首先构建了杜氏盐藻的随机MAR文库,通过体外结合实验分离出能与核基质结合的MAR序列。从构建的MAR文库中,筛选出3个能与核基质结合的MAR,其中两个片段与核基质具有较强的结合力,测序分析表明具有MAR片段的一些典型特征性基序。
- 王天云侯卫红柴玉荣姬翔王建民薛乐勋
- 关键词：核基质核基质结合区绿藻染色体
- p65 siRNA联合顺铂对宫颈癌HeLa229细胞增殖及侵袭力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的通过RNA干扰(RNAi)阻断宫颈癌细胞HeLa229中核因子(NF)-κB信号通路,观察其单独或与顺铂(DDP)联合对HeLa229增殖、耐药性和侵袭力的影响。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为未转染组(A组)和转染p65小干扰RNA(siRNA)组(B组),用MTT法检测转染p65 siRNA 24、48、72 h时HeLa229的增殖情况;加入不同浓度DDP,观察其对HeLa229细胞增殖的影响。用Boyden chamber体外侵袭实验检测A、B组及p65siRNA与DDP(8.6 mg/L)联合组(C组)细胞侵袭力的变化。结果B组细胞存活率较A组明显下降;加入DDP后,A、B组细胞的存活率均随DDP浓度的增加而下降。siRNA与DDP联合应用可明显提高HeLa229对DDP的敏感性。与A组相比,B、C组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P<0.05)。结论应用RNAi技术可有效阻断HeLa229内NF-κB信号通路,抑制其增殖和体外侵袭力,增强其对DDP的敏感性。
- 田卫红田芳许培荣刘红涛薛乐勋
- 关键词：宫颈癌HELA229细胞核因子小干扰RNA
- Tet-on调控TAp63γ基因表达EC9706细胞系的建立及对细胞增殖的影响
- 2007年
- 目的:利用Tet-on基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础。方法:将调控质粒pTet-on转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆。最后用不同浓度Dox诱导,Westernblot法确定Dox的最佳诱导浓度。采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率。结果:Dox浓度为3mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P<0.05或0.01)。结论:成功构建了Tet-on调控TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台。TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制。
- 范天黎侯桂琴许培荣袁保梅杨静刘兰琦杨观瑞
- 关键词：基因表达系统食管癌EC9706细胞
- 凋亡诱导因子介导TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡被引量：1
- 2007年
- 目的探讨TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡的分子机制。方法用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测食鳞癌EC9706细胞中凋亡诱导因子(AIF)和p63的表达;将质粒pcDNA3.1-TAAp63γ转入EC9706细胞,流式细胞仪检测凋亡率,并用激光共聚焦显微镜和亚细胞器分离技术观察分析AIF的转化;采用RNA干扰技术下调AIF的蛋白表达水平,caspase广谱抑制剂zVAD.fmk预处理细胞,再用流式细胞仪分析EC9706细胞发达TAp63γ后调亡率的变化。结果EC9706细胞中AIF表达且定位在细胞质中,p63基因的表达亚型是ΔNp63,TAp63γ不表达;在pcDNA3.1-TAp63γ转染组和pcDNA3.1-p53转染组的细胞质及细胞核蛋白中分别检测到AIF,pc DNA3.1转染组的胞核蛋白无AIF信号;pcDNA3.1转染组、pcDNA3.1-TAp63γ转染组、AIF-siRNA干扰后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组、zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组和AIF-siRNA干扰联合zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ的凋亡率分别为1.37%、13.64%、4.52%、4.03%和1.91%。结论TAp63γ在诱导EC9706细胞凋亡的过程中,AIF从线粒体释放入胞质并转位到细胞核内;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡;TAp63γ诱导的细胞凋亡依赖于AIF和caspase。
- 范天黎郝义彬许培荣侯桂琴姜国忠杨观瑞
- 关键词：鳞状细胞细胞凋亡
- siRNA阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、耐药的影响被引量：10
- 2007年
- 目的:通过RNA干扰(RNAi)阻断食管鳞癌细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药的关系。方法:使用NF-κB p65 siRNA分别转染人食管鳞癌Eca109和EC9706细胞72h,以未转染的Eca109和EC9706细胞为对照,采用Western blot检测p65蛋白的表达;MTT法检测转染NF-κBp65siRNA24h、48h、72h后Eca109和EC9706细胞的增殖情况及转染同时联合应用不同质量浓度5-Fu(0mg/L,16.35mg/L,32.7mg/L,327mg/L,3270mg/L,6540mg/L)对Eca109和EC9706细胞增殖的影响。结果:①NF-κB亚单位p65在Eca109和EC9706细胞质中高表达,p65siRNA可有效阻断p65蛋白表达。②MTT实验表明,转染组细胞存活率较未转染组明显下降(P<0.05);与化疗药5-Fu联用,转染组和未转染组细胞的增殖活性随着5-Fu浓度的增加有下降趋势,但在同一浓度,转染p65siRNA的细胞与未转染组相比,细胞增殖活性明显下降(P<0.05)。结论:应用RNAi技术可有效干扰p65的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖,增强对化疗药5-Fu的敏感性。因此,可将阻断NF-κB信号通路作为基因治疗的靶点。
- 田芳田卫红许培荣刘红涛薛乐勋
- 关键词：食管肿瘤NF-KAPPABSIRNA
- 中国人血管抑素基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2003年
- 目的 :克隆中国人血管抑素 (angiostatin ,ANG)基因全长并进行序列分析。方法 :应用RT -PCR ,将 5例健康人肝脏组织ANG基因克隆到pSP71载体上 ,用Sanger法进行基因测序分析。结果 :通过RT -PCR获得一个 1 1 4 1bp的扩增产物 ,测序发现与已报道的ANG比较 ,国人ANG上有 3个碱基突变位点 :分别为第 82 5位C→T ;第 92 7位T→G和第 1 0 78位G→A。前两个碱基突变氨基酸未发生变化 ,第 3个碱基突变结果使缬氨酸 (Val342 )改变成为蛋氨酸(Met342 )。结论 :克隆得到中国人ANG基因片段 。
- 范天黎姜国忠牛向丽谢华薛乐勋
- 关键词：血管抑素纤溶酶原遗传多态性
- 核基质结合区提高报告基因在稳定转化的杜氏盐藻中的表达被引量：7
- 2007年
- 前期的研究从杜氏盐藻(Dunaliella salina)中分离出一核基质结合区(matrix attachment region,MAR)片段---DSM1.实验证实,它在体外能与核基质结合且具有MAR的典型特征.为研究其在转基因盐藻中的作用,构建了RbcS启动子驱动、氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因为报告基因及表达盒两侧含DSM1MAR的表达载体.电击法转化盐藻,随机挑选20株稳定转化的盐藻藻株,分析CAT酶活性.结果表明,在稳定转化的盐藻细胞中,MAR能使报告基因CAT的表达水平比对照藻株提高1.5倍,不同藻株之间个体表达的差异性也有所降低.
- 王天云薛乐勋姬祥王亚峰
- 关键词：核基质结合区基因沉默杜氏盐藻
- 拓扑替康对SKOV3细胞Survivin表达的调控被引量：2
- 2004年
- 目的 :观察不同浓度拓扑替康 (TPT)对人卵巢癌细胞系SKOV3中Survivin表达的影响。方法 :采用免疫组化和RT PCR方法 ,检测体外不同浓度TPT(0 .2 4 4 μg/L ,3.90 6 μg/L ,6 2 .5 μg/L ,1mg/L ,1 6mg/L ,1 2 8mg/L)作用于SKOV348h后SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 :随TPT浓度的增加 ,SKOV3细胞中SurvivinmRNA及蛋白的表达明显减少 ,呈正性剂量效应关系 (P <0 .0 5 )。结论 :TPT能够抑制卵巢癌细胞SKOV3中SurvivinmRNA和蛋白的表达。
- 史惠蓉郭玉忠李克虹陈志敏荆建红张钦宪
- 关键词：SURVIVIN拓扑替康卵巢癌SKOV3
- Shh和Ptch在食管鳞状细胞癌中的表达研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨食管鳞状细胞癌中Shh和Ptch的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测35例食管癌及癌旁组织中Shh和Ptch的表达情况。结果食管鳞癌中Shh和Ptch的表达阳性率分别为74.3%和68.6%,与正常组织相比Shh和Ptch在食管鳞癌组织中高表达。结论Shh和Ptch的高表达及Hh通路的激活参与了食管鳞癌的发生,可能是食管癌治疗的一个理想靶标。
- 王树俊张剑裘宋良杨观瑞张亚冰裘一兵张聚真孙豫杨静薛乐勋赵立群
- 关键词：食管鳞状细胞癌SHHPTCH免疫组化
- ERK1和P38在食管鳞癌组织中的表达被引量：10
- 2006年
- 目的探讨人食管鳞癌中ERK1和P38蛋白的表达情况。方法应用免疫组织化学方法检测35例人中晚期食管鳞癌及其癌旁正常黏膜(其中15例包括早期癌)中有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员ERK1和P38的表达情况。结果ERK1和P38在中晚期鳞癌中的表达高于早期癌和正常黏膜,有统计学差异(P<0.01),P38的表达与性别、肿瘤大小、肿瘤位置及临床分期无明显相关(P>0.05),与有无淋巴结转移相关(P<0.01),ERK1的表达与上述临床病理特征无明显相关(P>0.05)。结论中晚期食管鳞癌中ERK1和P38处于过度表达状态,参与食管癌的发生、发展和转移。
- 张剑王树俊裘宋良杨观瑞张亚冰裘一兵张聚真孙豫杨静薛乐勋赵立群
- 关键词：食管鳞状细胞癌P38免疫组织化学
