南通医学院神经科学研究所江苏省神经再生重点实验室
- 作品数：71 被引量：150H指数：8
- 相关作者：崔学芝陈罡强亮吴坚周艳更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院基因研究中心上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用被引量：2
- 2003年
- 为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。
- 沈爱国龚蕾蕾丁斐严美娟王汉洲顾建新
- 关键词：地高辛标记小鼠RNA探针
- 神经再生素激活PC12细胞ERK1/2的实验研究被引量：10
- 2003年
- 本实验初步探讨了神经再生素 ( NRF)作用于 PC12细胞的信号传导途径。采用 MTT法检测 NRF对无血清培养的PC12细胞存活率的影响 ;用磷酸化的 Elk单克隆抗体 ,通过 Western blot法观察 NRF的不同浓度 ( 10、10 0、10 0 0 ng/ m l)及不同作用时间 ( 0 min、15 min、3 0 min、1h、2 h)对无血清培养的 PC12细胞 ERK1/ 2活性的影响 ;还运用 MEK1/ 2阻断剂 U0 12 6,观察NRF激活 ERK1/ 2是否需要其上游信号蛋白 MEK1/ 2的激活。结果表明 ,NRF作用于无血清培养的 PC12细胞 ,可以激活ERK1/ 2 ,存在明显的剂量效应关系和时间依赖作用 ,在 10 0 0 ng/ ml浓度下最大 ,作用 2 h时达峰值 ;U0 12 6作用后 ,可抑制 NRF作用于 PC12细胞引起的 ERK1/ 2的激活。由此可见 ,NRF对无血清培养的 PC12细胞具有保护作用 ,可能通过激活 ERK1/ 2磷酸化级联途径来介导这些作用。
- 强亮顾星星丁斐
- 关键词：神经再生素U0126PCI2细胞信号传导途径
- 大鼠损伤神经组织中Tropic1808基因相关蛋白的亲和层析法纯化
- 2002年
- 目的 :纯化大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的蛋白。方法 :将 Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体与 CNBr- activated Sepharose 4 B交联 ,用亲和层析的方法 ,提取在大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic180 8基因特异表达的蛋白 ,并将纯化的蛋白进行 SDS- PAGE分析。结果 :(1)经层析系统紫外检测 ,亲和层析后洗脱 ,在 2 80 nm波长处获得两个不同的紫外吸收峰。 (2 )亲和层析的洗脱液 ,经冷冻浓缩 ,SDS- PAGE分析 ,出现4 3.0 k Da、32 .0 k Da、31.0 k Da和 14 .4 k Da蛋白条带 ,其中在 32 .0 k Da的蛋白条带与预期的 Tropic180 8基因在组织中的编码蛋白基本相符 ,而 4 3.0 k Da、31.0 k Da、14 .4 k Da蛋白 ,预测为 Tropic 180 8基因在大鼠损伤坐骨神经组织中表达的相关蛋白。结论 :用亲和层析的方法 ,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的相关蛋白 。
- 姚登兵王云丹陈雪丁斐
- 关键词：TROPIC损伤坐骨神经相关蛋白单克隆抗体SDS-PAGE
- 人工组织神经移植物桥接狗缺损坐骨神经后腓肠肌内琥珀酸脱氢酶表达含量的变化被引量：2
- 2002年
- 目的 :了解人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接狗坐骨神经缺损后相应腓肠肌形态与酶的变化。方法 :人工组织神经桥接修复狗的坐骨神经 30 mm缺损为实验组 ,自体神经桥接或神经缺损的为对照组 I或 II。术后 6个月时取腓肠肌 ,按 Nitro- BT法显示琥珀酸脱氢酶光镜标本。图像分析仪分析琥珀酸脱氢酶 (SDH)染色后灰度值及腓肠肌截面积。结果 :实验组腓肠肌 SDH的灰度值及截面积均与对照组 II有明显差别 ,而与对照组 I无明显差别。结论 :人工组织神经修复缺损神经后 ,重新支配靶器官 ,使腓肠肌萎缩明显减弱 ,琥珀酸脱氢酶活性的下降也明显减轻。
- 林巍巍张沛云王晓冬吴坚
- 关键词：神经缺损腓肠肌琥珀酸脱氢酶
- 正、反义β1,4半乳糖基转移酶-I表达质粒的构建
- 2002年
- 目的 :为了探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 - I(β1,4 - galactosyltransferase I,β- 1,4 - Gal T- 1)表达水平的生物学意义。方法 :通过分子生物学手段 ,构建正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。:设计β- 1,4 - Gal T- I全长引物 ;提取小鼠脑总 RNA,通过 RT- PCR方法 ,得到全长 β- 1,4 - Gal T- I基因片段 ,将其克隆到 p GEM- T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将β- 1,4 - Gal T- I全长序列克隆到 pc DNA3.1表达载体中。设计反义引物 ,以 p GEM- β- 1,4 - Gal T- I质粒为模板 ,将 PCR产物克隆到 pc DNA3.1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,实验得到了正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。结论 :正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β- 1,4 - Gal T-
- 沈爱国姚登兵丁斐王汉洲顾建新
- 关键词：逆转录-聚合酶链反应小鼠
- p75神经营养素受体在新生和成年大鼠背根神经节中的不同表达
- 2002年
- 目的 :研究神经生长因子低亲和力受体 p75 NTR在新生和成年大鼠背根神经节中的表达 ,以探讨p75 NTR在背根神经节神经元中的作用。方法 :取新生和 3月龄大鼠背根神经节 ,免疫组化 ABC法观察 p75 NTR在神经元中的分布和表达。结果 :新生大鼠背根神经节中可见较多的 p75 NTR阳性反应神经元 ,免疫反应产物主要位于胞浆。成年大鼠背根神经节大多数神经元有 p75 NTR阳性免疫反应产物 ,主要位于细胞核。结论 :p75 NTR在新生和成年大鼠背根神经节神经元中表现为不同表达方式 。
- 严志强徐邦生衣昕胡亚娥
- 关键词：背根神经节
- 大鼠海马组织中神经元型一氧化氮合酶基因克隆
- 2003年
- 目的 :克隆胚胎大鼠海马组织中神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)基因。方法 :采用RT -PCR法 ,从胚胎大鼠海马组织mRNA中扩增nNOS基因CDS区片段 ,克隆入T载体 ,筛选阳性克隆、酶切签定并经序列测定。结果 :RT -PCR法扩增出一特异产物与预期长度 2 4 0bp相符 ,DNA序列测序的结果与GenBank的序列 (U6 730 9)比较 ,所克隆的nNOS基因与其中的 2 4 0bp完全相同 ,与nNOS基因 10 0 %同源。结论 :采用RT
- 严美娟丁斐
- 关键词：海马组织一氧化氮合酶基因克隆
- 神经再生素对神经细胞生长影响的实验研究被引量：2
- 2002年
- 目的 :探讨神经再生素 (NRF)对离体培养的 PC12细胞、背根神经节细胞、大脑皮层细胞生长影响的分子生物学机制。方法 :采用细胞体外培养、半定量 RT- PCR、Western blot方法 ,观察和比较 NRF组 (添加 NRF)、NGF组 (添加 NGF)和空白对照组 (基础培养基 )中细胞生存状况及相关基因 m RNA及其蛋白水平的表达变化。结果 :NRF作用于离体培养的 PC12细胞 ,可促使其分化 ;作用于背根神经节细胞 ,GAP- 4 3和 NF- L m RNA表达在不同时间呈不同程度的上调 ;作用于大脑皮层细胞 ,GAP- 4 3和 NF蛋白亦比对照组表达量为高。结论 :NRF具有维持细胞生存和促进神经细胞突起生长的作用 ,并可使神经元 GAP- 4 3和 NF m RNA表达及其蛋白合成上调。
- 刘梅强亮王林芳丁斐
- 关键词：神经再生素神经生长因子生长相关蛋白43神经丝蛋白神经细胞
- BDNF和p75 NTR在成年大鼠脊髓与背根神经节中的分布
- 2002年
- 目的 :研究脑源性神经营养因子 (Brain -DerivedNeurotrophicFactor ,BDNF)和低亲和力 75kD神经营养素受体 (LowAffinity 75kDNeurotrophinReceptor ,p75NTR)在正常成年大鼠脊髓和背根节中的分布 ,以探讨BDNF在神经系统中的作用方式。方法 :免疫组化ABC法观察BDNF和p75NTR在大鼠背根节和脊髓中的分布与表达。结果 :BDNF阳性免疫反应产物存在于背根节中、小神经元及脊髓前角运动神经元胞浆。p75NTR阳性免疫反应产物位于大部分背根节神经元的胞核及脊髓灰质神经元胞核。结论 :BDNF和p75NTR在脊髓和背根节中的不同表达与分布提示BDNF可能通过不同受体介导信号途径发挥其生物学作用。
- 严志强衣昕胡亚娥徐邦生
- 关键词：BDNFP75NTR脊髓背根神经节免疫组化ABC法
- 中药合剂神经生长液的促神经生长作用被引量：12
- 2003年
- 目的观察中药合剂神经生长液对神经元生长的促进作用,为神经生长液用于治疗神经损伤、促进损伤神经修复提供实验依据。方法新生大鼠背根神经节无血清培养,在基础培养液中加入神经生长液,观察实验组与空白对照组背根神经节细胞生长状况和突起生长的长度。胎鼠大脑皮质神经元无血清培养,在基础培养液中加入神经生长液,采用3-(4,5-dimethylthiaz-2-y1)-2,5-dijohenyltetrazoliumbromide(MTT)法,观察实验组、神经生长因子(阳性对照)、空白对照组大脑皮质神经元的生长状态。结果与对照组相比,实验组背根神经节细胞突起生长明显,突起长度(314±43)μm显著大于对照组(76±26)μm(F=313.69,P<0.01);与对照组相比,神经生长因子、神经生长液均可显著提高无血清培养条件下大脑皮质神经元对MTT的代谢率(F=82.54,P均<0.01),且存在明显的剂量效应关系。结论神经生长液在体外可促进背根神经节和大脑皮质神经元生长。
- 周鸣鸣丁斐强亮
- 关键词：中药合剂神经生长液神经损伤新生大鼠
